| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-17页 |
| 英文缩略词表 | 第17-19页 |
| 前言 | 第19-26页 |
| 第一章 PEG化的免疫脂质复合物研究 | 第26-47页 |
| ·实验材料 | 第27-31页 |
| ·质粒、菌株 | 第27页 |
| ·细胞和动物 | 第27页 |
| ·主要试剂 | 第27-28页 |
| ·试剂配制 | 第28-31页 |
| ·实验方法 | 第31-38页 |
| ·质粒DNA的扩增 | 第31-32页 |
| ·质粒DNA的提取和纯化 | 第32页 |
| ·质粒DNA的含量和纯度分析 | 第32-33页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第33页 |
| ·DNA/PEI聚合物的制备 | 第33页 |
| ·空白脂质体的制备 | 第33-34页 |
| ·PEG化脂质复合物(PLP)的制备 | 第34页 |
| ·PEG化免疫脂质复合物(PILP)的制备 | 第34页 |
| ·PILP粒径和电位的测定及其形态学观察 | 第34页 |
| ·PILP的抗酶切实验 | 第34-35页 |
| ·PILP的稳定性实验 | 第35页 |
| ·细胞培养 | 第35-36页 |
| ·8314/EGFP/PILP在SMMC-7721细胞中的表达 | 第36-37页 |
| ·MTT法测PILP对细胞活性的影响 | 第37页 |
| ·PILP在体内介导的EGFP和荧光素酶报告基因的表达 | 第37-38页 |
| ·统计分析 | 第38页 |
| ·实验结果 | 第38-45页 |
| ·质粒DNA的含量和纯度 | 第38页 |
| ·粒径、电位和稳定性评价 | 第38-41页 |
| ·8314/EGFP/PILP在SMMC-7721细胞中的表达 | 第41-43页 |
| ·MTT法测PILP对细胞活性的影响 | 第43页 |
| ·PILP介导的体内基因表达结果 | 第43-45页 |
| ·讨论 | 第45-47页 |
| 第二章 靶向hEGFR mRNA和hTERT mRNA小干扰联合基因治疗 | 第47-77页 |
| ·实验材料 | 第47-53页 |
| ·质粒、细菌、细胞 | 第47页 |
| ·实验动物 | 第47页 |
| ·主要试剂 | 第47-48页 |
| ·试剂配制 | 第48-51页 |
| ·仪器设备 | 第51-53页 |
| ·实验方法 | 第53-60页 |
| ·细胞培养 | 第53页 |
| ·相关pDNA的PILP的制备 | 第53页 |
| ·细胞接种与细胞转染 | 第53页 |
| ·治疗质粒转染肝癌细胞SMMC-7721后hEGFR的表达变化 | 第53-56页 |
| ·检测细胞周期相分布和细胞凋亡 | 第56页 |
| ·荷瘤鼠模型的建立和给药 | 第56-57页 |
| ·肿瘤生长抑制率和生存研究 | 第57页 |
| ·肿瘤标本的评价方法 | 第57-60页 |
| ·实验结果的统计学分析 | 第60页 |
| ·实验结果 | 第60-74页 |
| ·总RNA的纯度和完整性分析 | 第60页 |
| ·实时荧光定量RT-PCR扩增产物鉴定 | 第60-61页 |
| ·实时荧光定量RT-PCR的扩增效率检测 | 第61-63页 |
| ·肝癌细胞SMMC-7721中hEGFR mRNA的表达 | 第63-64页 |
| ·肝癌细胞SMMC-7721周期和凋亡检测 | 第64-67页 |
| ·SMMC-7721I细胞的成瘤率测定 | 第67-70页 |
| ·肿瘤生长抑制率和生存实验 | 第70-71页 |
| ·实时定量RT-PCR检测hEGFR mRNA表达 | 第71-73页 |
| ·Western Blot检测hEGFR蛋白表达 | 第73-74页 |
| ·讨论 | 第74-77页 |
| 第三章 PILP介导的肝特异性shRNA-hTERT治疗实验性人肝癌的实验 | 第77-94页 |
| ·实验材料 | 第78-80页 |
| ·质粒、细胞和动物 | 第78页 |
| ·主要试剂 | 第78-79页 |
| ·实验仪器 | 第79-80页 |
| ·实验方法 | 第80-84页 |
| ·免疫脂质复合物(PILP)的制备和检测 | 第80-81页 |
| ·pApoAI-EGFP的体外不同细胞系的表达 | 第81页 |
| ·端粒酶活性检测 | 第81-82页 |
| ·MTT法分析细胞活性 | 第82页 |
| ·pApoAI-EGFP的体内表达 | 第82页 |
| ·pApoAI-shTERT对裸鼠生存时间和肝癌移殖瘤生长的影响 | 第82-83页 |
| ·不同处理组对裸鼠肝癌移植瘤内hTERT mRNA的影响 | 第83页 |
| ·ApoAI-shTERT对裸鼠肝癌移植瘤细胞端粒酶活性的抑制 | 第83页 |
| ·实验结果的统计学分析 | 第83-84页 |
| ·实验结果 | 第84-92页 |
| ·肝靶向性pApoAI-EGFP质粒的细胞实验 | 第84页 |
| ·肝靶向性pApoAI-shTERT的细胞实验 | 第84-86页 |
| ·体内ApoAI-EGFP载体的表达实验 | 第86-87页 |
| ·ApoAI-shTERT载体的抑瘤作用 | 第87-92页 |
| ·讨论 | 第92-94页 |
| 结论 | 第94-96页 |
| 参考文献 | 第96-103页 |
| 综述 | 第103-120页 |
| 个人简历 | 第120-121页 |
| 在学期间发表的学术论文与研究成果 | 第121-122页 |
| 致谢 | 第122-123页 |
