| 摘要 | 第3-4页 |
| abstract | 第4-5页 |
| 第1章 文献综述 | 第9-21页 |
| 1.1 甾体药物的结构和分类 | 第9-10页 |
| 1.2 甾体激素类药物的合成 | 第10-11页 |
| 1.3 微生物转化植物甾醇生成9-OHAD的研究进展和趋势 | 第11-18页 |
| 1.3.1 植物甾醇摄取与转运生产9-OHAD的进展 | 第11-13页 |
| 1.3.2 微生物转化植物甾醇生产9-OHAD的分子研究 | 第13-16页 |
| 1.3.3 甾体微生物转化的研究趋势和困境 | 第16-18页 |
| 1.4 分枝杆菌转化植物甾醇生成9-OHAD的分子机制 | 第18-19页 |
| 1.4.1 植物甾醇摄取与转运的分子机制 | 第18-19页 |
| 1.4.2 分支杆菌降解甾醇侧链的机理 | 第19页 |
| 1.5 本课题的研究意义及内容 | 第19-21页 |
| 第2章 材料与方法 | 第21-35页 |
| 2.1 实验材料 | 第21-26页 |
| 2.1.1 实验菌种 | 第21-22页 |
| 2.1.2 PCR引物 | 第22-23页 |
| 2.1.3 主要药品 | 第23-24页 |
| 2.1.4 主要试剂 | 第24-25页 |
| 2.1.5 实验仪器 | 第25-26页 |
| 2.1.6 培养基 | 第26页 |
| 2.2 实验方法 | 第26-35页 |
| 2.2.1 质粒DNA提取 | 第26-27页 |
| 2.2.2 PCR引物的处理 | 第27页 |
| 2.2.3 PCR扩增 | 第27-28页 |
| 2.2.4 重叠PCR反应 | 第28页 |
| 2.2.5 酶切反应 | 第28-29页 |
| 2.2.6 琼脂糖凝胶电泳 | 第29页 |
| 2.2.7 琼脂糖凝胶产物纯化 | 第29-30页 |
| 2.2.8 DNA产物的纯化 | 第30页 |
| 2.2.9 DNA分子的连接反应 | 第30-31页 |
| 2.2.10 转化感受态细胞Trans1-T1 | 第31页 |
| 2.2.11 大肠杆菌菌落PCR | 第31-32页 |
| 2.2.12 分枝杆菌电转感受态的制备 | 第32页 |
| 2.2.13 分枝杆菌电转化 | 第32-33页 |
| 2.2.14 分枝杆菌质粒的提取 | 第33页 |
| 2.2.15 分枝杆菌生长曲线的测定 | 第33-34页 |
| 2.2.16 发酵产物的处理与HPLC检测 | 第34-35页 |
| 第3章 甾醇分子转运系统的构建及表达 | 第35-49页 |
| 3.1 引言 | 第35-36页 |
| 3.2 分枝杆菌的形态与培养 | 第36-38页 |
| 3.3 甾醇转运系统的构建 | 第38-41页 |
| 3.3.1 pmv261-mceG表达载体的构建 | 第38-39页 |
| 3.3.2 pmv261-mceG-yrbE4A表达载体的构建 | 第39-40页 |
| 3.3.3 pmv261-yrbE4A-yrbE4B表达载体的构建 | 第40-41页 |
| 3.4 分枝杆菌工程菌的发酵流程 | 第41-42页 |
| 3.4.1 菌种的活化培养 | 第41-42页 |
| 3.4.2 9-OHAD标准曲线的绘制 | 第42页 |
| 3.5 发酵结果与分析 | 第42-48页 |
| 3.5.1 分枝杆菌的生长曲线 | 第42-43页 |
| 3.5.2 9-OHAD的液相色谱图 | 第43-44页 |
| 3.5.3 9-OHAD的标准曲线 | 第44页 |
| 3.5.4 基因工程菌的发酵结果分析 | 第44-48页 |
| 3.6 本章小结 | 第48-49页 |
| 第4章 甾醇分子侧链降解机制研究 | 第49-57页 |
| 4.1 引言 | 第49-50页 |
| 4.2 侧链关键基因在分枝杆菌中的强化表达 | 第50-54页 |
| 4.2.1 细胞色素氧化酶一Mt125及Rj125 | 第50-51页 |
| 4.2.2 酰基辅酶A连接酶一fad19 | 第51-52页 |
| 4.2.3 酰基辅酶A硫解酶一fad A5 | 第52-53页 |
| 4.2.4 酰基辅酶A脱氢酶一R28-29 | 第53页 |
| 4.2.5 Rj125与fad19 的共表达 | 第53-54页 |
| 4.3 发酵结果与分析 | 第54-55页 |
| 4.4 本章小结 | 第55-57页 |
| 第5章 分枝杆菌发酵工艺的优化 | 第57-65页 |
| 5.1 引言 | 第57页 |
| 5.2 甾醇转化发酵工艺的优化 | 第57-59页 |
| 5.2.1 溶氧 | 第57页 |
| 5.2.2 菌种传代 | 第57-58页 |
| 5.2.3 静息细胞发酵法 | 第58-59页 |
| 5.3 结果分析 | 第59-63页 |
| 5.3.1 溶氧对甾醇转化发酵的影响 | 第59页 |
| 5.3.2 菌种传代对甾醇转化发酵的影响 | 第59-61页 |
| 5.3.3 静息细胞法发酵对甾醇转化的影响 | 第61-63页 |
| 5.4 本章小结 | 第63-65页 |
| 第6章 结论及展望 | 第65-67页 |
| 6.1 结论 | 第65页 |
| 6.2 展望 | 第65-67页 |
| 参考文献 | 第67-73页 |
| 发表论文和参加科研情况说明 | 第73-75页 |
| 致谢 | 第75页 |
