中文摘要 | 第1-12页 |
ABSTRACT | 第12-14页 |
1 引言 | 第14-39页 |
·植物转基因技术现状 | 第14-15页 |
·核基质结合序列(MARs) | 第15-29页 |
·核基质结合序列(MARs)的发现 | 第15-16页 |
·核基质结合序列(MARs)的分离与鉴定 | 第16-17页 |
·核基质结合序列(MARs)的结构特征 | 第17-18页 |
·核基质结合序列(MARs)的分类 | 第18-19页 |
·核基质结合序列(MARs)对外源基因的影响 | 第19-22页 |
·核基质结合序列(MARs)对外源基因表达的影响 | 第19-20页 |
·核基质结合序列(MARs)对外源基因沉默的影响 | 第20-21页 |
·核基质结合序列(MARs)对外源基因转化频率的影响.. | 第21-22页 |
·核基质结合序列(MARs)的结合蛋白(MARs binding protei | 第22-26页 |
·核基质结合序列(MARs)作用的分子机理 | 第26-29页 |
·核基质结合序列(MARs)的Loop 环模型 | 第26-28页 |
·核基质结合序列(MARs)序列作用的其它模型 | 第28-29页 |
·DNA 甲基化与去甲基化的分子生物学研究进展 | 第29-38页 |
·DNA 甲基化 | 第29-30页 |
·DNA 甲基化机制 | 第30-34页 |
·植物DNA 甲基化的生物学功能 | 第34-37页 |
·DNA 甲基化与植物生长发育 | 第34-35页 |
·DNA 甲基化可调节植物基因的表达 | 第35-36页 |
·基因组防御 | 第36页 |
·DNA 甲基化与转基因植株的基因沉默 | 第36-37页 |
·DNA 去甲基化 | 第37-38页 |
·研究目的与意义 | 第38-39页 |
2 材料与方法 | 第39-55页 |
·实验材料 | 第39-41页 |
·植物材料 | 第39页 |
·菌株与质粒 | 第39页 |
·酶与各种生化试剂 | 第39-40页 |
·实验用的引物 | 第40-41页 |
·实验方法 | 第41-55页 |
·植物表达载体的构建 | 第41-45页 |
·烟草和拟南芥基因组DNA 的提取(小量法) | 第41页 |
·烟草TM6 MAR 序列的扩增 | 第41-42页 |
·凝胶电泳中DNA 片段的回收 | 第42页 |
·DNA 片段与克隆载体的连接 | 第42-43页 |
·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第43页 |
·大肠杆菌细胞的转化 | 第43页 |
·克隆载体的酶切鉴定 | 第43-44页 |
·质粒DNA 的提取 | 第44-45页 |
·烟草TM6 全长表达载体的构建 | 第45页 |
·植物表达载体的转化 | 第45-48页 |
·根癌农杆菌LBA4404、GV3101 感受态细胞的制备 | 第45-46页 |
·冻融法转化农杆菌 | 第46页 |
·农杆菌的培养 | 第46页 |
·农杆菌介导的烟草的转化 | 第46-47页 |
·农杆菌介导的拟南芥转化 | 第47-48页 |
·转基因烟草和拟南芥PCR 检测 | 第48页 |
·转基因植物的GUS 表达分析 | 第48-51页 |
·转基因烟草植株GUS 组织化学染色分析 | 第48-49页 |
·转基因植物GUS 基因表达的定量分析 | 第49-51页 |
·重亚硫酸盐测序法 | 第51-54页 |
·基因组DNA 的重亚硫酸氢钠化学修饰 | 第51-53页 |
·引物设计及PCR 扩增 | 第53-54页 |
·DNaseI 酶解处理与PCR 扩增 | 第54-55页 |
3 结果与分析 | 第55-68页 |
·TM6 对转基因后代遗传稳定性的影响 | 第55-60页 |
·烟草表达载体的构建 | 第55页 |
·转基因烟草植株的获得 | 第55-56页 |
·T_0 转基因烟草植株的GUS 活性分析 | 第56-57页 |
·BC_1 代烟草植株的获得 | 第57页 |
·BC_1 代烟草植株的组织化学染色分析 | 第57-60页 |
·TM6 对启动子区域DNA 甲基化的影响 | 第60-68页 |
·TM6 侧翼启动子区对DNaseI 敏感性分析 | 第60-61页 |
·重亚硫酸盐测序法对启动子区域DNA 甲基化的分析 | 第61-68页 |
·TM6 对35S-GUS 区域DNA 甲基化的影响 | 第61-63页 |
·TM6 对NOS 启动子区域DNA 甲基化的影响 | 第63-68页 |
3. TM6 序列在转基因拟南芥中对外源基因表达的影响 | 第68-71页 |
·拟南芥转化载体的构建 | 第68-69页 |
·转基因拟南芥植株的获得、鉴定以及纯合体的获得 | 第69页 |
·转基因拟南芥GUS 活性的测定 | 第69-71页 |
4. 讨论 | 第71-75页 |
·TM6 能减少转基因沉默的发生,增强外源基因在转基因后代中的遗传稳定性 | 第71-73页 |
·TM6 在拟南芥中也能提高外源基因表达 | 第73-74页 |
·TM6 的作用依赖于启动子类型,但不能改变启动子的作用模式 | 第74页 |
·研究设想 | 第74-75页 |
5 结论 | 第75-76页 |
参考文献 | 第76-92页 |
附录 | 第92-97页 |
致谢 | 第97-98页 |
入学以来已发表的论文及成果 | 第98页 |