| 摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 缩略词表 | 第11-12页 |
| 引言 | 第12-18页 |
| 第一章 实验材料 | 第18-23页 |
| ·菌株和质粒 | 第18页 |
| ·工具酶、抗体及分子量标准 | 第18-19页 |
| ·主要试剂及试剂盒 | 第19页 |
| ·主要仪器 | 第19-20页 |
| ·主要培养基 | 第20-21页 |
| ·主要溶液 | 第21-23页 |
| 第二章 实验方法 | 第23-39页 |
| ·表达载体pGEURA3-GAP的构建 | 第23-28页 |
| ·基因的克隆 | 第23-24页 |
| ·表达载体构建 | 第24-25页 |
| ·启动子功能验证 | 第25-28页 |
| ·MDSI基因的扩增 | 第28-31页 |
| ·引物设计 | 第28-29页 |
| ·基因扩增 | 第29-31页 |
| ·定位表达载体pGEURA3-GAP1-MDSI的构建 | 第31-34页 |
| ·pGEURA3-GAP载体酶切位点的更换 | 第31-32页 |
| ·定位载体pGEURA3-GAP1-Leader的构建 | 第32-33页 |
| ·定位表达载体pGEURA3-GAP1-MDSI的构建 | 第33-34页 |
| ·MDSI在毕赤酵母突变菌株GJK01-HSA/GM-CSF(His)中的表达 | 第34-36页 |
| ·pGEURA3-GAP1-MDSI的电转化 | 第34-36页 |
| ·转化子的筛选 | 第36页 |
| ·MDSI在毕赤酵母突变菌株GJK01-HAS/GM-CSF(His)中表达的鉴定 | 第36-39页 |
| ·报告蛋白HSA/GM-CSF(His)的表达 | 第36-37页 |
| ·报告蛋白HAS/GM-CSF(His)的纯化 | 第37页 |
| ·报告蛋白HSA/GM-CSF(His)N-糖链的FACE分析: | 第37-39页 |
| 第三章 实验结果 | 第39-48页 |
| ·表达载体pGEURA3-GAP的构建 | 第39-40页 |
| ·基因的克隆 | 第39页 |
| ·表达载体pGEURA3-GAP的构建 | 第39-40页 |
| ·表达载体pGEURA3-GAP功能验证 | 第40-41页 |
| ·表达载体pGEURA3-GAP-HSA/GM-CSF的构建 | 第40-41页 |
| ·HSA/GM-CSF在毕赤酵母JC307中的表达 | 第41页 |
| ·毕赤酵母JC307表达的HSA/GM-CSF活性检测 | 第41页 |
| ·定位信号基因及MDSI基因的扩增 | 第41-42页 |
| ·定位表达载体pGEURA3-GAP1-MDSI的构建 | 第42-44页 |
| ·pGEURA3-GAP1-Leader的构建 | 第42-43页 |
| ·pGEURA3-GAP1-MDSI的构建 | 第43-44页 |
| ·MDSI在毕赤酵母突变菌株GJK01-HSA/GM-CSF(His)中的表达与鉴定 | 第44-48页 |
| ·转化子的筛选 | 第44页 |
| ·报告蛋白HSA/GM-CSF(His)的表达 | 第44-45页 |
| ·报告蛋白HAS/GM-CSF(His)的纯化 | 第45-46页 |
| ·报告蛋白HSA/GM-CSF(His)N-糖链的FACE分析: | 第46-48页 |
| 第四章 讨论 | 第48-51页 |
| ·组成型启动子P_(GAP)的应用 | 第48页 |
| ·MDSI的正确定位与活性发挥 | 第48-49页 |
| ·报告蛋白N-糖基的分析方法 | 第49-51页 |
| 第五章 结论 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-55页 |
| 致谢 | 第55-56页 |
| 作者简介 | 第56页 |
