| 中文摘要 | 第1-13页 |
| 英文摘要 | 第13-17页 |
| 缩略词 | 第17-18页 |
| 第一章 引言 | 第18-36页 |
| 1 芸薹属作物转基因技术研究进展 | 第19-25页 |
| ·农杆菌介导的叶盘转化法 | 第19-25页 |
| ·影响外植体再生体系建立的因素 | 第20-23页 |
| ·共培养阶段影响转化率的主要因素 | 第23-24页 |
| ·共培养之后的影响因素 | 第24-25页 |
| ·应用于芸薹属植物的其它转移基因方法 | 第25页 |
| 2 植物原位转化方法(In Planta Transformation)研究进展 | 第25-34页 |
| ·植物原位转化的方法 | 第26-30页 |
| ·种子共培养技术 | 第26-27页 |
| ·花粉管通道法(Pollen-Tube Pathway ) | 第27页 |
| ·植物雄性种系转化法(Plant Male Germ Line Transformation ) | 第27-28页 |
| ·浸花接种法(Flora Dip) | 第28-29页 |
| ·伤口接种法 | 第29-30页 |
| ·真空渗入法(Vacuum Infiltration Transformation) | 第30-34页 |
| ·发展概况 | 第30-31页 |
| ·真空渗入法的转化条件 | 第31-33页 |
| ·转化机理 | 第33-34页 |
| ·前景 | 第34页 |
| 3 本研究的目的和意义 | 第34-36页 |
| 第二章 真空渗入法获得转基因抗虫菜心及其遗传表达的研究 | 第36-56页 |
| 1 材料与方法 | 第37-42页 |
| ·材料 | 第37-38页 |
| ·植物材料 | 第37页 |
| ·工程菌 | 第37-38页 |
| ·试剂与仪器 | 第38页 |
| ·方法 | 第38-42页 |
| ·渗入转化液的制备 | 第38-39页 |
| ·菜心的真空转化 | 第39页 |
| ·转化后植株的管理 | 第39页 |
| ·转化株的筛选 | 第39-40页 |
| ·抗性株的鉴定 | 第40-41页 |
| ·遗传分析 | 第41-42页 |
| 2 结果与分析 | 第42-56页 |
| ·抗性转化株菜心的获得 | 第42-43页 |
| ·获得转化单株的种子需要量 | 第43-44页 |
| ·转化种子在亲本单株花序上的位置 | 第44页 |
| ·氯酚红鉴定 | 第44-45页 |
| ·PCR 鉴定 | 第45-46页 |
| ·抗性株基因组 DNA 的 Southern 杂交 | 第46-49页 |
| ·Southern Blotting 探针制作 | 第46-47页 |
| ·Southern 杂交 | 第47-49页 |
| ·处于结荚期的部分抗性植株 | 第49-50页 |
| ·抗性基因的遗传分离 | 第50-56页 |
| ·T2 代的 Basta 抗性分离 | 第50-51页 |
| ·T1 代植株测交后代的遗传分离 | 第51-52页 |
| ·转 pinⅡ基因的 T2 代植株的遗传与表达分析 | 第52-56页 |
| 第三章 真空渗入法转化菜心机理的研究 | 第56-75页 |
| 1 材料与方法 | 第56-59页 |
| ·材料 | 第56-57页 |
| ·植物材料 | 第56页 |
| ·工程菌 | 第56-57页 |
| ·试剂与仪器 | 第57页 |
| ·方法 | 第57-59页 |
| ·花蕾的结构 | 第57-58页 |
| ·石蜡切片法 | 第57-58页 |
| ·花蕾的形态观察 | 第58页 |
| ·转化植物的方法 | 第58页 |
| ·植物组织中农杆菌的培养 | 第58页 |
| ·GUS 表达载体构建技术路线 | 第58页 |
| ·组织化学染色 | 第58-59页 |
| ·真空渗入法转化菜心 | 第58页 |
| ·取样方式 | 第58-59页 |
| 2 结果与分析 | 第59-75页 |
| ·花蕾的直径与花蕾在花序中的位置之间的关系 | 第59页 |
| ·菜心的开花规律 | 第59-60页 |
| ·农杆菌在菜心植株体内的分布 | 第60-62页 |
| ·植株体内农杆菌的存活状况研究 | 第62-66页 |
| ·农杆菌在不同器官中的分布量 | 第62-63页 |
| ·农杆菌在植株体内的动态变化 | 第63-64页 |
| ·植株中农杆菌的生活力 | 第64-65页 |
| ·植物来源农杆菌的鉴定 | 第65-66页 |
| ·形态鉴定 | 第65页 |
| ·平板培养细菌的抗性鉴定 | 第65页 |
| ·农杆菌的分子鉴定 | 第65-66页 |
| ·农杆菌转化部位的组织化学定位 | 第66-71页 |
| ·转化载体 pBBB-GUS-intron 的构建 | 第66-70页 |
| ·目的基因 GUS 片断的制备与修饰 | 第66-67页 |
| ·载体 pBBBast 的酶切与修饰 | 第67-68页 |
| ·载体与目的基因的连接、转化大肠杆菌及鉴定 | 第68-69页 |
| ·新建载体转化农杆菌 | 第69-70页 |
| ·GUS组织化学定位染色结果 | 第70-71页 |
| ·菜心花蕾的解剖学研究 | 第71-75页 |
| 第四章 真空渗入法获得转双价抗虫基因大白菜的研究 | 第75-87页 |
| 1 材料与方法 | 第75-76页 |
| ·材料 | 第75-76页 |
| ·植物材料 | 第75页 |
| ·工程菌 | 第75页 |
| ·仪器与药品 | 第75-76页 |
| ·本试验所用仪器 | 第75页 |
| ·试剂药品 | 第75-76页 |
| ·方法 | 第76页 |
| ·转化工程液配制 | 第76页 |
| ·转化株的管理与筛选 | 第76页 |
| ·转化株鉴定 | 第76页 |
| ·试验方案 | 第76页 |
| ·转化株种子的收获方法 | 第76页 |
| ·可溶性蛋白含量测定、PINⅡ蛋白相对含量的测定方法 | 第76页 |
| 2 结果与分析 | 第76-87页 |
| ·大白菜转基因株的获得 | 第76-78页 |
| ·抗性株的分子鉴定 | 第78-83页 |
| ·抗性株的 PCR 鉴定 | 第78-79页 |
| ·目的基因的 Southern 鉴定 | 第79-80页 |
| ·植物基因组的酶切 | 第79页 |
| ·酶切 DNA 的电泳 | 第79页 |
| ·杂交与检测 | 第79-80页 |
| ·94-1 品种的 T1 代转化株的 RT-PCR 鉴定 | 第80-83页 |
| ·cDNA 获得 | 第81页 |
| ·cDNA 的 PCR | 第81-83页 |
| ·PINⅡ蛋白的检测 | 第83-85页 |
| ·可溶性蛋白的提取和测量 | 第83-84页 |
| ·PINⅡ蛋白测量反应体系 | 第84页 |
| ·PINⅡ蛋白的相对表达量 | 第84-85页 |
| ·转基因株T2代的遗传分离 | 第85-87页 |
| 第五章 讨论 | 第87-93页 |
| ·关于白菜的转化率 | 第87-88页 |
| ·植株花序上的不同位置的花蕾接受能力 | 第88-89页 |
| ·农杆菌的转化能力 | 第89-90页 |
| ·外源基因的遗传 | 第90-91页 |
| ·外源基因的表达 | 第91-92页 |
| ·关于大白菜的转化 | 第92-93页 |
| 第六章 结论 | 第93-94页 |
| 参考文献 | 第94-114页 |
| 致谢 | 第114-115页 |
| 攻读博士学位期间发表的论文 | 第115页 |
