| 缩略词表 | 第1-7页 |
| 摘要 | 第7-9页 |
| ABSTRACT | 第9-12页 |
| 第一章 真核过表达载体pIRES2-EGFP-IGF1和干扰载体pGCsi-IGF1的构建 | 第12-22页 |
| 1 材料 | 第12-13页 |
| ·主要仪器设备 | 第12-13页 |
| ·试剂及耗材 | 第13页 |
| ·组织材料 | 第13页 |
| 2 方法 | 第13-15页 |
| ·牛IGF-I基因克隆以及pMD19-T-IGF1克隆载体的构建 | 第13-14页 |
| ·真核表达型重组质粒pIRES2-EGFP-IGF1的构建 | 第14-15页 |
| ·干扰载体pGCsi-IGF1的构建 | 第15页 |
| 3 结果 | 第15-17页 |
| ·牛肝脏组织总RNA的制备及igf1全长cDNA片段的获得与鉴定 | 第15-16页 |
| ·PCR产物的T-A克隆 | 第16-17页 |
| ·牛igf1 PCR产物测序结果 | 第17页 |
| ·重组真核表达质粒pIRES2-EGFP-IGF1的鉴定 | 第17页 |
| 4 讨论 | 第17-18页 |
| 参考文献 | 第18-22页 |
| 第二章 牛胎儿成纤维细胞的分离与体外培养 | 第22-31页 |
| 1 材料 | 第22-23页 |
| ·主要仪器设备 | 第22页 |
| ·活体材料 | 第22页 |
| ·试剂及耗材 | 第22-23页 |
| ·溶液配方 | 第23页 |
| 2 方法 | 第23-25页 |
| ·牛胎儿成纤维细胞的分离与体外培养 | 第23-24页 |
| ·牛胎儿成纤维细胞生长曲线的测定 | 第24页 |
| ·牛胎儿成纤维细胞中期染色体数目分析 | 第24-25页 |
| ·牛胎儿成纤维细胞对G418耐受性的检测 | 第25页 |
| ·牛胎儿成纤维细胞对潮霉素(Hygromycin B)耐受性的检测 | 第25页 |
| 3 结果 | 第25-27页 |
| ·组织块贴附法分离培养牛胎儿成纤维细胞 | 第25-26页 |
| ·牛胎儿成纤维细胞生长曲线的测定 | 第26页 |
| ·牛胎儿成纤维细胞的染色体数目分析 | 第26-27页 |
| ·牛胎儿成纤维细胞对G418的耐受性检测 | 第27页 |
| ·牛胎儿成纤维细胞对潮霉素的耐受性检测 | 第27页 |
| 4 讨论 | 第27-29页 |
| 参考文献 | 第29-31页 |
| 第三章 牛胎儿成纤维细胞的外源基因转染以及转基因克隆细胞的筛选和鉴定 | 第31-40页 |
| 1 材料 | 第31-32页 |
| ·主要仪器设备 | 第31页 |
| ·试剂及耗材 | 第31-32页 |
| ·溶液配方 | 第32页 |
| 2 方法 | 第32-34页 |
| ·牛胎儿成纤维细胞的外源基因转染 | 第32-33页 |
| ·单细胞克隆的筛选 | 第33页 |
| ·SYBR GREEN I荧光定量Real-Time PCR法检测igf1 mRNA的表达 | 第33-34页 |
| ·稳定整合细胞克隆的鉴定 | 第34页 |
| 3 结果 | 第34-37页 |
| ·脂质体转染牛成纤维细胞及筛选 | 第34-35页 |
| ·电穿孔法转染牛胎儿成纤维细胞及筛选 | 第35页 |
| ·SYBR GREEN I荧光定量Real-Time PCR法检测载体过表达和干扰情况 | 第35-36页 |
| ·单细胞克隆的鉴定与分析 | 第36-37页 |
| 4 讨论 | 第37-39页 |
| ·外源基因转染方法 | 第37页 |
| ·载体生理功能的鉴定 | 第37页 |
| ·单克隆细胞的筛选与鉴定 | 第37-39页 |
| 参考文献 | 第39-40页 |
| 结论 | 第40-41页 |
| 图版 | 第41-45页 |
| 文献综述 | 第45-62页 |
| 参考文献 | 第55-62页 |
| 致谢 | 第62-64页 |
| 攻读学位期间已发表和待发表的学术论文 | 第64页 |
