| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-8页 |
| 1 引言 | 第8-13页 |
| ·苯乳酸简介 | 第8-9页 |
| ·苯乳酸的理化性质 | 第8页 |
| ·苯乳酸的抑菌性质 | 第8页 |
| ·苯乳酸手性化合物的研究进展 | 第8-9页 |
| ·产生苯乳酸的菌种及酶类 | 第9页 |
| ·乳酸脱氢酶的研究进展 | 第9-11页 |
| ·乳酸脱氢酶简介 | 第9-10页 |
| ·乳酸菌中对苯丙酮酸有活性的乳酸脱氢酶的研究进展 | 第10页 |
| ·乳酸脱氢酶基因的研究进展 | 第10-11页 |
| ·乳酸脱氢酶在大肠杆菌中的表达概况 | 第11页 |
| ·本课题的研究目的及意义 | 第11-12页 |
| ·本课题的研究内容 | 第12-13页 |
| 2. 实验材料与方法 | 第13-21页 |
| ·材料与设备 | 第13-15页 |
| ·菌株与质粒 | 第13页 |
| ·实验主要试剂 | 第13-14页 |
| ·实验仪器 | 第14页 |
| ·培养基及试剂配制及灭菌方法 | 第14-15页 |
| ·实验方法 | 第15-21页 |
| ·引物设计 | 第15-16页 |
| ·PCR 扩增LDH 基因 | 第16-17页 |
| ·重组质粒pMD- ldh 的构建 | 第17-18页 |
| ·重组质粒pET-ldh 的构建 | 第18-19页 |
| ·工程菌BL21(DE3)-pET226-ldh、BL21(DE3)-pET28a-ldh 的构建 | 第19页 |
| ·重组乳酸脱氢酶的诱导表达 | 第19页 |
| ·诱导表达条件的优化 | 第19页 |
| ·BL21(DE3)-pET226-ldhD、BL21(DE3)-pET226-ldhL1、BL21(DE3)-pET226-ldhL2 全细胞转化PPA | 第19页 |
| ·重组乳酸脱氢酶的纯化 | 第19-20页 |
| ·HPLC 测定乳酸脱氢酶还原苯丙酮酸产生苯乳酸 | 第20页 |
| ·重组乳酸脱氢酶的酶学性质 | 第20-21页 |
| 3. 结果与讨论 | 第21-36页 |
| ·植物乳杆菌SK002 LDH 基因的PCR 扩增 | 第21-22页 |
| ·克隆载体PMD-LDHD、PMD-LDHL1、PMD-LDHL2 的构建 | 第22-24页 |
| ·LDH 基因测序分析 | 第24-25页 |
| ·基因工程菌的构建 | 第25-27页 |
| ·工程菌BL21(DE3)-pET226-ldhD、BL21(DE3)-pET28a-ldhD 的构建 | 第25页 |
| ·工程菌BL21(DE3)-pET226-ldhL1 的构建 | 第25-26页 |
| ·工程菌BL21(DE3)-pET226-ldhL2、BL21(DE3)-pET28a-ldhL2 的构建 | 第26-27页 |
| ·重组菌的表达 | 第27-28页 |
| ·基因工程菌BL21(DE3)-pET226-ldhD、BL21(DE3)-pET28a-ldhD、BL21(DE3)-pET226-ldhL1 的表达 | 第27页 |
| ·工程菌BL21(DE3)-pET226-ldhL2、BL21(DE3)-pET28a-ldhL2 的表达 | 第27-28页 |
| ·诱导表达条件的优化 | 第28-29页 |
| ·BL21(DE3)-PET228-LDHD、BL21(DE3)-PET228-LDHL1、BL21(DE3)-PET228-LDHL2 全细胞转化PPA | 第29页 |
| ·重组乳酸脱氢酶的纯化 | 第29-31页 |
| ·重组D-/L1-乳酸脱氢酶的纯化 | 第29-30页 |
| ·重组L2-LDH 的纯化 | 第30-31页 |
| ·HPLC 检测LDH 还原苯丙酮酸生成的苯乳酸 | 第31-32页 |
| ·D-/L1-乳酸脱氢酶的酶学性质 | 第32-36页 |
| ·D-/L1-乳酸脱氢酶的比活力 | 第32-33页 |
| ·pH 对酶活力及稳定性的影响 | 第33-34页 |
| ·温度对酶活力及稳定性的影响 | 第34-35页 |
| ·重组D-/L1-LDH 对丙酮酸、PPA 的Km | 第35-36页 |
| 4. 主要结论 | 第36-38页 |
| 致谢 | 第38-39页 |
| 参考文献 | 第39-46页 |
| 附录：作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第46页 |
