| 中文摘要 | 第1-7页 |
| 英文摘要 | 第7-9页 |
| 符号及缩写说明 | 第9-15页 |
| 第一章 雌激素及雌激素受体 | 第15-23页 |
| ·雌激素 | 第15-16页 |
| ·雌激素受体(ER) | 第16-18页 |
| ·ER的组织分布 | 第16-17页 |
| ·ER在泌尿生殖器官的分布 | 第16-17页 |
| ·ER在心血管系统和骨的分布 | 第17页 |
| ·ER在中枢神经系统的分布 | 第17页 |
| ·雌激受体生理作用 | 第17-18页 |
| ·雌激素受体亚型(ERα和ERβ)的结构和生理学意义 | 第18-23页 |
| ·ERα和ERβ的结构 | 第18-19页 |
| ·ERα和ERβ的生理学意义 | 第19-20页 |
| ·ERβ的作用机制 | 第20-23页 |
| ·经典的基因组途径 | 第21页 |
| ·非经典的基因组途径 | 第21-22页 |
| ·非基因组途径 | 第22-23页 |
| 第二章 共调节因子对ER转录的调节及其与肿瘤关系的研究进展 | 第23-29页 |
| ·雌激素受体共调节因子概述 | 第23-24页 |
| ·共调节因子与ER的关系 | 第24-25页 |
| ·与ERα和ERβ都结合的共调节因子 | 第25-28页 |
| ·SRC家族 | 第25-26页 |
| ·PGC-1 | 第26页 |
| ·hADA3 | 第26页 |
| ·PELP1/MNAR | 第26-27页 |
| ·NFAT3 | 第27页 |
| ·N-CoR和SMRT | 第27页 |
| ·RIP140 | 第27-28页 |
| ·与ERβ特异结合的共调节因子 | 第28-29页 |
| ·HSP27 | 第28页 |
| ·Com-1 | 第28-29页 |
| 第三章 新型雌激素受体共调节因子GA5基因 | 第29-32页 |
| ·GA5基因的发现 | 第29页 |
| ·GA5基因的生物信息学特征 | 第29页 |
| ·GA5基因的功能 | 第29-32页 |
| 第四章 GA5原核表达载体的构建及多克隆抗体的制备 | 第32-50页 |
| ·引言 | 第32页 |
| ·材料与方法 | 第32-44页 |
| ·主要实验材料 | 第32-33页 |
| ·主要试剂 | 第33页 |
| ·主要实验仪器及设备 | 第33页 |
| ·主要溶液配方 | 第33-36页 |
| ·引物设计 | 第36-37页 |
| ·PCR扩增目的片段 | 第37页 |
| ·酶切PCR产物和载体 | 第37页 |
| ·PCR产物及载体回收 | 第37-38页 |
| ·目的片段与载体连接 | 第38-39页 |
| ·连接产物转化 | 第39页 |
| ·DH5α大肠杆菌感受态细胞制备 | 第39页 |
| ·连接产物转化感受态细胞 | 第39页 |
| ·重组质粒鉴定 | 第39-40页 |
| ·GST-GA5蛋白诱导表达 | 第40-42页 |
| ·BL21感受态细胞的制备 | 第40页 |
| ·GST-GA5融合蛋白的诱导表达 | 第40-41页 |
| ·SDS-PAGE电泳 | 第41页 |
| ·Western blot免疫印迹 | 第41-42页 |
| ·GST-GA5融合蛋白纯化 | 第42-43页 |
| ·GST-GA5多克隆抗体制备 | 第43页 |
| ·Western blot检测GST-GA多克隆抗体活性 | 第43-44页 |
| ·细胞转染 | 第43页 |
| ·待测细胞样品的处理 | 第43-44页 |
| ·SDS-PAGE电泳 | 第44页 |
| ·Western blot免疫印迹 | 第44页 |
| ·结果与分析 | 第44-48页 |
| ·PGEX-KG-GA5重组质粒的构建 | 第44-46页 |
| ·PCR扩增GA5基因 | 第44-45页 |
| ·重组质粒GST-GA5酶切鉴定 | 第45页 |
| ·Western blot检测GST-GA5融合蛋白表达 | 第45-46页 |
| ·GST-GA5融合蛋白的大量纯化 | 第46-47页 |
| ·GA5基因在哺乳动物细胞中的表达及多克隆抗体的鉴定 | 第47页 |
| ·GA5蛋白在不同乳腺癌细胞株的表达 | 第47-48页 |
| ·讨论 | 第48-50页 |
| ·制备GA5蛋白多克隆抗体的意义 | 第48-49页 |
| ·检测GA5蛋白在不同乳腺癌细胞中表达的意义 | 第49-50页 |
| 第五章 GA5RNA干扰载体的构建及其干扰效果 | 第50-57页 |
| ·引言 | 第50页 |
| ·材料与方法 | 第50-51页 |
| ·主要实验材料 | 第50页 |
| ·主要试剂 | 第50-51页 |
| ·主要实验仪器及设备 | 第51页 |
| ·GA5 siRNAs真核表达载体的构建 | 第51-54页 |
| ·GA5 siRNAs的设计及合成 | 第51页 |
| ·siRNA载体pSliencer 2.1-U6 neo酶切及胶回收 | 第51-52页 |
| ·寡核苷酸片段与siRNA载体连接 | 第52-53页 |
| ·连接产物的转化 | 第53页 |
| ·Western blotting检测构建的GA5 siRNA表达载体的干扰效果 | 第53-54页 |
| ·干扰载体转染哺乳动物细胞 | 第53页 |
| ·待测细胞样品的处理 | 第53页 |
| ·SDS-PAGE电泳及Western blot免疫印迹 | 第53-54页 |
| ·结果分析 | 第54-55页 |
| ·GA5 siRNAs靶序列测序分析 | 第54-55页 |
| ·GA5 siRNAs对GA5基因表达的影响 | 第55页 |
| ·讨论 | 第55-56页 |
| ·小结 | 第56-57页 |
| 第六章 ERα、ERβ真核表达载体的构建及转录活性测定 | 第57-67页 |
| ·引言 | 第57页 |
| ·材料与方法 | 第57-61页 |
| ·主要实验材料 | 第57-58页 |
| ·主要试剂 | 第58页 |
| ·主要实验仪器及设备 | 第58页 |
| ·引物设计及合成 | 第58页 |
| ·PCR扩增目的片段 | 第58-59页 |
| ·酶切PCR产物和载体 | 第59页 |
| ·PCR产物及载体回收 | 第59页 |
| ·目的片段与载体连接 | 第59-60页 |
| ·连接产物转化及阳性克隆鉴定 | 第60页 |
| ·Western blotting检测Flang-ERα、Flang-ERβ融合蛋白表达 | 第60页 |
| ·转录活性检测 | 第60-61页 |
| ·哺乳动物细胞转染 | 第60页 |
| ·转录活性检测 | 第60-61页 |
| ·结果 | 第61-63页 |
| ·带有Flang标签的ERα和ERβ重组质粒构建 | 第61-62页 |
| ·Flang-ERα、Flang-ERβ在293T细胞中的表达鉴定 | 第62-63页 |
| ·pIRESpuro2-Flag-ERα、pIRESpuro2-Flag-ERβ转录活性的测定 | 第63页 |
| ·讨论 | 第63-65页 |
| ·ER亚型真核表达载体构建的意义 | 第63-65页 |
| ·使用真核表达载体pIRESpuro2的优势 | 第65页 |
| ·小结 | 第65-67页 |
| 总结 | 第67-68页 |
| 参考文献 | 第68-75页 |
| 致谢 | 第75-76页 |
| 作者简介 | 第76页 |
| 攻读硕士期间发表的论文 | 第76页 |
