中文摘要 | 第1-6页 |
英文摘要 | 第6-9页 |
符号、缩略语词表 | 第9-10页 |
前言 | 第10-11页 |
第一章 文献综述 | 第11-24页 |
第二章 GHR 基因的扩增及差异表达基因的筛选与克隆 | 第24-43页 |
1 材料与方法 | 第24-33页 |
·实验材料 | 第24-25页 |
·实验动物 | 第24页 |
·主要试剂 | 第24页 |
·主要仪器 | 第24页 |
·引物设计 | 第24-25页 |
·实验方法 | 第25-33页 |
·样品的处理 | 第25页 |
·总RNA 的提取及检测 | 第25-26页 |
·反转录合成cDNA 第一条链 | 第26-27页 |
·GHR 基因PCR 及差异显示PCR | 第27-28页 |
·1096非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)分析 | 第28页 |
·目的条带的回收 | 第28页 |
·差异条带的二次扩增 | 第28页 |
·目的条带的回收及纯化 | 第28-29页 |
·PCR 产物的克隆 | 第29-31页 |
·差异片段的测序及生物信息学分析 | 第31页 |
·Northern 杂交 | 第31-33页 |
2 结果 | 第33-40页 |
·RNA 样品的制备 | 第33-34页 |
·GHR cDNA 扩增 | 第34页 |
·差异表达基因的筛选 | 第34-36页 |
·差异条带的二次扩增及纯化 | 第36-37页 |
·目的基因的克隆 | 第37页 |
·差异表达基因片段的序列分析 | 第37-39页 |
·Northern Blot 鉴定差异片段的真实性 | 第39-40页 |
3 讨论与小结 | 第40-43页 |
第三章 组织原位杂交 | 第43-52页 |
1. 材料与方法 | 第43-47页 |
·实验材料及试剂 | 第43页 |
·实验材料 | 第43页 |
·主要试剂 | 第43页 |
·实验方法 | 第43-47页 |
·载玻片的处理 | 第43-44页 |
·石蜡切片的制备 | 第44页 |
·地高辛cDNA 探针标记 | 第44页 |
·杂交前准备工作 | 第44-45页 |
·杂交前处理 | 第45-46页 |
·预杂交及杂交 | 第46页 |
·杂交后洗涤 | 第46页 |
·杂交信号的检测 | 第46-47页 |
2 结果与分析 | 第47-49页 |
·绵羊毛囊活性分析 | 第47页 |
·生长激素受体mRNA 在绵羊毛囊的定位 | 第47-48页 |
·差异表达基因mRNA 在绵羊毛囊的定位 | 第48-49页 |
3 小结与讨论 | 第49-52页 |
·固定液的选择及固定时间的影响 | 第50页 |
·探针标记物的选择 | 第50页 |
·取材与固定对杂交的影响 | 第50-51页 |
·增强组织的通透性和核酸探针的穿透性 | 第51页 |
·探针和杂交温度对杂交信号的影响 | 第51页 |
·脱片的处理 | 第51页 |
·防止 RNase 污染 | 第51-52页 |
结论与展望 | 第52-53页 |
参考文献 | 第53-58页 |
附录 | 第58-64页 |
附录1 | 第58-60页 |
附录2 | 第60-61页 |
附录3 | 第61-62页 |
附录4 | 第62-63页 |
附录5 | 第63-64页 |
致谢 | 第64-65页 |
作者简历 | 第65-66页 |
导师评阅表 | 第66页 |