| 英文缩略词表 | 第1-7页 |
| 中文摘要 | 第7-11页 |
| 英文摘要 | 第11-16页 |
| 引言 | 第16-18页 |
| 第一部分 T7RNA聚合酶介导的RNA干扰体外转录体系的建立及癌基因p28~(GANK) RNAi特异性靶位点的筛选 | 第18-37页 |
| 前言 | 第18-20页 |
| 试剂和仪器 | 第20-23页 |
| 1 主要试剂 | 第20-21页 |
| 2 主要试剂配制 | 第21-22页 |
| 3 主要仪器 | 第22页 |
| 4 DNA模板合成 | 第22-23页 |
| 实验方法 | 第23-30页 |
| 1 RNAi的T7体外转录体系的建立及验证 | 第23-24页 |
| 2 细胞培养 | 第24页 |
| 3 脂质体Lipofectamine Plusn~(TM)转染 | 第24-25页 |
| 4 Western blot上样液制备 | 第25-26页 |
| 5 Western blot操作步骤 | 第26-27页 |
| 6 细胞RNA的抽提步骤 | 第27-28页 |
| 7 Real-Time PCR操作步骤 | 第28-30页 |
| 实验结果 | 第30-33页 |
| 1 T7RNA聚合酶介导的RNA干扰体外转录体系的建立及验证 | 第30-31页 |
| 2 癌基因p28GA~(GANK) RNA干扰靶位点的筛选与鉴定 | 第31-32页 |
| 3 癌基因p28~(GANK)在肝癌细胞中表达鉴定及对其RNAi作用 | 第32-33页 |
| 讨论 | 第33-37页 |
| 1 应用RNAi技术对癌基因p28~(GANK)研究的必要性 | 第33-34页 |
| 2 RNAi的T7体外转录体系的建立及验证 | 第34-35页 |
| 3 癌基因p28~(GANK) RNAi靶位点的筛选及鉴定 | 第35-37页 |
| 第二部分 腺病毒介导的RNA干扰对癌基因p28~(GANK)细胞生物学功能影响的研究 | 第37-60页 |
| 前言 | 第37-38页 |
| 试剂和仪器 | 第38-39页 |
| 1 主要化学药品生物试剂和仪器 | 第38页 |
| 2 DNA克隆片段合成 | 第38-39页 |
| 实验方法 | 第39-48页 |
| 1 细胞培养 | 第39页 |
| 2 腺病毒载体的构建、测序、包装、测滴度、PCR鉴定及转染方法 | 第39-41页 |
| 3 MTT操作步骤 | 第41-42页 |
| 4 细胞流式分析 | 第42-43页 |
| 5 免疫组化(肝癌细胞爬片，DAPI，CY3) | 第43-45页 |
| 6 免疫组化TUNEL分析 | 第45-46页 |
| 7 细胞集落形成实验(Colony-forming Assay) | 第46-47页 |
| 8 癌基因p28~(GANK) RNAi后的裸鼠荷瘤实验 | 第47-48页 |
| 实验结果 | 第48-57页 |
| 1 腺病毒包装、PCR鉴定、扩增和滴度测定 | 第48页 |
| 2 肝癌细胞p28~(GANK)基因RNAi后Western blot和Real-Time PCR结果 | 第48-50页 |
| 3 癌基因p28~(GANK) RNAi后对五种肝癌细胞增殖能力的影响 | 第50-51页 |
| 4 流式细胞仪分析p28~(GANK) RNAi后对肝癌细胞细胞周期的影响 | 第51-52页 |
| 5 免疫组化(CY3，DAPI)结果 | 第52-53页 |
| 6 免疫组化TUNEL分析 | 第53-54页 |
| 7 癌基因p28~(GANK) RNAi对肝癌细胞SMMC-7721克隆形成的影响 | 第54-55页 |
| 8 癌基因p28~(GANK) RNAi对肝癌细胞SMMC-7721的裸鼠荷瘤的影响 | 第55-57页 |
| 讨论 | 第57-60页 |
| 第三部分 RNA干扰癌基因p28~(GANK)对其参与CDK4-CycD1-E2F-Rb1信号转导通路作用的研究 | 第60-72页 |
| 前言 | 第60-61页 |
| 试剂和仪器 | 第61-62页 |
| 1 主要化学药品、生物试剂和仪器 | 第61页 |
| 2 主要试剂配制 | 第61-62页 |
| 实验方法 | 第62-65页 |
| 1 细胞培养 | 第62页 |
| 2 双荧光素酶报告基因分析 | 第62-63页 |
| 3 BrdU分析操作步骤 | 第63页 |
| 4 蛋白质双向电泳分析 | 第63-65页 |
| 实验结果 | 第65-69页 |
| 1 RNA干扰癌基因p28~(GANK)，对肝癌细胞内其它相关蛋白表达的影响 | 第65页 |
| 2 双荧光素酶报告系统分析核转录因子E2F和NF-kB的转录活性的变化 | 第65-66页 |
| 3 BrdU分析肝癌细胞RNAi后DNA合成速率的变化 | 第66-67页 |
| 4 蛋白质双向电泳分析 | 第67-69页 |
| 讨论 | 第69-72页 |
| 小结 | 第72-73页 |
| 参考文献 | 第73-82页 |
| 致谢 | 第82-83页 |
| 附录一 文献综述(一) | 第83-110页 |
| 文献综述(二) | 第97-110页 |
| 附录二 博士期间参与的工作及形成的论文 | 第110页 |
