| 中文摘要 | 第1-3页 |
| Abstract | 第3-5页 |
| 中文文摘 | 第5-7页 |
| 目录 | 第7-13页 |
| 绪论 | 第13-31页 |
| 第一节 脂肪酶研究概况 | 第13-19页 |
| ·脂肪酶的来源 | 第13页 |
| ·脂肪酶的结构特点 | 第13-14页 |
| ·脂肪酶的分子生物学研究 | 第14-15页 |
| ·脂肪酶的催化特点 | 第15-16页 |
| ·微生物脂肪酶 | 第16-18页 |
| ·微生物脂肪酶的性质 | 第18-19页 |
| 第二节 脂肪酶的应用价值 | 第19-21页 |
| 第三节 毕赤酵母表达体系简介 | 第21-22页 |
| 第四节 定向进化简介 | 第22-27页 |
| ·定点诱变 | 第23-24页 |
| ·定向进化 | 第24-27页 |
| 第五节 本课题研究的目的和意义 | 第27-31页 |
| ·目的意义 | 第27-28页 |
| ·主要内容 | 第28-31页 |
| 第一章 扩展青霉FS1884脂肪酶在毕赤酵母GS115中的表达 | 第31-47页 |
| 第一节 前言 | 第31页 |
| 第二节 材料和方法 | 第31-34页 |
| ·菌种和质粒 | 第31页 |
| ·试剂及仪器设备 | 第31-32页 |
| ·培养基 | 第32-33页 |
| ·引物 | 第33-34页 |
| 第三节 实验方法 | 第34-39页 |
| ·扩展青霉总RNA的提取 | 第34页 |
| ·反转录并扩增脂肪酶cDNA | 第34-35页 |
| ·感受态大肠杆菌的制备方法以及转化实验 | 第35页 |
| ·SDS碱裂解法制备质粒DNA:小量制备 | 第35-36页 |
| ·SDS碱裂解法制备质粒DNA:大量制备 | 第36页 |
| ·酵母感受态的制备和转化实验 | 第36-37页 |
| ·酵母阳性克隆子的筛选与鉴定 | 第37-38页 |
| ·酵母的诱导表达 | 第38页 |
| ·SDS-PAGE | 第38页 |
| ·脂肪酶活力的测定方法 | 第38-39页 |
| 第四节 结果与讨论 | 第39-45页 |
| ·表达载体pPIC3.5k-PEL的构建 | 第39-41页 |
| ·转化甲醇型酵母GS115 | 第41-43页 |
| ·脂肪酶的诱导表达 | 第43页 |
| ·重组脂肪酶的性质鉴定 | 第43-45页 |
| 第五节 小结 | 第45-47页 |
| 第二章 一步法定点诱变扩展青霉脂肪酶 | 第47-75页 |
| 第一节 前言 | 第47页 |
| 第二节 材料和方法 | 第47页 |
| ·菌种和质粒 | 第47页 |
| 第三节 试剂及仪器设备 | 第47-50页 |
| ·试剂 | 第47-48页 |
| ·仪器 | 第48页 |
| ·培养基 | 第48-49页 |
| ·引物及缩写 | 第49-50页 |
| 第四节 实验方法 | 第50-51页 |
| ·突变的引物设计 | 第50页 |
| ·脂肪酶基因的定点突变 | 第50-51页 |
| ·转化毕赤酵母以及诱导表达 | 第51页 |
| 第五节 结果与讨论 | 第51-72页 |
| ·突变体PEL-L164P-GS | 第51-55页 |
| ·突变体PEL-T50C-GS | 第55-57页 |
| ·突变体PEL-M220V-GS | 第57-60页 |
| ·突变体PEL-I102M-GS | 第60-63页 |
| ·突变体PEL-I102V-GS | 第63-66页 |
| ·突变体PEL-I53H-GS | 第66-68页 |
| ·突变体PEL-R40G-GS | 第68-70页 |
| ·突变体PEL-S92A-GS | 第70页 |
| ·突变体酶的SDS-PAGE分析 | 第70-72页 |
| 第六节 小结 | 第72-75页 |
| 第三章 扩展青霉脂肪酶的定向进化 | 第75-83页 |
| 第一节 前言 | 第75页 |
| 第二节 材料与方法 | 第75-78页 |
| ·菌种和质粒 | 第75页 |
| ·试剂及仪器设备 | 第75-76页 |
| ·培养基 | 第76-77页 |
| ·引物 | 第77-78页 |
| 第三节 实验方法 | 第78-79页 |
| ·突变体脂肪酶随机突变库的建立 | 第78页 |
| ·突变文库的筛选 | 第78-79页 |
| 第四节 结果与讨论 | 第79-82页 |
| 第五节 小结 | 第82-83页 |
| 第四章 总结与展望 | 第83-85页 |
| 附录1 英文缩写意义 | 第85-87页 |
| 参考文献 | 第87-97页 |
| 攻读学位期间承担的科研任务与主要成果 | 第97-99页 |
| 致谢 | 第99-101页 |
| 个人简历 | 第101页 |