| 致谢 | 第1-4页 |
| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-14页 |
| 第一章 植物体细胞胚胎发生分子机理研究概述 | 第14-38页 |
| 引言 | 第14页 |
| 1 诱导植物体细胞胚发生的影响因素 | 第14-18页 |
| ·基因型和外植体生理状态是限制因素 | 第14页 |
| ·内源激素平衡是诱导体胚发生的关键 | 第14-16页 |
| ·逆境胁迫反应能够诱导体细胞胚发生 | 第16-17页 |
| ·条件培养基提高体胚发生的诱导频率 | 第17页 |
| ·氮源及其他培养基附加物的促进作用 | 第17-18页 |
| 2 胚性愈伤组织的长期保持的研究 | 第18页 |
| 3 次生胚、畸形胚和再生植株的研究 | 第18-20页 |
| 4 基因表达调控在体胚发生中的作用 | 第20-29页 |
| ·胡萝卜胚性组织中分离到的基因 | 第20-22页 |
| ·SERK 基因的功能及其表达调控 | 第20-21页 |
| ·BM 基因（BABY BOOM） | 第21-22页 |
| ·AGL15 基因（AGAMOUS‐LIKE15） | 第22页 |
| ·从拟南芥合子胚突变体分离到的基因 | 第22-24页 |
| ·LEAFY COTYLEDON1 基因 (LEC1) | 第22-23页 |
| ·LEC2 基因和FUS3 基因 | 第23-24页 |
| ·胚性基因的顺式作用元件1（CEE1） | 第24页 |
| ·拟南芥胚后发育突变体中分离的基因 | 第24-26页 |
| ·WUS 基因和CLV 基因 | 第24-25页 |
| ·PKL 基因 | 第25-26页 |
| ·PT 基因和AMP1 基因 | 第26页 |
| ·其他与植物体细胞胚胎发生相关的基因 | 第26-28页 |
| ·LEA 基因和ECP40 基因 | 第26-27页 |
| ·ABI3 基因对LEA 基因的调控 | 第27-28页 |
| ·HSPs 基因 | 第28页 |
| ·GRP23 基因 | 第28页 |
| ·ATML1 基因 | 第28页 |
| ·体细胞胚发生中的表观遗传学现象 | 第28-29页 |
| 5 体细胞胚发生中的细胞生物学研究 | 第29-32页 |
| ·从体细胞到体胚发生感受态细胞 | 第29-30页 |
| ·能标记胚性细胞的生物化学特征 | 第30-31页 |
| ·胚性细胞的极性建立和生理隔离 | 第31-32页 |
| ·生长素极性运输和分生组织形成 | 第32页 |
| 6 胚性细胞形成中复杂的信号转导途径 | 第32-36页 |
| ·质外体是决定体胚发生的重要信号源 | 第32-34页 |
| ·内源激素信号途径对体细胞胚发生的作用 | 第34-35页 |
| ·胚胎发育中内源IAA 是的变化是有规律的 | 第34页 |
| ·ABA 介导植物中环境胁迫的应答反应 | 第34页 |
| ·GA 信号途径对种子萌发和体胚形成的作用 | 第34-35页 |
| ·胁迫反应促进体细胞胚发生的分子机理 | 第35页 |
| ·钙调素等相关的第二信使的变化规律 | 第35-36页 |
| 7 悬浮培养与体细胞胚发生同步化调控 | 第36-37页 |
| 8 体细胞胚发生在农林业中的应用价值 | 第37-38页 |
| 第二章 杂交鹅掌楸胚胎发育相关 LEC1-like 基因的克隆及表达分析 | 第38-63页 |
| 1 材料与方法 | 第38-52页 |
| ·材料 | 第38-40页 |
| ·RNA 提取方法以及cDNA 的合成 | 第40-42页 |
| ·杂交鹅掌楸的RNA 的提取方法 | 第40页 |
| ·对提取的RNA 质量的检测 | 第40页 |
| ·使用DNaseI 处理以除去DNA 杂质 | 第40-41页 |
| ·cDNA 第一链的合成 | 第41-42页 |
| ·引物设计与目的基因特异性片段的获得 | 第42-43页 |
| ·回收目的基因的片段以及单克隆测序 | 第43-44页 |
| ·切胶回收、纯化DNA | 第43页 |
| ·pGE-T-easy 载体连接 | 第43页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第43-44页 |
| ·质粒转化大肠杆菌 | 第44页 |
| ·筛选阳性克隆的菌株 | 第44页 |
| ·单克隆测序以及峰值分析 | 第44页 |
| ·利用 RACE 技术获得基因片段的侧翼序列 | 第44-48页 |
| ·采用3’RACE 技术获得基因下游序列 | 第44-45页 |
| ·采用5’RACE 技术获得基因上游序列 | 第45-48页 |
| ·序列拼接以及LhL1L 基因全长ORF 的获得 | 第48-49页 |
| ·目的基因1301 表达载体的构建 | 第49-51页 |
| ·对 LhL1L 基因的序列比对和进化树分析 | 第51页 |
| ·利用 RT-PCR 技术半定量分析 LhL1L 差异表达 | 第51-52页 |
| ·利用 LhL1L 转基因烟草体系的建立 | 第52页 |
| ·农杆菌EHA105 感受态的制备 | 第52页 |
| ·表达载体向农杆菌感受态细胞的转化 | 第52页 |
| ·EHA105 农杆菌阳性克隆的鉴定 | 第52页 |
| 2 结果与分析 | 第52-59页 |
| ·总 RNA 的提取以及cDNA 第一链的合成 | 第52-53页 |
| ·采用 RACE 技术得到 LhL1L 基因的全长 | 第53-54页 |
| ·对 LhL1L 基因的序列分析和功能预测 | 第54-56页 |
| ·LhL1L 基因的核苷酸和蛋白质结构特征 | 第54-55页 |
| ·LhL1L 在 B 结构上更相似于 L1L 基因 | 第55-56页 |
| ·对 LhL1L 基因的进化树分析 | 第56-57页 |
| ·半定量分析 LhL1L 在不同器官中的表达特性 | 第57-59页 |
| ·对 Lh-L1L 基因的 1301 表达载体的构建 | 第59页 |
| 3 讨论 | 第59-63页 |
| ·对 LhL1L 基因全长的克隆以及半定量差异表达分析 | 第59-60页 |
| ·LhL1L 的诱导表达作为EC 中体细胞胚胎发生的标记 | 第60-61页 |
| ·LEC1-Like 基因标记不同营养器官中的预决定胚性细胞 | 第61-63页 |
| 第三章 杂交鹅掌楸 FUSCA3 基因的分离克隆及其表达分析 | 第63-74页 |
| 1 材料与方法 | 第63-68页 |
| ·材料 | 第63-64页 |
| ·LhFUS3 基因全长的获得 | 第64页 |
| ·LhFUS3 的序列比对和进化树分析 | 第64页 |
| ·LhFUS3 基因表达载体构建 | 第64页 |
| ·LhFUS3 基因的表达分析 | 第64页 |
| ·LhFUS3 基因全长探针的制备 | 第64-65页 |
| ·对含有全长 LhFUS3 的 pGEM-T 载体线性化 | 第65页 |
| ·体外转录反应制备地高辛标记的RNA 探针 | 第65页 |
| ·杂交鹅掌楸胚性愈伤组织切片的制备 | 第65-66页 |
| ·切片样品的制备 | 第65-66页 |
| ·切片操作方法 | 第66页 |
| ·LhFUS3 基因内含子的克隆 | 第66-68页 |
| ·杂交鹅掌楸DNA 的提取方法以及检测 | 第66-67页 |
| ·使用长片段PCR 法扩增LhFUS3 基因内含子 | 第67-68页 |
| 2 结果与分析 | 第68-72页 |
| ·LhFUS3 基因全长的获得及结构分析 | 第68-69页 |
| ·LhFUS3 的序列比对和进化树分析 | 第69-71页 |
| ·LhFUS3 基因的差异表达分析 | 第71-72页 |
| 3 讨论 | 第72-74页 |
| ·LhFUS3 基因的表达调控具有胚胎发育特征性 | 第72-73页 |
| ·LhFUS3 的表达调控受到生长激素2,4‐D 的诱导 | 第73-74页 |
| 第四章 杂交鹅掌楸 WUS-LIKE 的克隆及其对细胞多潜能性的作用 | 第74-87页 |
| 1 LhWOX1 的克隆、表达分析及载体构建 | 第75-80页 |
| ·材料与方法 | 第75-76页 |
| ·材料 | 第75页 |
| ·LhWOX1 兼并引物设计和目的基因获得 | 第75-76页 |
| ·LhWOX1 的序列比对和结构分析 | 第76页 |
| ·LhWOX1 在不同营养器官中的表达分析 | 第76页 |
| ·结果与分析 | 第76-79页 |
| ·LhWOX1 基因的目的片段扩增 | 第76-78页 |
| ·LhWOX1 基因在不同营养器官中的表达分析 | 第78-79页 |
| ·讨论 | 第79-80页 |
| ·高GC 含量的LhWOX1 基因克隆的技术路线 | 第79页 |
| ·LhWOX1 与 LhL1L 在标记幼嫩器官中的协同作用 | 第79-80页 |
| 2 杂交鹅掌楸LhWOX4 的克隆、表达分析和载体构建 | 第80-87页 |
| ·材料与方法 | 第80-82页 |
| ·材料 | 第80页 |
| ·LhWOX4 兼并引物设计和目的基因获得 | 第80-81页 |
| ·LhWOX4 的表达载体的构建 | 第81页 |
| ·LhWOX1 和LhWOX4 的序列比对和进化树分析 | 第81页 |
| ·LhWOX4 基因的差异表达分析 | 第81-82页 |
| ·结果与分析 | 第82-86页 |
| ·LhWOX4 基因全长的获得和结构分析 | 第82-83页 |
| ·LhWOX4 基因的序列比对和进化树分析 | 第83-85页 |
| ·LhWOX4 基因在不同器官中的表达分析 | 第85-86页 |
| ·讨论 | 第86-87页 |
| 第五章 杂交鹅掌楸 KNOTTED1-LIKE 的克隆及其维持细胞未分化的 功能 | 第87-101页 |
| 1 LhKN1 基因的分离克隆以及表达分析 | 第88-94页 |
| ·材料与方法 | 第88-89页 |
| ·材料 | 第88页 |
| ·LhKN1 兼并引物设计和目的基因获得 | 第88页 |
| ·LhKN1 的基因表达分析 | 第88-89页 |
| ·结果与分析 | 第89-93页 |
| ·LhKN1 基因全长及其预测产物的结构分析 | 第89-91页 |
| ·LhKN1 基因的序列比对和进化树构建 | 第91-93页 |
| ·LhKN1 基因的表达分析 | 第93页 |
| ·讨论 | 第93-94页 |
| 2 LhKN2 基因的克隆、载体构建以及表达分析 | 第94-101页 |
| ·材料与方法 | 第94-95页 |
| ·材料 | 第94页 |
| ·LhKN2 兼并引物设计和目的基因获得 | 第94页 |
| ·LhKN1 和 LhKN2 的序列比对和进化树分析 | 第94-95页 |
| ·LhKN2 的1301 表达载体的构建 | 第95页 |
| ·LhKN2 的基因表达分析 | 第95页 |
| ·结果与分析 | 第95-99页 |
| ·LhKN2 基因全长的获得及结构分析 | 第95页 |
| ·LhKN2 基因的序列比对和进化树分析 | 第95-98页 |
| ·LhKN2 基因的表达分析 | 第98-99页 |
| ·LhKN1 和 LhKN2 基因的载体构建 | 第99页 |
| ·讨论 | 第99-101页 |
| ·LhKN2 与 LhKN1 在调控营养器官发育中的不同作用 | 第99-100页 |
| ·LhKN2 基因在胚性愈伤组织中被相对地抑制表达 | 第100页 |
| ·LhKN2 与 LhKN1 可以标记不同类型的未分化细胞 | 第100-101页 |
| 第六章 杂交鹅掌楸 SERK 基因的克隆及其对胚性感受态细胞的意义 | 第101-117页 |
| 1 杂交鹅掌楸 LhSERK1 的克隆和表达分析 | 第102-110页 |
| ·材料与方法 | 第102-103页 |
| ·材料 | 第102页 |
| ·LhSERK1 兼并引物的设计和基因全长的获得 | 第102-103页 |
| ·LhSERK1 基因的序列比对 | 第103页 |
| ·LhSERK1 基因表达的半定量分析 | 第103页 |
| ·结果与分析 | 第103-109页 |
| ·LhSERK1 基因全长的获得和结构域分析 | 第103-104页 |
| ·LhSERK1 基因的序列比对和进化树分析 | 第104-109页 |
| ·LhSERK1 基因在不同营养器官中的表达分析 | 第109页 |
| ·讨论 | 第109-110页 |
| 2 杂交鹅掌楸 LhSERK2 的克隆和表达分析 | 第110-117页 |
| ·材料与方法 | 第110-111页 |
| ·材料 | 第110页 |
| ·LhSERK2 基因全长的获得 | 第110-111页 |
| ·LhSERK2 基因的序列比对和进化树分析 | 第111页 |
| ·LhSERK2 基因表达的半定量分析 | 第111页 |
| ·结果与分析 | 第111-115页 |
| ·LhSERK2 基因全长的分离克隆 | 第111-112页 |
| ·LhSERK2 基因的序列比对和进化树分析 | 第112-113页 |
| ·LhSERK1 基因和 LhSERK2 基因的进化树分析 | 第113-115页 |
| ·LhSERK2 基因的表达分析 | 第115页 |
| ·讨论 | 第115-117页 |
| ·在高度保守区域设计引物以获得新的基因成员 | 第115-116页 |
| ·LhSERK2 在体细胞再生植株的早期事件中起作用 | 第116-117页 |
| 第七章 杂交鹅掌楸的 FERONIA 基因的分离克隆与表达分析 | 第117-124页 |
| 1 材料与方法 | 第117-118页 |
| ·材料 | 第117-118页 |
| ·LhFER1 兼并引物的设计和基因片段的获得 | 第118页 |
| ·LhFER1 和LhFER2 基因的蛋白质预测和序列比对 | 第118页 |
| ·LhFER1 基因的表达分析 | 第118页 |
| 2 结果与分析 | 第118-122页 |
| ·LhFER1 基因的分离克隆以及 LhFER2 基因的鉴别 | 第118-119页 |
| ·LhFER1 和 LhFER2 基因的序列比对 | 第119-122页 |
| ·LhFER1 基因的差异表达分析 | 第122页 |
| 3 讨论 | 第122-124页 |
| ·聚合酶链式反应造成的基因内部片段缺失 | 第122页 |
| ·LhFER1 对体细胞向受精卵方向转分化中的作用 | 第122-124页 |
| 第八章 杂交鹅掌楸的泛素途径相关基因、以及扩展蛋白基因的克隆 | 第124-131页 |
| 1 LhUBI 基因的克隆和结构域分析 | 第125-128页 |
| ·材料与方法 | 第125页 |
| ·材料 | 第125页 |
| ·LhUBI1 基因的克隆以及 LhUBQ2-5 基因的获得 | 第125页 |
| ·LhUBI1-5 基因的序列比对和结构域分析 | 第125页 |
| ·结果与分析 | 第125-127页 |
| ·LhUBI1-5 基因的克隆及重复结构分析 | 第125-126页 |
| ·LhUBI 蛋白与其他泛素蛋白的序列比对分析 | 第126-127页 |
| ·讨论 | 第127-128页 |
| 2 LhEXP1 基因的克隆 | 第128-131页 |
| ·材料与方法 | 第128-129页 |
| ·材料 | 第128页 |
| ·LhEXP1 基因的分离克隆以及序列比对 | 第128-129页 |
| ·结果与分析 | 第129页 |
| ·讨论 | 第129-131页 |
| 第九章 主要结论和展望 | 第131-141页 |
| 1 主要结论 | 第131-138页 |
| ·LhLEC1-LIKE 基因的分离克隆与叶柄中的预决定胚性细胞 | 第131-132页 |
| ·LhFUS3 基因的分离克隆及其对胚性细胞的标记作用 | 第132页 |
| ·杂交鹅掌楸同源异形框基因 LhWOX1、 LhWOX4、LhKN1 和 LhKN2 对不同营养器官和愈伤组织中的多潜能细胞的标记作用 | 第132-133页 |
| ·LhSERK1 和 LhSERK2 基因的分离克隆及其表达分析 | 第133-134页 |
| ·杂交鹅掌楸 LhFER 基因、UBI 基因和 EXP 基因的分离克隆 | 第134-135页 |
| ·讨论 | 第135-138页 |
| 2 存在的问题 | 第138-139页 |
| ·相对定量 PCR 对基因表达分析中存在误差 | 第138页 |
| ·对基因表达分析没有定位到组织细胞水平 | 第138页 |
| ·缺乏基因功能验证和蛋白质组学上的分析 | 第138-139页 |
| 3 展望 | 第139-141页 |
| ·使用 LhL1L 和LhFUS3 基因标记出愈伤组织内部胚性细胞团 | 第139页 |
| ·使用 LhL1L、LhWOX1 和LhKN1 基因标记不同分化类型的体细胞 | 第139-140页 |
| ·分析 LhSERK 和 LhFER 基因在特定环境下与胚性形成的相关性 | 第140页 |
| ·继续未完成的转基因拟南芥和烟草的功能验证试验 | 第140-141页 |
| 附录 | 第141-143页 |
| 参考文献 | 第143-154页 |
| 详细摘要 | 第154-158页 |
