致谢 | 第1-4页 |
摘要 | 第4-5页 |
Abstract | 第5-10页 |
第一章 文献综述 | 第10-34页 |
1、木质素的结构特征 | 第11-12页 |
2、木质素生物合成的途径 | 第12-16页 |
3、木质素与植物抗病性 | 第16-18页 |
4、木质素生物合成的基因工程 | 第18-25页 |
·利用基因工程抑制木质素的合成 | 第20-24页 |
·利用基因工程提高木质素含量 | 第24-25页 |
5、CCR 基因的研究进展 | 第25-30页 |
·CCR 基因的组织表达特征 | 第27-29页 |
·CCR 基因启动子的研究 | 第29-30页 |
6、4CL 基因的研究进展 | 第30-34页 |
第二章 东方百合两个品种茎杆细胞结构及木质素测定分析 | 第34-49页 |
1、东方百合茎杆不同发育时期的细胞结构(石蜡切片) | 第36-43页 |
·材料、试剂与设备 | 第36-37页 |
·实验材料 | 第36页 |
·FAA 固定液 | 第36-37页 |
·脱水所用试剂 | 第37页 |
·浸蜡与包埋所用试剂 | 第37页 |
·脱蜡水化及染色所用试剂 | 第37页 |
·实验设备 | 第37页 |
·东方百合茎杆不同发育时期的细胞切片的制备及观察 | 第37-39页 |
·材料的固定 | 第37页 |
·材料的脱水 | 第37-38页 |
·浸蜡 | 第38页 |
·材料的包埋、切片、展片、染色及封片 | 第38页 |
·切片观察分析 | 第38-39页 |
·结果与分析 | 第39-43页 |
2、百合茎杆不同发育时期木质素含量的测定 | 第43-47页 |
·实验材料 | 第43页 |
·酸不溶木质素含量的测定 | 第43-45页 |
·试剂及仪器 | 第43-44页 |
·测定方法和计算 | 第44-45页 |
·酸溶木质素含量的测定 | 第45-46页 |
·应用仪器及器皿 | 第45页 |
·应用试剂和溶液 | 第45页 |
·试样制备 | 第45页 |
·测定方法和计算 | 第45-46页 |
·结果与分析 | 第46-47页 |
3、结论与讨论 | 第47-49页 |
第三章 东方百合LSCCR1 基因的克隆及功能分析 | 第49-86页 |
1、材料与方法 | 第49-68页 |
·材料及菌株 | 第49-50页 |
·植物材料 | 第49页 |
·菌株与质粒 | 第49-50页 |
·试剂 | 第50页 |
·仪器 | 第50页 |
·百合LsCCR1 基因的克隆 | 第50-59页 |
·总RNA 的提取及鉴定 | 第50-51页 |
·目的片段的分离 | 第51-56页 |
·目的基因3’端cDNA 的分离 | 第56页 |
·目的基因5’端cDNA 的分离 | 第56-59页 |
·LsCCR1 基因的序列分析 | 第59页 |
·LsCCR1 基因的组织表达特异性分析 | 第59-60页 |
·百合总RNA 的提取 | 第59-60页 |
·半定量RT-PCR 方法进行组织表达特异性分析 | 第60页 |
·荧光定量PCR 方法进行 | 第60-62页 |
·RNA 的提取 | 第60-61页 |
·cDNA 的获得 | 第61页 |
·荧光定量PCR 的引物 | 第61页 |
·定量PCR 反应体系及扩增条件 | 第61-62页 |
·正义表达载体的构建 | 第62-65页 |
·全长cDNA 的分离 | 第63页 |
·目的基因与植物表达载体的连接及转化 | 第63页 |
·重组子的鉴定 | 第63-64页 |
·重组子转化农杆菌 | 第64-65页 |
·农杆菌介导的烟草转化 | 第65-68页 |
·植物培养基 | 第65页 |
·农杆菌的活化及菌液的制备 | 第65页 |
·农杆菌介导的烟草转化 | 第65-66页 |
·转基因植株的检测 | 第66-67页 |
·转基因植株的表型观察 | 第67页 |
·转基因植株木质素含量的测定 | 第67-68页 |
·转基因植株细胞结构观察 | 第68页 |
2、结果与分析 | 第68-82页 |
·RNA 的提取及质量检测 | 第68页 |
·百合LsCCR1 基因的克隆 | 第68-69页 |
·目的片段的扩增及回收 | 第68页 |
·目的基因3’端cDNA 的分离 | 第68-69页 |
·目的基因5’端cDNA 的分离 | 第69页 |
·LsCCR1 序列分析 | 第69-73页 |
·LsCCR1 基因的组织表达特异性分析 | 第73-74页 |
·百合总RNA 的提取 | 第73页 |
·半定量RT-PCR 方法进行组织表达特异性分析 | 第73-74页 |
·荧光定量PCR 方法进行 | 第74-75页 |
·正义表达载体的构建 | 第75-78页 |
·全长cDNA 的分离 | 第75页 |
·目的基因与T-载体的连接及转化 | 第75-76页 |
·目的基因与植物表达载体的连接及转化 | 第76页 |
·重组子的鉴定 | 第76-77页 |
·重组子转化农杆菌及菌液鉴定 | 第77-78页 |
·农杆菌介导的烟草转化 | 第78-82页 |
·转基因植株的检测 | 第78-80页 |
·转基因植株的表型观察 | 第80页 |
·转基因植株木质素含量的测定 | 第80页 |
·转基因植株细胞结构观察 | 第80-82页 |
3、结论与讨论 | 第82-86页 |
第四章 东方百合Ls4CL 基因的克隆 | 第86-107页 |
1、材料与方法 | 第86-91页 |
·材料及菌株 | 第86页 |
·植物材料 | 第86页 |
·菌株与质粒 | 第86页 |
·百合Ls4CL 基因的克隆 | 第86-88页 |
·总RNA 的提取及鉴定 | 第86页 |
·目的片段的分离 | 第86-87页 |
·目的基因3’端cDNA 的分离 | 第87页 |
·目的基因5’端的向前延伸扩增 | 第87页 |
·目的基因5’端cDNA 的分离 | 第87-88页 |
·半定量RT-PCR 方法进行组织表达特异性分析 | 第88页 |
·Ls4CL 基因的序列分析 | 第88页 |
·正义表达载体的构建 | 第88-91页 |
·单价Ls4CL 基因的正义表达载体构建 | 第89页 |
·双价基因Ls4CL 及LsCCR1 基因的正义表达载体的构建 | 第89-91页 |
2、结果与分析 | 第91-104页 |
·百合Ls4CL 基因的克隆 | 第91-92页 |
·目的片段的扩增及回收 | 第91页 |
·目的基因3’端cDNA 的分离 | 第91-92页 |
·目的基因5’端的向前延伸扩增 | 第92页 |
·目的基因5’端cDNA 的分离 | 第92页 |
·半定量 RT-PCR 方法进行组织表达特异性分析 | 第92-93页 |
·Ls4CL 基因的序列分析 | 第93-99页 |
·正义表达载体的构建 | 第99-104页 |
·单价载体的构建 | 第99-100页 |
·双价基因Ls4CL 及LsCCR1 基因的正义表达载体的构建 | 第100-104页 |
3、结论与讨论 | 第104-107页 |
第五章 总结 | 第107-110页 |
1、主要结论 | 第107-108页 |
2、存在的问题 | 第108-109页 |
3、进一步的研究方向 | 第109-110页 |
参考文献 | 第110-122页 |
详细摘要 | 第122-128页 |