| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5页 |
| 第一章 前言 | 第12-26页 |
| 1.1 免疫系统 | 第12-17页 |
| 1.1.1 免疫系统概述 | 第12-13页 |
| 1.1.2 天然免疫中抗病毒机制 | 第13-15页 |
| 1.1.3 干扰素 | 第15-16页 |
| 1.1.4 ISGs | 第16-17页 |
| 1.2 单纯疱疹病毒(HSV) | 第17-21页 |
| 1.2.1 单纯疱疹病毒简介 | 第17-20页 |
| 1.2.2 水疱性口炎病毒(Vesicular Stomatitis Virus,VSV) | 第20-21页 |
| 1.3 前列腺素受体 | 第21-23页 |
| 1.3.1 前列腺素概述 | 第21-22页 |
| 1.3.2 前列腺素受体概述 | 第22-23页 |
| 1.4 G蛋白 | 第23-24页 |
| 1.5 立题背景 | 第24-26页 |
| 第二章 材料与方法 | 第26-48页 |
| 2.1 相关药品和试剂 | 第26-27页 |
| 2.1.1 哺乳动物细胞株 | 第26页 |
| 2.1.2 病毒株 | 第26页 |
| 2.1.3 试剂 | 第26-27页 |
| 2.2 常用实验仪器 | 第27页 |
| 2.3 实验室常用仪器 | 第27-35页 |
| 2.3.1 pBOBI质粒载体 | 第27页 |
| 2.3.2 聚合酶链式扩增反应(Polymerase Chain Reaction, PCR) | 第27-28页 |
| 2.3.3 DNA片段的分离与纯化 | 第28-29页 |
| 2.3.4 酶切质粒反应 | 第29-30页 |
| 2.3.5 DNA连接反应 | 第30页 |
| 2.3.6 连接酶非依赖性克隆Ligase Independent Clone(LIC) | 第30-32页 |
| 2.3.7 制备大肠杆菌感受态细胞 | 第32页 |
| 2.3.8 DNA转化 | 第32-33页 |
| 2.3.9 质粒DNA提取 | 第33-35页 |
| 2.4 细胞相关实验 | 第35-40页 |
| 2.4.1 细胞培养 | 第35-36页 |
| 2.4.2 细胞转染 | 第36-38页 |
| 2.4.3 慢病毒的包装与感染 | 第38-39页 |
| 2.4.4 胞内钙离子浓度检测 | 第39-40页 |
| 2.5 蛋白相关实验 | 第40-41页 |
| 2.5.1 蛋白电泳 | 第40-41页 |
| 2.5.2 免疫印迹 | 第41页 |
| 2.6 Knock out细胞系构建 | 第41-43页 |
| 2.7 荧光素(Luciferase)测定 | 第43页 |
| 2.8 RNA相关实验和方法 | 第43-46页 |
| 2.8.1 细胞总RNA提取 | 第43-44页 |
| 2.8.2 mRNA逆转录 | 第44-46页 |
| 2.9 病毒相关实验 | 第46-48页 |
| 2.9.1 病毒的扩增 | 第46页 |
| 2.9.2 病毒斑形成实验 | 第46-48页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第48-62页 |
| 3.1 利用RNA深度测序寻找HEK293细胞中ISGs | 第48-50页 |
| 3.2 构建质粒库并利用过表达的方法确定ISGs的抗病毒效应 | 第50-51页 |
| 3.3 过表达实验验证蛋白的抗病毒作用 | 第51-53页 |
| 3.3.1 过表达PTGIR基因可以明显抑制HSV的DNA的量 | 第51页 |
| 3.3.2 检测HSV病毒的即刻早期,早期以及晚期蛋白mRNA水平 | 第51-52页 |
| 3.3.3 同家族的蛋白PTGDR同样具有抗病毒的作用 | 第52页 |
| 3.3.4 PTGIR和PTGDR蛋白对VSV病毒也有很好的抑制作用 | 第52-53页 |
| 3.4 上游配体PGI2和PGD2没有抗病毒的作用 | 第53页 |
| 3.5 PTGIR和PTGDR在细胞系中的表达量 | 第53-54页 |
| 3.6 PTGIR和PTGDR在HEL和THP-1细胞中同样也有抗病毒作用 | 第54页 |
| 3.7 利用CRISPR/CAS9的基因敲除技术确定蛋白功能 | 第54-55页 |
| 3.8 探究PTGIR和PTGDR抗病毒的分子机制 | 第55-60页 |
| 3.8.1 利用过表达的方式寻找下游的抗病毒蛋白 | 第55-56页 |
| 3.8.2 利用luciferase实验证明GαS下游信号通路的激活和抗病毒作用的关系 | 第56页 |
| 3.8.3 利用shRNA敲低Gαs不影响PTGIR和PTGDR的抗病毒作用 | 第56-57页 |
| 3.8.4 利用CRISPR/CAS9基因敲除技术敲除Gctq和Gall | 第57-58页 |
| 3.8.5 利用过量表达实验寻找Gas和Gaq下游效应蛋白 | 第58页 |
| 3.8.6 利用抑制剂证明PLC和PLD在PTGDR抗病毒活性中没有作用 | 第58-59页 |
| 3.8.7 检测细胞内钙离子浓度 | 第59-60页 |
| 3.9 讨论 | 第60-62页 |
| 附录1 图表索引 | 第62-63页 |
| 附录2 缩略语及中英文对照 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-72页 |
| 致谢 | 第72页 |
