| 摘要 | 第10-12页 |
| Abstract | 第12-13页 |
| 缩略词 | 第14-16页 |
| 第一章 前言 | 第16-23页 |
| 1.1 肿瘤早期诊断意义及方法 | 第16-17页 |
| 1.2 肿瘤标志物诊断方法 | 第17-18页 |
| 1.3 肿瘤标志物诊断试剂研发现状 | 第18-19页 |
| 1.4 肿瘤标志物HE4的概述 | 第19-21页 |
| 1.4.1 HE4结构及功能 | 第19-20页 |
| 1.4.2 HE4诊断价值 | 第20-21页 |
| 1.5 肿瘤标志物CA19-9的概述 | 第21-22页 |
| 1.5.1 CA19-9结构功能 | 第21页 |
| 1.5.2 CA19-9诊断价值 | 第21-22页 |
| 1.6 研究目的、意义及内容 | 第22-23页 |
| 第二章 材料与方法 | 第23-47页 |
| 2.1 主要仪器 | 第23-24页 |
| 2.2 主要耗材 | 第24页 |
| 2.3 主要试剂和材料 | 第24-25页 |
| 2.3.1 主要试剂 | 第24页 |
| 2.3.2 E.Coli菌株 | 第24-25页 |
| 2.3.3 质粒载体 | 第25页 |
| 2.3.4 细胞株 | 第25页 |
| 2.3.5 实验动物 | 第25页 |
| 2.3.6 抗原及对照抗体 | 第25页 |
| 2.4 常用溶液及培养基的配制 | 第25-28页 |
| 2.4.1 大肠杆培养相关试剂 | 第25-26页 |
| 2.4.2 PBS(pH 7.45) | 第26页 |
| 2.4.3 核酸电泳相关试剂 | 第26页 |
| 2.4.4 蛋白电泳相关试剂 | 第26-27页 |
| 2.4.5 Western Blot相关试剂 | 第27页 |
| 2.4.6 镍柱纯化相关试剂 | 第27页 |
| 2.4.7 单抗筛选相关试剂: | 第27-28页 |
| 2.4.8 ELISA使相关用试剂 | 第28页 |
| 2.4.9 化学发光微粒子免疫检测试剂 | 第28页 |
| 2.5 实验方法 | 第28-47页 |
| 2.5.1 分子克隆实验方法 | 第28-36页 |
| 2.5.2 单克隆抗体相关技术 | 第36-39页 |
| 2.5.3 ELISA相关实验 | 第39-41页 |
| 2.5.4 抗体纯化及标酶 | 第41-44页 |
| 2.5.5 化学发光微粒子相关实验 | 第44-47页 |
| 第三章 结果与分析 | 第47-68页 |
| 第一部分 HE4单克隆抗体的制备及化学发光检测方法的建立 | 第47-60页 |
| 3.1 HE4-Fe重组抗原制备及鉴定 | 第47页 |
| 3.2 HE4抗原的分段表达及表位鉴定 | 第47-51页 |
| 3.2.1 HE4分段表达重组抗原的表达质粒构建 | 第47-50页 |
| 3.2.2 HE4分段表达重组蛋白的表达纯化及鉴定 | 第50页 |
| 3.2.3 外购商品化单克隆抗体识别表位鉴定 | 第50-51页 |
| 3.3 小鼠免疫多抗血清效价检测 | 第51-53页 |
| 3.4 HE4单克隆抗体制备 | 第53页 |
| 3.5 HE4抗体ELISA水平反应性评估 | 第53-57页 |
| 3.5.1 HE4抗体与重组抗原反应性检测 | 第53-54页 |
| 3.5.2 HE4天然抗原反应性检测 | 第54-56页 |
| 3.5.3 HE4抗体与天然抗原反应性检测 | 第56-57页 |
| 3.6 HE4抗体在CMIA平台的评估 | 第57-59页 |
| 3.7 第一部分小结 | 第59-60页 |
| 第二部分 CA19-9单克隆抗体的制备及化学发光检测方法的建立 | 第60-68页 |
| 3.8 CA19-9天然抗原的获得 | 第60-61页 |
| 3.9 CA19-9免疫条件摸索 | 第61-63页 |
| 3.10 CA19-9单克隆抗体筛选 | 第63-67页 |
| 3.10.1 单抗制备 | 第63页 |
| 3.10.2 CA19-9抗体ELISA水平反应性评估 | 第63-65页 |
| 3.10.3 CA19-9抗体在CMIA平台的评估 | 第65-67页 |
| 3.11 第二部分小结 | 第67-68页 |
| 第四章 讨论 | 第68-71页 |
| 4.1 HE4片段免疫有助于筛选识别不同表位的抗体 | 第68页 |
| 4.2 HE4构象型表位抗体的筛选方法 | 第68页 |
| 4.3 CA19-9免疫策略的尝试 | 第68-69页 |
| 4.4 CA19-9抗原的免疫耐受 | 第69页 |
| 4.5 HE4及CA19-9 CMIA诊断试剂的建立 | 第69-71页 |
| 第五章 结论 | 第71-73页 |
| 参考文献 | 第73-79页 |
| 致谢 | 第79-80页 |
| 附录 | 第80页 |
