| 第一章 针叶树遗传转化研究进展 | 第1-23页 |
| 1. 针叶树遗传转化方法 | 第9-12页 |
| ·农杆菌介导的针叶树遗传转化 | 第9-10页 |
| ·基因枪法 | 第10-11页 |
| ·电激法 | 第11-12页 |
| ·PEG 法 | 第12页 |
| 2. 报告基因 GUS 在植物转基因中的应用 | 第12-15页 |
| ·GUS 基因的来源 | 第12-13页 |
| ·GUS 基因的酶学特性及其化学分析 | 第13页 |
| ·GUS 在针叶树转基因中的应用 | 第13-15页 |
| 3.G AFP 在遗传转化中的应用 | 第15页 |
| 4. 本实验相关研究内容的综述 | 第15-20页 |
| ·转化实验中外植体的选择 | 第15-16页 |
| ·TDZ 对外植体分化的影响 | 第16页 |
| ·预培养对转化的影响 | 第16-17页 |
| ·共培养对转化的影响 | 第17页 |
| ·AS 对转化的影响 | 第17-18页 |
| ·pH 值对转化的影响 | 第18页 |
| ·菌液浓度对转化的影响 | 第18页 |
| ·浸染时间对转化的影响 | 第18页 |
| ·活化方式对转化的影响 | 第18-19页 |
| ·瞬时表达研究与稳定表达研究 | 第19页 |
| ·转化实验中 Km 的应用 | 第19页 |
| ·Km 添加的时机与方式对产生 Km~r 芽的影响 | 第19-20页 |
| ·抑菌素的作用 | 第20页 |
| 5. 针叶树遗传转化存在的主要问题及解决办法 | 第20-21页 |
| 6. 本研究目的及意义 | 第21-23页 |
| 第二章 杉木遗传转化受体系统的建立 | 第23-32页 |
| 1、前言 | 第23页 |
| 2、材料和方法 | 第23-24页 |
| ·实验材料 | 第23页 |
| ·实验方法 | 第23-24页 |
| ·外植体的获得 | 第23页 |
| ·培养基 | 第23页 |
| ·培养条件 | 第23页 |
| ·数据统计方法 | 第23-24页 |
| 3. 实验结果与分析 | 第24-30页 |
| ·6-BA 浓度对芽诱导的影响 | 第24-25页 |
| ·TDZ 浓度对芽诱导的影响 | 第25页 |
| ·蔗糖浓度对芽诱导的影响 | 第25-26页 |
| ·预培养时间对芽诱导的影响 | 第26-27页 |
| ·Cef 对芽诱导的影响 | 第27-28页 |
| ·Km 对芽诱导及伸长生长的影响 | 第28-29页 |
| ·Km 对生根的影响 | 第29-30页 |
| 4. 总结与讨论 | 第30-32页 |
| ·细胞分裂素浓度与芽的伸长生长 | 第30页 |
| ·接受转化的细胞与再生细胞的一致性 | 第30-31页 |
| ·芽的发育阶段与 Km 抗性 | 第31-32页 |
| 第三章 杉木转基因瞬时表达研究 | 第32-42页 |
| 1. 前言 | 第32页 |
| 2 材料和方法 | 第32-35页 |
| ·实验材料 | 第32-33页 |
| ·转基因受体材料 | 第32页 |
| ·试剂 | 第32页 |
| ·质粒和菌株 | 第32-33页 |
| ·培养基 | 第33页 |
| ·仪器与设备 | 第33页 |
| ·实验方法 | 第33-35页 |
| ·杉木茎段遗传转化方法 | 第33-35页 |
| ·菌液的制备 | 第33页 |
| ·受体材料的预处理 | 第33页 |
| ·侵染 | 第33-34页 |
| ·设置正、负对照 | 第34页 |
| ·侵染茎段的 GUS 活性检测 | 第34-35页 |
| 3. 实验结果与分析 | 第35-39页 |
| ·被侵染茎段的 GUS 活性检测 | 第35-39页 |
| ·关于瞬时表达率的指标的探讨 | 第35页 |
| ·影响杉木茎段瞬时表达率的因素 | 第35-39页 |
| ·预培养时间对瞬时表达率的影响 | 第35-36页 |
| ·共培养时间对瞬时表达率的影响 | 第36-37页 |
| ·共培养基中 AS 浓度对瞬时表达率的影响 | 第37页 |
| ·共培养基的pH 对瞬时表达率的影响 | 第37-38页 |
| ·浸染菌液的浓度对瞬时表达率的影响 | 第38页 |
| ·浸染时间对瞬时表达率的影响 | 第38-39页 |
| ·活化培养基对瞬时表达率的影响 | 第39页 |
| 4. 转化条件的优化 | 第39页 |
| 5. 总结 | 第39-42页 |
| 第四章 杉木转天麻抗真菌蛋白研究 | 第42-54页 |
| 1. 前言 | 第42页 |
| 2. 材料和方法 | 第42-46页 |
| ·实验材料 | 第42-43页 |
| ·转基因受体材料 | 第42页 |
| ·试剂 | 第42页 |
| ·质粒与菌株 | 第42页 |
| ·PCR 扩增引物 | 第42-43页 |
| ·培养基 | 第43页 |
| ·仪器与设备 | 第43页 |
| ·实验方法 | 第43-46页 |
| ·碱法少量提取质粒 DNA | 第43-44页 |
| ·农杆菌 EHA105 感受态细胞的制备 | 第44页 |
| ·液氮冻融法转化农杆菌 EHA105 | 第44页 |
| ·农杆菌转化子的检测时机 | 第44页 |
| ·杉木茎段遗传转化方法 | 第44-45页 |
| ·Km 添加的时机与方式对产生 Km~r 芽的影响 | 第45页 |
| ·关于稳定表达的指标的探讨 | 第45页 |
| ·Km~r 芽的分子检测 | 第45-46页 |
| ·Km~r 芽的总 DNA 提取 | 第45-46页 |
| ·PCR 检测 | 第46页 |
| 3. 实验结果与分析 | 第46-51页 |
| ·提取质粒pBin35SGAFP 并转化农杆菌 EHA105 | 第46-47页 |
| ·AS 对转化的影响 | 第47-51页 |
| ·AS 浓度对茎段分化率的影响 | 第47-48页 |
| ·AS 对菌体的影响 | 第48页 |
| ·各个 AS 浓度下茎段材料选取方式不同对其分化率的影响 | 第48-49页 |
| ·“茎尖”与“茎段”型外植体分化率的比较 | 第48-49页 |
| ·“茎尖”与“茎段”型外植体褐化率的比较 | 第49页 |
| ·各个 AS 浓度下暗培养对茎段分化的影响 | 第49-51页 |
| ·培养方式对茎段分化率的影响 | 第50页 |
| ·培养方式对茎段状态的影响 | 第50-51页 |
| ·Km~r芽的获得 | 第51页 |
| 4. 总结与讨论 | 第51-54页 |
| 第五章 主要结论和进一步研究的展望 | 第54-56页 |
| 1. 主要结论 | 第54-55页 |
| ·转基因受体系统的建立 | 第54页 |
| ·瞬时表达实验 | 第54页 |
| ·稳定表达实验 | 第54-55页 |
| 2. 存在问题及进一步研究的展望 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-62页 |
