| 提要 | 第1-15页 |
| 第一章 前言 | 第15-47页 |
| 1.Caspase 家族蛋白酶与细胞凋亡 | 第15-32页 |
| ·Caspase 及其分类 | 第15-16页 |
| ·Procaspase 的激活 | 第16-22页 |
| ·死亡受体介导的Procaspase 激活途径 | 第16-20页 |
| ·线粒体介导的Procaspase 激活途径 | 第20-22页 |
| ·Caspase 的下游底物 | 第22-23页 |
| ·Caspase-3、Caspase-6 和Caspase-7 | 第22页 |
| ·Caspase 的其他下游底物 | 第22-23页 |
| ·Caspase 家族蛋白酶调节因子 | 第23-32页 |
| ·IAP | 第23-24页 |
| ·Bcl-2 家族蛋白质 | 第24-27页 |
| ·细胞色素C | 第27页 |
| ·Smac | 第27-31页 |
| ·钙蛋白酶和钙离子 | 第31页 |
| ·Gran B | 第31-32页 |
| 2. 抗肿瘤药物的协同作用 | 第32-43页 |
| ·抗肿瘤药物协同作用的基本原理 | 第32-33页 |
| ·抗肿瘤药物协同作用的研究现状 | 第33-43页 |
| ·药物选择的基本依据 | 第33-40页 |
| ·常用的研究方法 | 第40-43页 |
| 3. 本论文的设计思路 | 第43-47页 |
| 第二章 人参皂甙Rh2 和桦木酸协同诱导肿瘤细胞凋亡的研究 | 第47-93页 |
| 1. 引言 | 第47-48页 |
| 2. 材料与方法 | 第48-62页 |
| ·材料、仪器和溶液 | 第48-52页 |
| ·实验方法 | 第52-62页 |
| ·细胞培养 | 第52页 |
| ·MTT 法测定细胞成活率 | 第52页 |
| ·流式细胞检测分析 | 第52-53页 |
| ·染色体凝聚与核断裂分析 | 第53页 |
| ·Caspase 活性测定 | 第53-54页 |
| ·线粒体膜电位的去极化分析 | 第54页 |
| ·全细胞裂解液的制备 | 第54-55页 |
| ·线粒体及胞浆提取物蛋白质的制备 | 第55-56页 |
| ·提取物蛋白质浓度的测定 | 第56页 |
| ·聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE） | 第56-59页 |
| ·Western blot 分析 | 第59-60页 |
| ·RNA 干扰技术 | 第60-62页 |
| 3. 结果与讨论 | 第62-92页 |
| ·G-Rh2 和Bet A 协同诱导肿瘤细胞凋亡 | 第62-67页 |
| ·MTT 法结果分析 | 第62-65页 |
| ·协同作用分析 | 第65-66页 |
| ·小结 | 第66-67页 |
| ·G-Rh2 和Bet A 协同诱导HeLa 细胞凋亡及Caspase-3 激活. | 第67-73页 |
| ·DAPI 染色及凋亡细胞的形态学观察 | 第67-68页 |
| ·Caspase-3/7 活性测定 | 第68页 |
| ·流式细胞检测技术测定细胞凋亡 | 第68-72页 |
| ·小结 | 第72-73页 |
| ·G-Rh2 和Bet A 联合作用导致Caspase-8、Bid 和PARP 断裂的增加 | 第73-77页 |
| ·全细胞裂解液蛋白质的Western blot 分析 | 第74-76页 |
| ·小结 | 第76-77页 |
| ·G-Rh2 和Bet A 协同作用HeLa 细胞迅速引起线粒体膜电位的去极化和细胞色素C 的释放 | 第77-82页 |
| ·MitoCapture 试剂染色结果分析 | 第77-78页 |
| ·线粒体提取液蛋白质的Western blot 分析 | 第78-81页 |
| ·小结 | 第81-82页 |
| ·G-Rh2 和Bet A 联合作用协同触发HeLa 细胞的Bax 转位 | 第82-87页 |
| ·线粒体提取液蛋白质的Western blot 分析 | 第82-83页 |
| ·全细胞裂解液蛋白质的Western blot 分析 | 第83-86页 |
| ·小结 | 第86-87页 |
| ·在G-Rh2 和Bet A 联合作用诱导Caspase-3 激活和细胞凋亡中，Caspase-8 起重要作用 | 第87-92页 |
| ·全细胞裂解液蛋白质的Western blot 分析 | 第87页 |
| ·DAPI 染色结果分析 | 第87-88页 |
| ·Caspase-3 活性测定 | 第88-91页 |
| ·小结 | 第91-92页 |
| 4. 本章结论 | 第92-93页 |
| 第三章 细胞周期蛋白质依赖性激酶CDK2 多克隆抗体的制备和鉴定 | 第93-104页 |
| 1. 引言 | 第93-95页 |
| 2. 材料与方法 | 第95-100页 |
| ·材料、仪器和溶液 | 第95-97页 |
| ·实验方法 | 第97-100页 |
| ·CDK2 多肽编码基因的PCR 合成 | 第97-98页 |
| ·pGEX-6P-1-CDK2 多肽重组质粒的构建 | 第98页 |
| ·GST-CDK2 多肽融合蛋白质的表达和纯化 | 第98-99页 |
| ·抗CDK2 多克隆抗体的制备 | 第99页 |
| ·多克隆抗体的Western Blot 检测 | 第99-100页 |
| 3. 结果与讨论 | 第100-103页 |
| ·PCR 法合成CDK2 多肽编码基因和pGEX-6P-1-CDK2 多肽重组质粒的成功构建 | 第100-101页 |
| ·高纯度GST-CDK2 多肽融合蛋白质的获得 | 第101-102页 |
| ·多克隆抗体的制备、纯化和特异性鉴定 | 第102-103页 |
| 4. 本章结论 | 第103-104页 |
| 第四章 Cyclin A-Cdk2 磷酸化仅含BH3 结构域蛋白质BMF 的研究 | 第104-115页 |
| 1. 引言 | 第104-106页 |
| 2. 材料与方法 | 第106-110页 |
| ·材料、仪器和溶液 | 第106-108页 |
| ·实验方法 | 第108-110页 |
| ·表达载体pGEX-6P-1-BMF 的构建 | 第108页 |
| ·表达、纯化融合蛋白质GST-BMF | 第108页 |
| ·细胞培养和药物处理 | 第108-109页 |
| ·免疫共沉淀 | 第109页 |
| ·体外磷酸化实验 | 第109-110页 |
| 3. 结果与讨论 | 第110-114页 |
| ·人源BMF 基因的获得和pGEX-6P-1-BMF 的成功构建 | 第110-112页 |
| ·获得高纯度的GST-BMF 融合蛋白质 | 第112-113页 |
| ·BMF 在体外磷酸化实验中不能被Cyclin A-Cdk2 磷酸化 | 第113-114页 |
| 4. 本章结论 | 第114-115页 |
| 参考文献 | 第115-131页 |
| 攻读博士学位期间发表的论文 | 第131-132页 |
| 致谢 | 第132-134页 |
| 中文摘要 | 第134-138页 |
| ABSTRACT | 第138-142页 |
| 作者简历 | 第142页 |
