| 摘要 | 第1-12页 |
| ABSTRACT | 第12-16页 |
| 缩略词表(ABBREVIATION) | 第16-18页 |
| 第一章 绪论 | 第18-47页 |
| ·聚羟基脂肪酸酯(PHA)的概述 | 第18-24页 |
| ·聚羟基脂肪酸酯的组成、分类及性质 | 第18-20页 |
| ·PHA的生理功能 | 第20-21页 |
| ·PHA的材料学性质及改性研究 | 第21-22页 |
| ·PHA的应用及展望 | 第22-24页 |
| ·PHA的生物合成途径 | 第24-28页 |
| ·PHA合成的主要途径 | 第24-26页 |
| ·其他天然的PHA生物合成途径 | 第26-27页 |
| ·重组菌的PHA生物合成途径 | 第27-28页 |
| ·PHA代谢相关的酶和蛋白 | 第28-32页 |
| ·PHA合酶(PhaC) | 第29页 |
| ·提供前体的酶 | 第29-31页 |
| ·PHA颗粒结合蛋白(PhaP) | 第31-32页 |
| ·PHA解聚酶(PhaZ) | 第32页 |
| ·PHA的生产 | 第32-37页 |
| ·野生菌中PHA的生产 | 第33页 |
| ·重组菌中PHA的生产 | 第33-34页 |
| ·PHA发酵生产技术 | 第34-35页 |
| ·PHA的提取及检测 | 第35-37页 |
| ·PHA合酶详述 | 第37-45页 |
| ·PHA合酶(PhaC)的分类及催化机制 | 第37-40页 |
| ·PHB合成酶的聚合反应机制:二聚体的存在 | 第40-41页 |
| ·PHA聚合酶的分子进化 | 第41-45页 |
| ·本论文的研究工作及意义 | 第45-47页 |
| 第二章 PHB合成和降解的动态循环在大肠杆菌中的实现对菌株抗性的增强及其潜在应用 | 第47-75页 |
| ·实验材料 | 第48-55页 |
| ·菌株和质粒 | 第48页 |
| ·分子生物学常用工具酶 | 第48-49页 |
| ·常用试剂盒 | 第49页 |
| ·常用生化试剂 | 第49页 |
| ·分子量标准物 | 第49-50页 |
| ·聚合酶链式反应(PCR)用试剂 | 第50页 |
| ·仪器和设备 | 第50-51页 |
| ·常用试剂配方 | 第51-55页 |
| ·实验方法 | 第55-62页 |
| ·菌种保存方法 | 第55页 |
| ·分子生物学常规操作 | 第55页 |
| ·PHB降解酶基因phaZ1的扩增及其重组质粒pQWQ2的构建 | 第55-58页 |
| ·含有PHB合成所需酶基因的质粒pSCP-CAB的构建 | 第58页 |
| ·重组大肠杆菌产PHB以及3-HB的发酵培养 | 第58-59页 |
| ·细菌总蛋白裂解液的制备 | 第59页 |
| ·产PHB重组菌的尼罗红染色及电镜观察 | 第59页 |
| ·气相色谱法(GC)检测PHB | 第59-60页 |
| ·高效液相色谱法(HPLC)定量测定3-羟基丁酸(3HB) | 第60页 |
| ·重组大肠杆菌的压力抗性试验 | 第60-61页 |
| ·重组大肠杆菌的饥饿实验 | 第61页 |
| ·3-HB-CoA活性检测 | 第61-62页 |
| ·实验结果 | 第62-71页 |
| ·重组质粒的构建 | 第62-63页 |
| ·重组菌E.coli DH5α(pSCP-CAB)产PHB的初步鉴定 | 第63-64页 |
| ·phaZ1基因在大肠杆菌中的重组表达 | 第64页 |
| ·氮源缺乏诱导重组菌PHB的产生 | 第64-65页 |
| ·重组菌E.coli DH5α(pSCP-CAB/pQWQ2)的发酵培养 | 第65-67页 |
| ·3HB在大肠杆菌中的利用—3-羟基丁酰CoA的存在 | 第67页 |
| ·PHB循环使重组大肠杆菌能够耐受长期饥饿 | 第67-69页 |
| ·重组大肠杆菌对不同环境压力的抗性研究 | 第69-71页 |
| ·讨论 | 第71-73页 |
| ·本章小结 | 第73-75页 |
| 第三章 PHA合酶的定向进化以及PHA共聚物的体内合成 | 第75-92页 |
| ·实验设计 | 第76-78页 |
| ·材料和方法 | 第78-82页 |
| ·菌株和质粒 | 第78-79页 |
| ·用于筛选杂合酶基因文库的质粒的构建、验证以及线性化 | 第79页 |
| ·杂合酶基因文库的构建 | 第79-80页 |
| ·尼罗红琼脂板涂布法筛选基因文库 | 第80-81页 |
| ·含杂合酶基因的重组菌发酵生产PHB及PHA | 第81页 |
| ·PHB/PHA产物的提取 | 第81页 |
| ·气象色谱法检测PHB和PHA | 第81-82页 |
| ·实验结果与讨论 | 第82-91页 |
| ·pC1CAB重组质粒的构建 | 第82页 |
| ·重组菌E.coli LS5218 ΔfadA(pC1CAB)发酵生产PHB及PHA | 第82-84页 |
| ·PHA合酶杂合酶文库的获得 | 第84-85页 |
| ·尼罗红初筛产PHB菌株 | 第85-86页 |
| ·含杂合酶基因的重组菌利用葡萄糖合成PHB的检验 | 第86-88页 |
| ·杂合酶氮末端PhaC1_(Pa)序列缺失对合成PHB及共聚物的影响 | 第88-90页 |
| ·含杂合酶基因的重组菌利用脂肪酸盐合成PHA共聚物 | 第90-91页 |
| ·本章小结 | 第91-92页 |
| 第四章 以绿色荧光蛋白为手段研究PHB合酶之间的相互作用 | 第92-101页 |
| ·实验设计 | 第92-94页 |
| ·GFP片段重组系统的构建 | 第92-93页 |
| ·实验设计思路流程 | 第93-94页 |
| ·材料和方法 | 第94-96页 |
| ·菌株和质粒 | 第94页 |
| ·phbCAB,phbC基因的扩增和重组载体的构建 | 第94-95页 |
| ·重组菌中酶的表达及产物的HPLC检测 | 第95-96页 |
| ·结果与分析 | 第96-99页 |
| ·GFP片段重组系统的克隆和表达 | 第96-98页 |
| ·重组菌产PHB的HPLC检测 | 第98页 |
| ·荧光检测PHB合酶相互作用 | 第98-99页 |
| ·讨论 | 第99-100页 |
| ·本章小结 | 第100-101页 |
| 结束语 | 第101-102页 |
| 参考文献 | 第102-113页 |
| 致谢 | 第113-114页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第114-115页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第115-116页 |
| 外文论文 | 第116-142页 |
