| 摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 缩略词(Abbrevitation) | 第12-14页 |
| 1 文献综述 | 第14-26页 |
| ·沙门氏菌病的流行现状与危害 | 第14-15页 |
| ·沙门氏菌的特征 | 第15-16页 |
| ·沙门氏菌菌毛 | 第16-18页 |
| ·沙门氏菌菌毛的类型 | 第16-17页 |
| ·沙门氏菌菌毛在细菌致病中的作用 | 第17-18页 |
| ·鼠伤寒沙门氏菌对机体的感染与免疫 | 第18-20页 |
| ·沙门氏菌I型菌毛与树突状细胞的相互作用 | 第20-21页 |
| ·沙门氏菌疫苗 | 第21-23页 |
| ·沙门氏菌疫苗载体 | 第23-24页 |
| ·绿色荧光蛋白(GFP) | 第24-26页 |
| 2 研究目的和意义 | 第26-27页 |
| ·为深入研究沙门氏菌致病机理提供依据 | 第26页 |
| ·为设计更加安全高效的沙门氏菌疫苗载体提供理论依据 | 第26-27页 |
| 3 材料与方法 | 第27-40页 |
| ·实验材料 | 第27-31页 |
| ·菌株和质粒 | 第27-28页 |
| ·药品与试剂 | 第28页 |
| ·抗体与细胞因子检测试剂盒 | 第28页 |
| ·主要培养基及其配制 | 第28-29页 |
| ·主要试剂与缓冲液的配制 | 第29-31页 |
| ·本实验所用PCR引物 | 第31页 |
| ·实验动物 | 第31页 |
| ·实验方法 | 第31-40页 |
| ·重组沙门氏菌的构建 | 第31-35页 |
| ·GFP基因的PCR扩增与检测 | 第31页 |
| ·PCR产物的回收与纯化 | 第31-32页 |
| ·PCR产物在T载体上的克隆 | 第32页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第32页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备(氯化钙法) | 第32页 |
| ·连接产物的转化 | 第32页 |
| ·质粒的制备 | 第32-33页 |
| ·重组质粒的构建 | 第33页 |
| ·重组菌的构建 | 第33-34页 |
| ·沙门氏菌的电转化 | 第34页 |
| ·SDS-PAGE | 第34-35页 |
| ·Western-blot | 第35页 |
| ·沙门氏菌菌毛检测 | 第35页 |
| ·GFP的原核表达与纯化 | 第35-36页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第35页 |
| ·GFP的原核表达 | 第35-36页 |
| ·GFP的纯化 | 第36页 |
| ·GFP免疫原性检测 | 第36页 |
| ·重组沙门氏菌对小鼠的接种剂量确定试验 | 第36-37页 |
| ·小鼠的免疫试验 | 第37-40页 |
| ·免疫程序 | 第37-38页 |
| ·细菌计数 | 第38页 |
| ·ELISA方法测定抗体滴度 | 第38页 |
| ·小鼠脾淋巴细胞分离 | 第38页 |
| ·脾淋巴细胞增殖反应试验 | 第38-39页 |
| ·IFN-γ的定量检测 | 第39页 |
| ·IL-4的定量检测 | 第39页 |
| ·统计学分析 | 第39-40页 |
| 4 结果与分析 | 第40-56页 |
| ·GFP在大肠杆菌中的表达 | 第40-42页 |
| ·GFP基因的扩增与克隆 | 第40页 |
| ·原核表达质粒pET-28a-gfp的构建 | 第40-41页 |
| ·GFP在大肠杆菌中的表达与检测 | 第41-42页 |
| ·沙门氏菌重组菌的构建与鉴定 | 第42-45页 |
| ·GFP基因的扩增与克隆 | 第42-43页 |
| ·重组质粒p33h-gfp与p44h-gfp的构建 | 第43页 |
| ·重组沙门氏菌的构建 | 第43-45页 |
| ·重组沙门氏菌接种小鼠的剂量确定 | 第45页 |
| ·AZB109-p33h-gfp、AZB109-p44h-gfp接种小鼠的免疫反应 | 第45-47页 |
| ·沙门氏菌IgG抗体水平检测 | 第45-46页 |
| ·沙门氏菌sIgA抗体水平检测 | 第46-47页 |
| ·GFP抗体水平检测 | 第47页 |
| ·AZB117-p33h-gfp、AZB117-p44h-gfp口服接种小鼠的免疫反应 | 第47-51页 |
| ·沙门氏菌IgG抗体水平检测 | 第47页 |
| ·沙门氏菌sIgA抗体水平检测 | 第47页 |
| ·沙门氏菌抗原刺激的淋巴细胞增殖分析 | 第47-48页 |
| ·沙门氏菌抗原刺激的IFN-γ检测 | 第48页 |
| ·沙门氏菌抗原刺激的IL-4检测 | 第48-49页 |
| ·抗GFP的IgG抗体水平检测 | 第49页 |
| ·GFP刺激的淋巴细胞增殖分析 | 第49-50页 |
| ·GFP刺激的IFN-γ检测 | 第50页 |
| ·GFP刺激的IL-4检测 | 第50-51页 |
| ·AZB117-p33h-gfp、AZB117-p44h-gfp经皮下注射途径接种小鼠的免疫反应 | 第51-56页 |
| ·沙门氏菌IgG抗体水平检测 | 第51页 |
| ·沙门氏菌sIgA抗体水平检测 | 第51-52页 |
| ·沙门氏菌IgM抗体水平检测 | 第52页 |
| ·沙门氏菌抗原刺激的淋巴细胞增殖分析 | 第52-53页 |
| ·沙门氏菌抗原刺激的IFN-γ检测 | 第53页 |
| ·沙门氏菌抗原刺激的IL-4检测 | 第53页 |
| ·抗GFP的IgG抗体水平检测 | 第53-54页 |
| ·抗GFP的IgM抗体水平检测 | 第54-55页 |
| ·GFP刺激的淋巴细胞增殖分析 | 第55页 |
| ·GFP刺激的IFN-γ检测 | 第55页 |
| ·GFP刺激的IL-4检测 | 第55-56页 |
| 5 讨论 | 第56-60页 |
| 6 结论 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-66页 |
| 致谢 | 第66页 |
