| 致谢 | 第1-13页 |
| 缩写词 | 第13-16页 |
| 摘要 | 第16-18页 |
| Abstract | 第18-21页 |
| 前言 | 第21-23页 |
| 1 文献综述 | 第23-43页 |
| ·植物雄性不育的研究 | 第23-28页 |
| ·植物花粉发育的过程 | 第23-26页 |
| ·花粉壁的发育 | 第24页 |
| ·绒毡层的发育 | 第24-26页 |
| ·花粉发育相关基因的研究 | 第26-28页 |
| ·花药发育特异基因的克隆和表达 | 第26-27页 |
| ·绒毡层特异性基因的克隆和表达 | 第27-28页 |
| ·RNA干涉的研究 | 第28-32页 |
| ·RNA干涉的可能机制 | 第29页 |
| ·RNA干涉的特征 | 第29-30页 |
| ·RNAi的研究策略 | 第30-31页 |
| ·RNAi的应用 | 第31-32页 |
| ·植物启动子的研究进展 | 第32-36页 |
| ·启动子的类型 | 第32-33页 |
| ·组成型启动子 | 第32页 |
| ·组织特异性启动子 | 第32-33页 |
| ·启动子克隆方法研究进展 | 第33-34页 |
| ·利用启动子探针质粒载体筛选启动子 | 第33-34页 |
| ·通过PCR技术克隆启动子 | 第34页 |
| ·启动子功能和结构研究的策略 | 第34-36页 |
| ·启动子顺式作用元件的电子分析 | 第34-35页 |
| ·转化分析 | 第35-36页 |
| ·瞬间表达分析 | 第36页 |
| ·点突变分析 | 第36页 |
| ·植物脂质转移蛋白研究进展 | 第36-43页 |
| ·植物脂质转移蛋白的结构和分类 | 第37-38页 |
| ·植物脂质转移蛋白基因的定位和表达 | 第38-39页 |
| ·植物脂质转移蛋白基因启动子的分离和表达分析 | 第39-40页 |
| ·植物脂质转移蛋白的生物学功能 | 第40-41页 |
| ·抗性和防御功能 | 第40页 |
| ·生殖发育方面的功能 | 第40-41页 |
| ·LTPs与信号转导 | 第41页 |
| ·LTPs的其它功能 | 第41页 |
| ·LTPs的研究展望 | 第41-43页 |
| 2 脂质转移蛋白基因BcMF15的克隆及分析 | 第43-57页 |
| ·材料与方法 | 第43-48页 |
| ·材料与试剂 | 第43-44页 |
| ·基因组DNA和总RNA的提取及反转录 | 第44-46页 |
| ·基因组DNA提取 | 第44页 |
| ·RNA的提取 | 第44-45页 |
| ·cDNA的合成 | 第45-46页 |
| cDNA第一链合成 | 第45-46页 |
| cDNA第二链的合成 | 第46页 |
| ·差异片段的3'RACE和5'RACE扩增 | 第46-47页 |
| ·cDNA和DNA序列全长的扩增 | 第47-48页 |
| ·PCR产物的克隆及测序 | 第48页 |
| ·基因全长序列的特征分析 | 第48页 |
| ·表达分析 | 第48页 |
| ·结果与分析 | 第48-55页 |
| ·总RNA的提取与cDNA的合成 | 第48页 |
| ·A15T13的3'RACE扩增 | 第48-49页 |
| ·A15T13的3'RACE扩增片段的测序分析 | 第49-50页 |
| ·A15T13的5‘RACE扩增 | 第50页 |
| ·A15T13的5'RACE序列分析 | 第50-51页 |
| ·BcMF15 cDNA和DNA序列全长的获得 | 第51-52页 |
| ·BcMF15的序列特征分析 | 第52-55页 |
| ·BcMF15的表达分析 | 第55页 |
| ·讨论 | 第55-57页 |
| ·BcMF15属于花粉发育特异表达基因 | 第55-56页 |
| ·BcMF15可能是一个新的白菜LTP基因 | 第56-57页 |
| 3 十字花科植物LTP基因同源序列的克隆与进化分析 | 第57-63页 |
| ·材料和方法 | 第57-59页 |
| ·植物材料 | 第57页 |
| ·主要试剂 | 第57-58页 |
| ·DNA提取 | 第58页 |
| ·引物合成 | 第58页 |
| ·目的基因的PCR扩增、克隆、测序和序列比较 | 第58-59页 |
| ·系统树的构建 | 第59页 |
| ·结果与分析 | 第59-62页 |
| ·LTP同源基因的扩增与克隆 | 第59页 |
| ·LTP基因同源序列比对分析 | 第59-62页 |
| ·LTP基因同源序列的演化关系分析 | 第62页 |
| ·讨论 | 第62-63页 |
| 4 BcMF15干涉表达载体的构建及对菜心的遗传转化 | 第63-73页 |
| ·材料与方法 | 第63-67页 |
| ·植物材料与试剂 | 第63页 |
| ·RNAi载体构建 | 第63-66页 |
| ·菌株与质粒 | 第63-64页 |
| ·正义片段和反义片段的获得 | 第64-65页 |
| ·正义片段和反义片段的制备 | 第65页 |
| ·双元载体pBI121制备 | 第65页 |
| ·表达质粒的构建过程 | 第65-66页 |
| ·冻融法转化农杆菌 | 第66页 |
| ·农杆菌中质粒的鉴定 | 第66页 |
| ·表达载体对菜心的遗传转化 | 第66-67页 |
| ·植物材料、菌株及抗生素 | 第66页 |
| ·培养基 | 第66-67页 |
| ·预培养 | 第67页 |
| ·共培养 | 第67页 |
| ·分化培养 | 第67页 |
| ·继代及生根 | 第67页 |
| ·移栽 | 第67页 |
| ·结果与分析 | 第67-71页 |
| ·BcMF15基因RNAi载体构建 | 第67-69页 |
| ·BcME15正义片段和反义片段的获得 | 第68页 |
| ·BcME15的35S-pBI121干涉载体的构建 | 第68-69页 |
| ·农杆菌中质粒的鉴定 | 第69页 |
| ·菜心转BcMF15干涉基因植株的获得 | 第69-71页 |
| ·讨论 | 第71-73页 |
| ·RNAi在基因功能研究中的高效性 | 第71页 |
| ·沉默BcMF15的载体构建策略 | 第71-73页 |
| 5 菜心转BcMF15干涉基因植株的分子检测及功能分析 | 第73-89页 |
| ·材料与方法 | 第73-78页 |
| ·实验材料 | 第73页 |
| ·转基因植株基因组DNA和总RNA的提取 | 第73-74页 |
| ·DNA的提取 | 第73-74页 |
| ·RNA的提取 | 第74页 |
| ·转基因植株的PCR检测 | 第74-75页 |
| ·转基因植株的Southern印迹杂交检测 | 第75-76页 |
| ·样品处理及电泳 | 第75页 |
| ·转膜 | 第75页 |
| ·杂交及放射自显影 | 第75-76页 |
| ·转基因植株的实时荧光定量RT-PCR检测 | 第76页 |
| ·转基因植株的小孢子发育的形态与细胞学观察 | 第76-78页 |
| ·试验材料 | 第76页 |
| ·花粉萌发试验 | 第76页 |
| ·花粉扫描电镜观察 | 第76-77页 |
| ·花药树脂切片观察 | 第77页 |
| ·花药透射电镜观察 | 第77-78页 |
| ·结果与分析 | 第78-85页 |
| ·菜心转基因植株的DNA提取 | 第78-79页 |
| ·菜心转基因植株的PCR检测 | 第79页 |
| ·转基因植株的Southern杂交检测 | 第79页 |
| ·转基因菜心的实时荧光定量PCR检测 | 第79-80页 |
| ·转基因植株花粉发育的形态和细胞学观察 | 第80-85页 |
| ·花器官的形态观察 | 第80-81页 |
| ·BcMF15菜心转基因植株的花粉萌发试验 | 第81-83页 |
| ·花粉花药发育过程的细胞学观察 | 第83-85页 |
| ·讨论 | 第85-89页 |
| ·BcMF15干涉转化植株的细胞和分子检测 | 第85-86页 |
| ·关于BcMF15的功能 | 第86-89页 |
| 6 BcMF15启动子的分离及序列分析 | 第89-97页 |
| ·材料和方法 | 第89-92页 |
| ·实验材料 | 第89页 |
| ·TAIL-PCR引物 | 第89-90页 |
| ·白菜总DNA的提取 | 第90-91页 |
| ·TAIL-PCR扩增 | 第91页 |
| ·目的片段的回收、克隆及重组子的筛选 | 第91页 |
| ·BcMF15启动子序列扩增 | 第91-92页 |
| ·序列分析 | 第92页 |
| ·结果与分析 | 第92-95页 |
| ·TAIL-PCR扩增 | 第92页 |
| ·BcMF15启动子序列全长扩增 | 第92-93页 |
| ·启动子序列分析 | 第93-95页 |
| ·讨论 | 第95-97页 |
| ·TAIL-PCR方法克隆未知启动子序列 | 第95页 |
| ·BcMF15启动子序列特征及功能元件分析 | 第95-97页 |
| 7 BcMF15启动子的功能分析 | 第97-111页 |
| ·材料与方法 | 第97-102页 |
| ·试验材料 | 第97页 |
| ·启动子载体片段的克隆 | 第97-98页 |
| ·启动子表达载体的构建 | 第98-99页 |
| ·基因枪介导的瞬时表达 | 第99-101页 |
| ·洋葱表皮细胞的准备 | 第99页 |
| ·质粒DNA的纯化和金粉包埋 | 第99页 |
| ·用基因枪法在洋葱表皮细胞中导入外源质粒 | 第99-100页 |
| ·融合蛋白亚细胞定位的显微镜观察 | 第100页 |
| ·转化材料的X-Gluc组织化学染色检测 | 第100-101页 |
| ·表达载体对拟南芥的转化分析 | 第101-102页 |
| ·拟南芥的培养 | 第101页 |
| ·浸花法转化拟南芥 | 第101页 |
| ·转基因拟南芥的Km筛选和PCR检测 | 第101页 |
| ·转化植株的GUS检测 | 第101页 |
| ·花蕾GUS组织染色后的树脂切片观察 | 第101-102页 |
| ·结果与分析 | 第102-108页 |
| ·启动子驱动的GUS基因植物表达载体构建 | 第102-103页 |
| ·载体片段扩增测序结果 | 第102页 |
| ·启动子载体的酶切鉴定 | 第102页 |
| ·农杆菌中质粒的鉴定 | 第102-103页 |
| ·瞬时表达及融合蛋白的表达检测 | 第103-104页 |
| ·稳定表达系统研究启动子活性及特异性 | 第104-108页 |
| ·拟南芥转化植株的获得 | 第104-105页 |
| ·转基因拟南芥的PCR检测 | 第105页 |
| ·转化植株的GUS检测 | 第105-108页 |
| ·花蕾GUS染色后的树脂切片观察 | 第108页 |
| ·讨论 | 第108-111页 |
| ·基因枪介导的瞬时表达体系中参数的选择 | 第108-109页 |
| ·启动子载体对拟南芥的转化及表达分析 | 第109-110页 |
| ·LTP基因与花粉发育 | 第110-111页 |
| 结论 | 第111-113页 |
| 参考文献 | 第113-127页 |
| 攻读博士学位期间发表的论文 | 第127页 |
