| 中文摘要 | 第1-9页 |
| 英文摘要 | 第9-11页 |
| 符号说明 | 第11-13页 |
| 1． 引言—转录后基因沉默和RNA介导的植物对病毒的抗性 | 第13-45页 |
| 1．1 转录后基因沉默和RNA介导抗性的发现 | 第13-14页 |
| 1．2 转录后基因沉默和转录水平的基因沉默 | 第14-15页 |
| 1．3 转录后基因沉默的多种情况及其在生物物种中的普遍性 | 第15-16页 |
| 1．4 转录后基因沉默的反式作用特征 | 第16-17页 |
| 1．5 转录后基因沉默中的RNA降解 | 第17-18页 |
| 1．6 转录后基因沉默相关的基因和酶类 | 第18-22页 |
| 1．7 转录后基因沉默的起始和维持 | 第22-26页 |
| 1．8 转录后基因沉默的核阶段（核步骤） | 第26-28页 |
| 1．9 转录后基因沉默的系统沉默信号和传导 | 第28-32页 |
| 1．10 转录后基因沉默的抑制 | 第32-35页 |
| 1．11 转录后基因沉默与其他抗病机制的联系 | 第35页 |
| 1．12 转录后基因沉默生物学意义 | 第35-37页 |
| 1．13 转录后基因沉默机制的解释模型 | 第37-39页 |
| 1．14 马铃薯Y病毒基因组编码基因的表达加工和产物的功能 | 第39-44页 |
| 1．15 研究的目的和意义 | 第44-45页 |
| 2． 第一部分非翻译PVY外壳蛋白基因短片段介导的抗病性研究 | 第45-81页 |
| 2．1 材料与方法 | 第45-67页 |
| 2．1．1 材料 | 第45-46页 |
| 2．1．2 方法 | 第46-67页 |
| 2．1．2．1 PVY-CP短片段的获得 | 第46-49页 |
| 2．1．2．2 质粒DNA的提取 | 第49-51页 |
| 2．1．2．3 质粒DNA的酶切、脱磷及酶切的质粒与DNA片段的连接 | 第51-52页 |
| 2．1．2．4 感受态细胞的制备 | 第52页 |
| 2．1．2．5 重组质粒转化细菌后重组子菌落的PCR筛选 | 第52-53页 |
| 2．1．2．6 重组质粒转化细菌后重组质粒的酶切鉴定 | 第53页 |
| 2．1．2．7 PVY-CP基因5'seg202短片段植物表达载体pRY5'seg202的构建 | 第53页 |
| 2．1．2．8 PVY-CP基因3'seg202短片段植物表达载体pRY3'seg202的构建 | 第53-57页 |
| 2．1．2．9 PVY-CP基因3'seg252短片段植物表达载体pRY3'seg252的构建 | 第57页 |
| 2．1．2．10 重组的质粒载体向农杆菌中的转化 | 第57页 |
| 2．1．2．11 基因转化、植株再生及T0代转基因植株的无性扩繁 | 第57-59页 |
| 2．1．2．12 T0代转基因植株的抗病性及ELISA检测 | 第59-60页 |
| 2．1．2．13 T0代转基因植株的总DNA提取、PCR检测 | 第60-61页 |
| 2．1．2．14 T0代转基因植株Southernblot和Northoernblot分析 | 第61-67页 |
| 2．2 结果与分析 | 第67-81页 |
| 2．2．1 植物表达载体pRY5'seg202的构建 | 第67-69页 |
| 2．2．2 植物表达载体pRY3'seg202的构建 | 第69-72页 |
| 2．2．3 植物表达载体pRY3'seg252的构建 | 第72-74页 |
| 2．2．4 农杆菌介导的基因转化、植株再生及T0代转基因植株的筛选和扩繁 | 第74页 |
| 2．2．5 T0代转基因烟草的抗病性分析 | 第74-81页 |
| 3． 第二部分正向与反向重复片段转基因植物的抗病性比较 | 第81-100页 |
| 3．1 材料与方法 | 第81-89页 |
| 3．1．1 材料 | 第81页 |
| 3．1．2 方法 | 第81-89页 |
| 3．1．2．1 正、反向重复植物表达载体的构建 | 第81-87页 |
| 3．1．2．2 重组质粒向农杆菌中转化、基因向烟草NC89中的转化、组培成苗、转基因植物的抗病性分析、DNA和RNA的提纯、转膜、杂交 | 第87页 |
| 3．1．2．3 用于抗病性试验的病毒及RNA的提纯 | 第87-89页 |
| 3．2 结果与分析 | 第89-100页 |
| 3．2．1 用于构建植物表达载体pRIR202和pRDR202两个片段的扩增 | 第89-90页 |
| 3．2．2 反向重复片段与pRsen252质粒的连接及重组质粒pRIR202的鉴定 | 第90-91页 |
| 3．2．3 正向重复片段与pRsen252质粒的连接及重组质粒pRDR202的鉴定 | 第91-93页 |
| 3．2．4 用于抗病性实验的病毒及RNA的提取 | 第93-94页 |
| 3．2．5 基因转化、植株再生及T0代转基因植株的筛选和扩繁 | 第94-95页 |
| 3．2．6 T0代转基因烟草的抗病性分析 | 第95-96页 |
| 3．2．7 T0代转基因植株的分子检测和杂交分析 | 第96-100页 |
| 4． 第三部分在烟草中瞬时表达不同结构马铃薯病毒外壳蛋白基因的抗病性初步分析 | 第100-116页 |
| 4．1 材料和方法 | 第100-108页 |
| 4．1．1 材料 | 第100页 |
| 4．1．2 方法 | 第100-108页 |
| 4．1．2．1 用于瞬时表达的系列植物表达载体的构建 | 第100-104页 |
| 4．1．2．1．1 基于dsRNA载体pFGC5941的系列植物表达载体的构建 | 第100-103页 |
| 4．1．2．1．2 基于反向重复载体pRIR202和PVXCP基因的植物表达载体pRIR202YX（B）、pRIR202YX（K）的构建 | 第103-104页 |
| 4．1．2．2 农杆菌渗入试验 | 第104页 |
| 4．1．2．3 用于接种的病毒的提纯 | 第104-108页 |
| 4．2 结果与分析 | 第108-116页 |
| 4．2．1 基于dsRNA载体pFGC5941的系列植物表达载体的构建 | 第108-111页 |
| 4．2．2 基于反向重复载体pRIR202和PVXCP基因的植物表达载体pRIR202YX（B）、pRIR202YX（X）的构建 | 第111-113页 |
| 4．2．3 用于接种的病毒的提纯 | 第113-114页 |
| 4．2．4 基因瞬时表达的抗病性测定 | 第114页 |
| 4．2．4．1 攻毒试验 | 第114页 |
| 4．2．4．2 ELISA检测 | 第114页 |
| 4．2．4．3 基因瞬时表达的Northern blot杂交 | 第114页 |
| 4．2．5 对所构建的八个载体的进一步研究 | 第114-116页 |
| 5． 讨论 | 第116-121页 |
| 6． 结论 | 第121-122页 |
| 7． 参考文献 | 第122-141页 |
| 8． 附录 | 第141-146页 |
| 9． 致谢 | 第146-147页 |
| 10． 攻读学位期间发表论文情况 | 第147页 |
