| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-10页 |
| 引言 | 第10-22页 |
| 1 新孢子虫病原学研究进展 | 第10-12页 |
| 2 新孢子虫病流行病学及危害 | 第12-13页 |
| 3 新孢子虫病防治研究进展 | 第13-17页 |
| ·临床诊断 | 第13页 |
| ·病理组织学检查 | 第13-14页 |
| ·血清学诊断 | 第14-15页 |
| ·分子生物学诊断方法 | 第15-16页 |
| ·动物接种试验 | 第16-17页 |
| 4 新孢子虫主要抗原研究进展 | 第17-19页 |
| ·表面抗原 | 第17页 |
| ·微线抗原 | 第17-18页 |
| ·颗粒抗原 | 第18-19页 |
| 5 牛新孢子虫疫苗的应用研究 | 第19-20页 |
| ·免疫预防的应用前景 | 第19页 |
| ·活疫苗与死疫苗 | 第19-20页 |
| ·牛新孢子虫疫苗的应用研究 | 第20页 |
| 6 本研究目的及意义 | 第20-22页 |
| 材料与方法 | 第22-39页 |
| 1 材料 | 第22-29页 |
| ·病料来源 | 第22页 |
| ·虫体培养所用材料 | 第22页 |
| ·载体与菌株 | 第22页 |
| ·主要试剂 | 第22页 |
| ·试验所用溶液及其配制 | 第22-28页 |
| ·主要仪器设备 | 第28-29页 |
| 2 方法 | 第29-39页 |
| ·犬新孢子虫吉林株虫体的分离与鉴定 | 第29-30页 |
| ·PCR产物的回收 | 第30页 |
| ·感受态细胞的制备(CaCl2法) | 第30-31页 |
| ·NcSRS2 DNA与pWD18-T Simple Vector的重组连接 | 第31页 |
| ·重组连接后质粒DNA的转化 | 第31页 |
| ·重组克隆的筛选 | 第31页 |
| ·质粒DNA的小量制备(碱性裂解法) | 第31-32页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第32页 |
| ·序列测定及分析 | 第32页 |
| ·重组表达载体的构建 | 第32-33页 |
| ·重组表达载体的鉴定 | 第33-34页 |
| ·重组融合表达质粒的诱导表达 | 第34页 |
| ·SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第34-35页 |
| ·融合蛋白Western-blotting分析 | 第35-36页 |
| ·重组蛋白的大量表达 | 第36页 |
| ·包涵体的鉴定 | 第36页 |
| ·亲和层析法纯化融合蛋白(Batch法) | 第36-37页 |
| ·ELISA诊断方法的建立 | 第37-39页 |
| 结果 | 第39-53页 |
| 1 犬新孢子虫吉林株虫体的分离与鉴定 | 第39-40页 |
| 2 目的基因的克隆及重组质粒的鉴定 | 第40-42页 |
| 3 pMD18-T-NcSRS2重组质粒的序列测定及同源性分析 | 第42-43页 |
| 4 重组表达载体的构建及鉴定 | 第43-45页 |
| 5 重组表达质粒的序列测定及分析 | 第45-47页 |
| 6 重组表达载体pGEX-NcSRS2的表达 | 第47页 |
| 7 融合蛋白Western-blotting分析 | 第47-48页 |
| 8 蛋白存在形式的鉴定 | 第48页 |
| 9 重组蛋白的亲和层析纯化 | 第48-49页 |
| 10 以重组蛋白NcSRS2为抗原的ELISA试验 | 第49-53页 |
| 讨论 | 第53-58页 |
| 1 犬新孢子虫吉林株的分离与鉴定 | 第53页 |
| 2 新孢子虫病的诊断 | 第53-54页 |
| 3 目的基因的扩增与克隆 | 第54页 |
| 4 表达载体pGEX-4T-2 | 第54-55页 |
| 5 重组表达质粒的构建和鉴定 | 第55-56页 |
| 6 NcSRS2重组融合蛋白在大肠杆菌中的表达 | 第56页 |
| 7 以重组NcSRS2蛋白为抗原的ELISA试验 | 第56-58页 |
| 结论 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-71页 |
| 致谢 | 第71-72页 |
| 作者简介 | 第72-73页 |
| 附录 (攻读学位期间发表论文目录) | 第73-74页 |
