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东方百合木质素合成相关基因的克隆及功能分析

致谢第1-4页
摘要第4-5页
Abstract第5-10页
第一章 文献综述第10-34页
 1、木质素的结构特征第11-12页
 2、木质素生物合成的途径第12-16页
 3、木质素与植物抗病性第16-18页
 4、木质素生物合成的基因工程第18-25页
   ·利用基因工程抑制木质素的合成第20-24页
   ·利用基因工程提高木质素含量第24-25页
 5、CCR 基因的研究进展第25-30页
   ·CCR 基因的组织表达特征第27-29页
   ·CCR 基因启动子的研究第29-30页
 6、4CL 基因的研究进展第30-34页
第二章 东方百合两个品种茎杆细胞结构及木质素测定分析第34-49页
 1、东方百合茎杆不同发育时期的细胞结构(石蜡切片)第36-43页
   ·材料、试剂与设备第36-37页
     ·实验材料第36页
     ·FAA 固定液第36-37页
     ·脱水所用试剂第37页
     ·浸蜡与包埋所用试剂第37页
     ·脱蜡水化及染色所用试剂第37页
     ·实验设备第37页
   ·东方百合茎杆不同发育时期的细胞切片的制备及观察第37-39页
     ·材料的固定第37页
     ·材料的脱水第37-38页
     ·浸蜡第38页
     ·材料的包埋、切片、展片、染色及封片第38页
     ·切片观察分析第38-39页
   ·结果与分析第39-43页
 2、百合茎杆不同发育时期木质素含量的测定第43-47页
   ·实验材料第43页
   ·酸不溶木质素含量的测定第43-45页
     ·试剂及仪器第43-44页
     ·测定方法和计算第44-45页
   ·酸溶木质素含量的测定第45-46页
     ·应用仪器及器皿第45页
     ·应用试剂和溶液第45页
     ·试样制备第45页
     ·测定方法和计算第45-46页
   ·结果与分析第46-47页
 3、结论与讨论第47-49页
第三章 东方百合LSCCR1 基因的克隆及功能分析第49-86页
 1、材料与方法第49-68页
   ·材料及菌株第49-50页
     ·植物材料第49页
     ·菌株与质粒第49-50页
   ·试剂第50页
   ·仪器第50页
   ·百合LsCCR1 基因的克隆第50-59页
     ·总RNA 的提取及鉴定第50-51页
     ·目的片段的分离第51-56页
     ·目的基因3’端cDNA 的分离第56页
     ·目的基因5’端cDNA 的分离第56-59页
   ·LsCCR1 基因的序列分析第59页
   ·LsCCR1 基因的组织表达特异性分析第59-60页
     ·百合总RNA 的提取第59-60页
     ·半定量RT-PCR 方法进行组织表达特异性分析第60页
   ·荧光定量PCR 方法进行第60-62页
     ·RNA 的提取第60-61页
     ·cDNA 的获得第61页
     ·荧光定量PCR 的引物第61页
     ·定量PCR 反应体系及扩增条件第61-62页
   ·正义表达载体的构建第62-65页
     ·全长cDNA 的分离第63页
     ·目的基因与植物表达载体的连接及转化第63页
     ·重组子的鉴定第63-64页
     ·重组子转化农杆菌第64-65页
   ·农杆菌介导的烟草转化第65-68页
     ·植物培养基第65页
     ·农杆菌的活化及菌液的制备第65页
     ·农杆菌介导的烟草转化第65-66页
     ·转基因植株的检测第66-67页
     ·转基因植株的表型观察第67页
     ·转基因植株木质素含量的测定第67-68页
     ·转基因植株细胞结构观察第68页
 2、结果与分析第68-82页
   ·RNA 的提取及质量检测第68页
   ·百合LsCCR1 基因的克隆第68-69页
     ·目的片段的扩增及回收第68页
     ·目的基因3’端cDNA 的分离第68-69页
     ·目的基因5’端cDNA 的分离第69页
   ·LsCCR1 序列分析第69-73页
   ·LsCCR1 基因的组织表达特异性分析第73-74页
     ·百合总RNA 的提取第73页
     ·半定量RT-PCR 方法进行组织表达特异性分析第73-74页
   ·荧光定量PCR 方法进行第74-75页
   ·正义表达载体的构建第75-78页
     ·全长cDNA 的分离第75页
     ·目的基因与T-载体的连接及转化第75-76页
     ·目的基因与植物表达载体的连接及转化第76页
     ·重组子的鉴定第76-77页
     ·重组子转化农杆菌及菌液鉴定第77-78页
   ·农杆菌介导的烟草转化第78-82页
     ·转基因植株的检测第78-80页
     ·转基因植株的表型观察第80页
     ·转基因植株木质素含量的测定第80页
     ·转基因植株细胞结构观察第80-82页
 3、结论与讨论第82-86页
第四章 东方百合Ls4CL 基因的克隆第86-107页
 1、材料与方法第86-91页
   ·材料及菌株第86页
     ·植物材料第86页
     ·菌株与质粒第86页
   ·百合Ls4CL 基因的克隆第86-88页
     ·总RNA 的提取及鉴定第86页
     ·目的片段的分离第86-87页
     ·目的基因3’端cDNA 的分离第87页
     ·目的基因5’端的向前延伸扩增第87页
     ·目的基因5’端cDNA 的分离第87-88页
   ·半定量RT-PCR 方法进行组织表达特异性分析第88页
   ·Ls4CL 基因的序列分析第88页
   ·正义表达载体的构建第88-91页
     ·单价Ls4CL 基因的正义表达载体构建第89页
     ·双价基因Ls4CL 及LsCCR1 基因的正义表达载体的构建第89-91页
 2、结果与分析第91-104页
   ·百合Ls4CL 基因的克隆第91-92页
     ·目的片段的扩增及回收第91页
     ·目的基因3’端cDNA 的分离第91-92页
     ·目的基因5’端的向前延伸扩增第92页
     ·目的基因5’端cDNA 的分离第92页
   ·半定量 RT-PCR 方法进行组织表达特异性分析第92-93页
   ·Ls4CL 基因的序列分析第93-99页
   ·正义表达载体的构建第99-104页
     ·单价载体的构建第99-100页
     ·双价基因Ls4CL 及LsCCR1 基因的正义表达载体的构建第100-104页
 3、结论与讨论第104-107页
第五章 总结第107-110页
 1、主要结论第107-108页
 2、存在的问题第108-109页
 3、进一步的研究方向第109-110页
参考文献第110-122页
详细摘要第122-128页

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