| 学位论文原创性声明 | 第1页 |
| 专利权声明 | 第2页 |
| 学位论文版权使用授权书 | 第2-3页 |
| 摘要 | 第3-4页 |
| ABSTRACT | 第4-8页 |
| 1 前言 | 第8-20页 |
| ·脂肪酶简介 | 第8页 |
| ·脂肪酶的水解特异性和脂肪酶稳定性 | 第8-11页 |
| ·脂肪酶的水解特异性 | 第8-10页 |
| ·脂肪酶稳定性 | 第10-11页 |
| ·脂肪酶的应用 | 第11-13页 |
| ·食品加工 | 第11页 |
| ·废纸脱墨 | 第11-12页 |
| ·制备化工产品和试剂 | 第12页 |
| ·工具酶 | 第12页 |
| ·药物和化妆品 | 第12页 |
| ·手性化合物制备 | 第12-13页 |
| ·脱脂 | 第13页 |
| ·脂肪酶的研究进展 | 第13-16页 |
| ·枯草芽孢杆菌表达系统概述 | 第16-18页 |
| ·枯草芽孢杆菌的优越性 | 第16页 |
| ·外源蛋白的分泌表达 | 第16-17页 |
| ·信号肽和信号肽酶 | 第17-18页 |
| ·铜绿假单胞菌脂肪酶的研究 | 第18页 |
| ·本论文的立论依据及研究内容 | 第18-20页 |
| ·立论依据 | 第19页 |
| ·论文研究的主要内容 | 第19-20页 |
| 2 材料与方法 | 第20-34页 |
| ·实验材料 | 第20-21页 |
| ·菌种 | 第20页 |
| ·质粒 | 第20页 |
| ·主要试剂和工具酶 | 第20-21页 |
| ·主要仪器和设备 | 第21-22页 |
| ·培养基和溶液 | 第22-25页 |
| ·培养基 | 第22-23页 |
| ·相关溶液 | 第23-25页 |
| ·实验方法 | 第25-26页 |
| ·产脂肪酶菌株的分离 | 第25页 |
| ·菌种的鉴定 | 第25-26页 |
| ·脂肪酶活力测定 | 第26-27页 |
| ·酶学性质研究 | 第27-28页 |
| ·酶作用最适pH | 第27页 |
| ·酶作用最适温度 | 第27页 |
| ·pH稳定性 | 第27-28页 |
| ·酶的热稳定性 | 第28页 |
| ·紫外线致死曲线的制作 | 第28-29页 |
| ·铜绿假单胞菌菌株总DNA的提取 | 第29页 |
| ·连接产物电转化大肠杆菌及鉴定 | 第29-31页 |
| ·连接反应 | 第29页 |
| ·电转用细胞的制备 | 第29-30页 |
| ·电击转化 | 第30页 |
| ·大肠杆菌重组子质粒的少量提取 | 第30-31页 |
| ·质粒和PCR产物的酶切 | 第31页 |
| ·枯草芽孢杆菌感受态的制备及转化 | 第31-32页 |
| ·枯草芽孢杆菌中质粒的提取 | 第32页 |
| ·重组枯草杆菌的表达蛋白的检测 | 第32-33页 |
| ·SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第33-34页 |
| 3 结果与讨论 | 第34-58页 |
| ·菌株的分离纯化 | 第34-35页 |
| ·菌株形态特征 | 第35页 |
| ·菌株生理生化鉴定结果 | 第35-36页 |
| ·脂肪酶粗酶液酶学性质 | 第36-39页 |
| ·酶活测定 | 第36页 |
| ·pH值对酶活的影响 | 第36-37页 |
| ·温度对酶活的影响 | 第37-38页 |
| ·酶的pH稳定性 | 第38页 |
| ·酶的热稳定性 | 第38-39页 |
| ·紫外诱变 | 第39-41页 |
| ·菌株PL-3的紫外线致死率曲线绘制 | 第39页 |
| ·诱变结果 | 第39-41页 |
| ·脂肪酶基因扩增和克隆载体pUCm-T-LipA’的构建 | 第41-48页 |
| ·大肠杆菌克隆载体pUCm-T | 第41页 |
| ·脂肪酶基因的PCR扩增 | 第41-43页 |
| ·克隆载体pUCm-T-LipA’的构建 | 第43-44页 |
| ·连接产物电转化大肠杆菌 | 第44页 |
| ·重组子质粒的酶切鉴定 | 第44页 |
| ·重组子的PCR鉴定 | 第44-45页 |
| ·脂肪酶基因序列分析 | 第45-46页 |
| ·脂肪酶氨基酸序列比对 | 第46-48页 |
| ·脂肪酶基因在枯草芽孢杆菌中的分泌表达 | 第48-58页 |
| ·PCR扩增脂肪酶成熟肽基因LipA | 第48页 |
| ·PCR扩增脂肪酶分子伴侣基因LipB | 第48-49页 |
| ·枯草芽孢杆菌表达质粒pWB980图谱 | 第49页 |
| ·重组分泌表达载体pWB980-lipAB的构建 | 第49-50页 |
| ·重组子酶切鉴定 | 第50-51页 |
| ·分子伴侣基因序列分析 | 第51-53页 |
| ·分子伴侣氨基酸序列分析 | 第53-54页 |
| ·脂肪酶在枯草芽孢杆菌中的分泌表达检测 | 第54-58页 |
| 4 结论 | 第58-59页 |
| ·小结 | 第58页 |
| ·论文的创新点 | 第58-59页 |
| 5 展望 | 第59-60页 |
| 6 致谢 | 第60-61页 |
| 7 参考文献 | 第61-68页 |
| 8 攻读学位期间所发表的论文 | 第68页 |