PEG介导的玉米丝轴黑粉菌原生质体转化与ras、gpd启动子的克隆

摘要	第1-8页
Abstract	第8-10页
缩略语表	第10-11页
第一章 文献综述	第11-22页
1 玉米丝黑穗病的研究进展	第11-15页
·玉米丝黑穗病的分布与危害	第11页
·玉米丝黑穗病的症状	第11-13页
·玉米丝黑穗病病原菌及其生理小种分化	第13页
·玉米丝黑穗病菌的侵染机制研究	第13-14页
·玉米丝黑穗病早期鉴定方法	第14-15页
2 真菌遗传转化研究进展	第15-18页
·PEG介导的原生质体转化	第15-17页
·原生质体的制备	第15-17页
·PEG介导的原生质体转化	第17页
·根癌农杆菌介导的遗传转化	第17-18页
3 启动子克隆研究进展	第18-21页
·启动子克隆的方法	第19-20页
·利用启动子探针质粒载体筛选启动子	第19页
·利用PCR技术克隆启动子	第19-20页
·外源基因表达及同源启动子克隆研究	第20-21页
·ras与gpd启动子	第21页
4 本研究的目的和意义	第21-22页
第二章 丝黑穗病菌原生质体制备与转化	第22-33页
1 材料	第22-23页
·菌种和载体	第22页
·培养基	第22页
·试剂	第22-23页
·酶制剂	第23页
2 试验方法	第23-25页
·生长曲线的测定	第23页
·菌龄对原生质体的影响	第23页
·原生质体的制备	第23页
·原生质体的再生	第23-24页
·原生质体得率和再生率的计算	第24页
·PEG介导原生质体的转化	第24页
·待定转化子继代培养和PCR检测	第24页
·转化子分析	第24-25页
3 结果与分析	第25-32页
·丝轴黑粉菌生长曲线	第25页
·影响原生质体制备的因素	第25-29页
·菌龄对原生质体制备的影响	第25-26页
·不同酶及组合浓度对原生质体制备的影响	第26-27页
·不同渗透压稳定剂对原生质体制备的影响	第27-28页
·酶解时间对原生质体制备的影响	第28-29页
·酶解温度对原生质体制备的影响	第29页
·原生质体制备小结	第29-30页
·原生质体再生	第30-31页
·再生培养基成分对原生质体再生率的影响	第30页
·原生质体涂布方法对再生率的影响	第30页
·不同处理对再生率的影响	第30-31页
·PEG介导的原生质体转化	第31-32页
4 讨论	第32-33页
第三章 ras、gpd启动子的克隆及分析	第33-46页
1 材料	第33页
·实验材料	第33页
·菌种	第33页
·培养基	第33页
·试剂	第33页
2 方法	第33-36页
·引物设计	第33-34页
·丝轴黑粉菌袍子的培养与收集	第34页
·丝轴黑粉菌基因组DNA的提取	第34页
·启动子的PCR扩增	第34页
·PCR产物的回收	第34-35页
·目的片段的连接与转化	第35页
·重组质粒的鉴定	第35-36页
·DNA测序	第36页
3 结果与分析	第36-44页
·ras与gpd启动子扩增	第36页
·重组质粒的鉴定	第36-37页
·启动子序列及其分析	第37-44页
·ras启动子序列及其分析	第37-40页
·gpd1启动子及其分析结果	第40-41页
·gpd2启动子及其分析结果	第41-44页
4 讨论	第44-46页
参考文献	第46-51页
附录	第51-61页
附录1:丝轴黑粉菌基因组DNA的提取	第51页
附录2:感受态E.coli DH105的制备	第51页
附录3:重组质粒的转化	第51-52页
附录4:重组质粒的小量提取	第52页
附录5:ras启动子序列同源性比对	第52-54页
附录6:gpd1启动子序列同源性比对	第54-57页
附录7:gpd2启动子序列同源性比对	第57-61页
致谢	第61页