| 致谢 | 第1-5页 |
| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 目录 | 第8-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-29页 |
| ·甲酸脱氢酶简介 | 第10-18页 |
| ·甲酸脱氢酶的来源 | 第10-11页 |
| ·NAD~+依赖型甲酸脱氢酶的结构 | 第11-13页 |
| ·NAD+依赖型甲酸脱氢酶的理化性质 | 第13-15页 |
| ·对甲酸脱氢酶的酶学改造研究 | 第15-16页 |
| ·NAD~+依赖型FDH的主要生产方法 | 第16页 |
| ·NAD~+依赖型FDH的应用 | 第16-18页 |
| ·大肠杆菌表达系统 | 第18-19页 |
| ·高密度培养技术 | 第19-27页 |
| ·高密度发酵概述 | 第19页 |
| ·影响大肠杆菌高密度培养的主要因素 | 第19-25页 |
| ·补料策略 | 第25-27页 |
| ·选题意义及研究目的 | 第27-29页 |
| ·选题意义 | 第27页 |
| ·研究目的 | 第27-29页 |
| 第二章 甲酸脱氢酶重组菌构建 | 第29-43页 |
| ·引言 | 第29页 |
| ·实验材料 | 第29-32页 |
| ·菌种与质粒 | 第29-31页 |
| ·工具酶及试剂盒 | 第31页 |
| ·培养基 | 第31页 |
| ·主要仪器 | 第31-32页 |
| ·实验方法 | 第32-34页 |
| ·DNA提取方法 | 第32页 |
| ·PCR方法 | 第32-33页 |
| ·DNA检测及胶回收 | 第33页 |
| ·感受态细胞的制备及转化 | 第33页 |
| ·重组质粒的构建 | 第33-34页 |
| ·重组菌的构建 | 第34页 |
| ·聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第34页 |
| ·结果与讨论 | 第34-41页 |
| ·Candida boidinii基因组提取 | 第34-35页 |
| ·甲酸脱氢酶(FDH)基因的扩增和鉴定 | 第35-36页 |
| ·TA克隆及鉴定 | 第36-38页 |
| ·重组质粒构建 | 第38-40页 |
| ·重组菌的构建 | 第40页 |
| ·聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测蛋白表达 | 第40-41页 |
| ·小结 | 第41-43页 |
| 第三章 重组大肠杆菌表达甲酸脱氢酶培养条件的初步研究 | 第43-64页 |
| ·引言 | 第43页 |
| ·实验材料与方法 | 第43-47页 |
| ·菌种 | 第43页 |
| ·培养基 | 第43-44页 |
| ·实验仪器与试剂 | 第44页 |
| ·培养条件 | 第44页 |
| ·NADH浓度测定 | 第44-45页 |
| ·蛋白质浓度测定方法 | 第45-46页 |
| ·甲酸脱氢酶酶活检测方法 | 第46-47页 |
| ·酶催化反应曲线测定 | 第47页 |
| ·实验结果与讨论 | 第47-62页 |
| ·重组菌在种子瓶中的生长曲线 | 第47-48页 |
| ·重组菌培养基条件的优化 | 第48-54页 |
| ·培养环境条件优化 | 第54-58页 |
| ·诱导条件的选择 | 第58-62页 |
| ·小结 | 第62-64页 |
| 第四章 重组菌在发酵罐中的扩大培养 | 第64-72页 |
| ·引言 | 第64页 |
| ·实验材料 | 第64-65页 |
| ·菌种 | 第64页 |
| ·培养基 | 第64-65页 |
| ·培养条件 | 第65页 |
| ·主要实验仪器 | 第65页 |
| ·分析方法 | 第65-66页 |
| ·pH值和溶氧 | 第65页 |
| ·菌体密度 | 第65页 |
| ·葡萄糖浓度测定 | 第65-66页 |
| ·酶活和酶比活力测定 | 第66页 |
| ·结果与讨论 | 第66-71页 |
| ·分批补料发酵 | 第66-69页 |
| ·pH-stat法补料发酵 | 第69-71页 |
| ·小结 | 第71-72页 |
| 第五章 结论与展望 | 第72-75页 |
| ·结论 | 第72-73页 |
| ·本文创新之处 | 第73页 |
| ·展望 | 第73-75页 |
| 参考文献 | 第75-80页 |
| 作者简历 | 第80页 |