| 中文摘要 | 第1-15页 |
| 英文摘要 | 第15-20页 |
| 缩略语说明 | 第20-23页 |
| 第一部分 文献综述 | 第23-65页 |
| 第一章 转基因产品的安全性评价 | 第23-44页 |
| 1 全球转基因作物种植情况 | 第23-25页 |
| 2 转基因产品的安全性问题 | 第25-27页 |
| 2．1 转基因产品的安全性问题引起争议 | 第25-26页 |
| 2．2 转基因产品对人体健康可能产生影响 | 第26-27页 |
| 2．3 转基因产品对环境生态可能产生影响 | 第27页 |
| 3 有关国家对转基因产品的标识管理制度 | 第27-31页 |
| 3．1 欧盟 | 第28-30页 |
| 3．1．1 90/220/EEC | 第28-29页 |
| 3．1．2 258/97/EC | 第29页 |
| 3．1．3 1139／98／EC | 第29页 |
| 3．1．4 258／97／EC和90／220／EEC两个法规之间的相互作用 | 第29-30页 |
| 3．1．5 50／2000／EC | 第30页 |
| 3．2 其它组织和国家 | 第30-31页 |
| 4 有关国际组织对转基因产品进行安全性评价方案 | 第31-34页 |
| 4．1 经济发展合作组织(OECD) | 第31-32页 |
| 4．2 国际食品生物技术委员会(IFBC) | 第32页 |
| 4．3 联合国粮农组织／世界卫生组织(FAO／WHO) | 第32-33页 |
| 4．4 国际生命科学会(ILSI) | 第33-34页 |
| 5 转基因产品的安全性评价内容 | 第34-40页 |
| 5．1 对转基因背景资料要进行详细审查 | 第34页 |
| 5．1．1 转基因所用的方法 | 第34页 |
| 5．1．2 新基因的功能与调控 | 第34页 |
| 5．1．3 新基因在转基因产品中的特性 | 第34页 |
| 5．1．4 遗传稳定性 | 第34页 |
| 5．2 要建立转基因产品的检测方法 | 第34-35页 |
| 5．3 抗抗生素标记基因的安全性问题 | 第35-36页 |
| 5．4 毒理学问题 | 第36-37页 |
| 5．4．1 新蛋白的潜在毒性 | 第36页 |
| 5．4．2 新蛋白潜在的致敏性 | 第36-37页 |
| 5．5 营养问题 | 第37-38页 |
| 5．5．1 营养成分分析 | 第37页 |
| 5．5．2 抗营养素的水平 | 第37-38页 |
| 5．6 对生态环境影响的风险评价 | 第38-40页 |
| 5．6．1 转基因作物本身可能演化为杂草的风险 | 第38页 |
| 5．6．2 转基因的花粉传播引起基因飘移的风险 | 第38-39页 |
| 5．6．3 转基因作物与其野生亲缘种间杂种的形成 | 第39页 |
| 5．6．4 Bt基因对非目标生物的危害及生物多样性的影响 | 第39-40页 |
| 5．6．5 抗病毒转基因作物可能存在的风险 | 第40页 |
| 6 转基因抗草甘磷除草剂大豆安全性评价研究进展 | 第40-44页 |
| 6．1 转基因抗草甘磷除草剂大豆背景知识介绍 | 第40-41页 |
| 6．2 一般安全性问题 | 第41页 |
| 6．3 毒理学问题 | 第41-43页 |
| 6．3．1 天然产生的毒素水平 | 第41页 |
| 6．3．2 新蛋白潜在的毒性 | 第41-42页 |
| 6．3．3 天然产生致敏性蛋白的水平 | 第42页 |
| 6．3．4 新蛋白可能的致敏性 | 第42页 |
| 6．3．5 营养问题 | 第42-43页 |
| 6．4 对生态环境影响的评价 | 第43-44页 |
| 第二章 转基因产品检测研究进展 | 第44-65页 |
| 1 转基因产品检测是安全性评价的重要工作之一 | 第44页 |
| 2 商业化种植的转基因作物中转入外源基因的有关信息 | 第44-47页 |
| 3 对转基因产品进行检测需要建立规范的实验室 | 第47-48页 |
| 3．1 试剂贮存和准备区 | 第47-48页 |
| 3．2 样品制备区 | 第48页 |
| 3．3 核酸制备区 | 第48页 |
| 3．4 扩增区 | 第48页 |
| 3．5 扩增产物分析区 | 第48页 |
| 4 转基因产品的取样 | 第48页 |
| 5 DNA提取 | 第48-50页 |
| 5．1 CTAB法 | 第49页 |
| 5．2 SDS方法 | 第49页 |
| 5．3 试剂盒法 | 第49页 |
| 5．4 核酸提取液中DNA浓度的测定 | 第49-50页 |
| 6 定性PCR检测 | 第50-55页 |
| 6．1 定性PCR原理 | 第50页 |
| 6．2 内源参照基因的检测 | 第50-52页 |
| 6．3 转基因产品的筛选检测 | 第52-54页 |
| 6．4 转基因产品外源目的基因的检测 | 第54-55页 |
| 7 转基因产品的定量检测 | 第55-58页 |
| 7．1 QC-PCR | 第55-56页 |
| 7．2 实时荧光PCR | 第56-58页 |
| 8 基因芯片检测方法 | 第58-61页 |
| 8．1 基因芯片的检测原理 | 第58页 |
| 8．2 基因芯片的制备方法 | 第58-59页 |
| 8．2．1 原位合成法制备寡核苷酸芯片 | 第59页 |
| 8．2．2 合成后点样法制备寡核苷酸芯片 | 第59页 |
| 8．2．3 cDNA芯片的制备 | 第59页 |
| 8．3 基因芯片实验操作步骤 | 第59-60页 |
| 8．3．1 样品制备和标记 | 第59-60页 |
| 8．3．2 杂交反应 | 第60页 |
| 8．3．3 信号检测和结果分析 | 第60页 |
| 8．4 基因芯片检测转基因产品的研究进展 | 第60-61页 |
| 9 蛋白质检测方法 | 第61-65页 |
| 9．1 ELISA原理 | 第62页 |
| 9．2 试纸条方法 | 第62-65页 |
| 第二部分 转基因产品检测方法研究 | 第65-132页 |
| 第三章 转基因产品的定性检测方法研究 | 第65-108页 |
| 1 材料与方法 | 第65-74页 |
| 1．1 材料 | 第65页 |
| 1．2 试剂 | 第65-67页 |
| 1．2．1 DNA提取的有关试剂 | 第65-66页 |
| 1．2．2 PCR反应的有关试剂 | 第66页 |
| 1．2．3 PCR产物克隆的有关试剂 | 第66-67页 |
| 1．3 仪器设备 | 第67页 |
| 1．4 总DNA的提取 | 第67-68页 |
| 1．4．1 酚-氯仿抽提法 | 第67页 |
| 1．4．2 试剂盒抽提法 | 第67-68页 |
| ·PCR测试 | 第68-74页 |
| 1．5．1 检测引物 | 第68-71页 |
| 1．5．1．1 筛选检测引物 | 第68-69页 |
| 1．5．1．2 检测转基因油菜籽的引物 | 第69页 |
| 1．5．1．3 检测转基因抗草甘膦油菜籽RT73品系的引物 | 第69-70页 |
| 1．5．1．4 检测转基因抗草甘膦大豆的引物 | 第70页 |
| 1．5．1．5 检测转基因玉米的引物 | 第70页 |
| 1．5．1．6 检测转基因棉花的引物 | 第70-71页 |
| 1．5．2 PCR反应体系 | 第71-72页 |
| 1．5．2．1 普通定性PCR | 第71页 |
| 1．5．2．2 实时荧光PCR | 第71-72页 |
| 1．5．2．3 TAIL-PCR | 第72页 |
| 1．5．3 PCR反应循环参数 | 第72页 |
| 1．5．4 定性PCR产物的凝胶电泳检测 | 第72-73页 |
| 1．5．4．1 配制琼脂糖凝胶 | 第72-73页 |
| 1．5．4．2 点样 | 第73页 |
| 1．5．4．3 电泳条件 | 第73页 |
| 1．5．4．4 结果记录 | 第73页 |
| 1．5．5 PCR产物的克隆 | 第73-74页 |
| 1．5．5．1 连接反应 | 第73页 |
| 1．5．5．2 连接产物的转化 | 第73页 |
| 1．5．5．3 质粒微量制备 | 第73-74页 |
| 1．5．6 PCR产物和克隆质粒测序 | 第74页 |
| 2 结果 | 第74-105页 |
| 2．1 转基因产品的定性筛选检测 | 第74-76页 |
| 2．2 转基因油菜籽的定性检测 | 第76-100页 |
| 2．2．1 转基因油菜籽中转入的外源基因的有关信息 | 第76-77页 |
| 2．2．2 转基因抗草甘膦和抗草丁膦油菜抗除草剂性状的鉴定 | 第77页 |
| 2．2．3 油菜内源参照基因PE3-PEPCase的检测 | 第77-81页 |
| 2．2．3．1 油菜内源参照基因PE3-PEPCase的序列同源性分析 | 第77-78页 |
| 2．2．3．2 检测PE3-PEPCase基因的引物特异性分析 | 第78-80页 |
| 2．2．3．3 被扩增的靶序列特异性分析 | 第80页 |
| 2．2．3．4 PE3-PEPCase基因的检测 | 第80-81页 |
| 2．2．4 转基因油菜籽的定性检测 | 第81-100页 |
| 2．2．4．1 FMV 35S启动子基因的检测 | 第82-84页 |
| 2．2．4．2 CP4-EPSPS基因的检测研究 | 第84-89页 |
| 2．2．4．3 GOX基因的检测研究 | 第89-95页 |
| 2．2．4．4 BAR(PAT)基因的检测 | 第95-96页 |
| 2．2．4．5 BARNASE基因的检测 | 第96-97页 |
| 2．2．4．6 BARSTAR基因的检测 | 第97-98页 |
| 2．2．4．7 抗草甘膦RT73油菜品系的检测 | 第98-100页 |
| 2．3 转基因玉米的检测 | 第100-102页 |
| 2．4 转基因大豆的检测 | 第102页 |
| 2．5 转基因抗虫保铃棉(Boligard cotton)的检测 | 第102-104页 |
| 2．6 本研究成果的应用 | 第104-105页 |
| 3 讨论 | 第105-108页 |
| 3．1 转基因产品检测方法应分三个层面来建立 | 第105-106页 |
| 3．2 本研究今后应继续深入研究的内容 | 第106-108页 |
| 3．2．1 寻找其他作物的内源参照基因 | 第106页 |
| 3．2．2 扩大转基因产品检测的翻盖面 | 第106-107页 |
| 3．2．3 加强转基因产品检测方法的检测下限研究 | 第107页 |
| 3．2．4 加强复合PCR、实时荧光定性PCR和基因芯片检测方法研究 | 第107-108页 |
| 第四章 转基因产品的定量检测方法研究 | 第108-125页 |
| 1 材料与方法 | 第108-113页 |
| 1．1 材料 | 第108-109页 |
| 1．1．1 转基因抗草甘膦除草剂大豆参照样品和待测样品 | 第108页 |
| 1．1．2 转基因和Bt176抗虫玉米参照样品和待测样品 | 第108页 |
| 1．1．3 转基因抗草甘膦油菜籽纯品和待测样品 | 第108-109页 |
| 1．2 仪器 | 第109页 |
| 1．3 试剂 | 第109-110页 |
| 1．4 样品总DNA的提取 | 第110页 |
| 1．4．1 大豆和油菜籽样品DNA的提取 | 第110页 |
| 1．4．2 玉米样品DNA的提取 | 第110页 |
| 1．5 参照DNA的制备 | 第110-111页 |
| 1．5．1 转基因大豆40-3-2参照DNA的制备 | 第110页 |
| 1．5．2 转基因抗虫玉米Bt176参照DNA的制备 | 第110页 |
| 1．5．3 转基因抗草甘膦除草剂油菜RT73参照DNA的制备 | 第110-111页 |
| 1．6 实时荧光定量PCR检测 | 第111-112页 |
| 1．6．1 检测转基因大豆的引物和探针 | 第111页 |
| 1．6．2 检测转基因玉米的引物和探针 | 第111-112页 |
| 1．6．3 检测转基因油菜的引物和探针 | 第112页 |
| 1．7 定量PCR反应体系 | 第112-113页 |
| 1．8 定量PCR循环参数 | 第113页 |
| 2 结果 | 第113-123页 |
| 2．1 转基因产品定量检测的原理 | 第113页 |
| 2．2 转基因抗草甘膦除草剂大豆的定量检测 | 第113-117页 |
| 2．2．1 参照样品DNA外源基因和内源基因模板量的计算 | 第113-114页 |
| 2．2．2 参照DNA样品外源基因RRS的检测和标准曲线的制作 | 第114-115页 |
| 2．2．3 参照DNA样品内源基因Lectin的检测和标准曲线的制作 | 第115-116页 |
| 2．2．4 待测样品中转基因成分含量的计算 | 第116-117页 |
| 2．3 转基因Bt176玉米的定量检测 | 第117-120页 |
| 2．3．1 Bt176玉米参照样品的检测和标准曲线的绘制 | 第117-120页 |
| 2．3．2 待测样品的检测 | 第120页 |
| 2．4 抗草甘膦除草剂油菜RT73的定量检测 | 第120-123页 |
| 2．4．1 转基因抗草甘膦油菜籽的定量检测标准曲线的制作 | 第120-122页 |
| 2．4．2 待测样品中转基因抗草甘膦成分的定量检测 | 第122-123页 |
| 3 讨论 | 第123-125页 |
| 第五章 转基因油菜的基因芯片检测方法研究 | 第125-132页 |
| 1 材料与方法 | 第125-128页 |
| 1．1 仪器 | 第125页 |
| 1．2 材料和试剂 | 第125-126页 |
| 1．3 引物与探针 | 第126页 |
| 1．4 芯片的制备 | 第126-127页 |
| 1．5 样品DNA的提取 | 第127页 |
| 1．6 样品DNA的多重PCR扩增 | 第127页 |
| 1．7 芯片的杂交和扫描 | 第127-128页 |
| 2 结果 | 第128-131页 |
| 2．1 引物和探针设计及检测原理 | 第128-129页 |
| 2．2 油菜样品DNA的提取 | 第129页 |
| 2．3 芯片检测的特异性 | 第129-130页 |
| 2．4 重复性实验 | 第130页 |
| 2．5 灵敏度实验 | 第130-131页 |
| 3 讨论 | 第131-132页 |
| 参考文献 | 第132-139页 |
| 攻读博士学位期间和之前承担的课题和发表的论文 | 第139-141页 |
| 致谢 | 第141页 |
