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抗病毒蛋白的筛选以及前列腺受体蛋白抗病毒作用的探究

摘要第4-5页
Abstract第5页
第一章 前言第12-26页
    1.1 免疫系统第12-17页
        1.1.1 免疫系统概述第12-13页
        1.1.2 天然免疫中抗病毒机制第13-15页
        1.1.3 干扰素第15-16页
        1.1.4 ISGs第16-17页
    1.2 单纯疱疹病毒(HSV)第17-21页
        1.2.1 单纯疱疹病毒简介第17-20页
        1.2.2 水疱性口炎病毒(Vesicular Stomatitis Virus,VSV)第20-21页
    1.3 前列腺素受体第21-23页
        1.3.1 前列腺素概述第21-22页
        1.3.2 前列腺素受体概述第22-23页
    1.4 G蛋白第23-24页
    1.5 立题背景第24-26页
第二章 材料与方法第26-48页
    2.1 相关药品和试剂第26-27页
        2.1.1 哺乳动物细胞株第26页
        2.1.2 病毒株第26页
        2.1.3 试剂第26-27页
    2.2 常用实验仪器第27页
    2.3 实验室常用仪器第27-35页
        2.3.1 pBOBI质粒载体第27页
        2.3.2 聚合酶链式扩增反应(Polymerase Chain Reaction, PCR)第27-28页
        2.3.3 DNA片段的分离与纯化第28-29页
        2.3.4 酶切质粒反应第29-30页
        2.3.5 DNA连接反应第30页
        2.3.6 连接酶非依赖性克隆Ligase Independent Clone(LIC)第30-32页
        2.3.7 制备大肠杆菌感受态细胞第32页
        2.3.8 DNA转化第32-33页
        2.3.9 质粒DNA提取第33-35页
    2.4 细胞相关实验第35-40页
        2.4.1 细胞培养第35-36页
        2.4.2 细胞转染第36-38页
        2.4.3 慢病毒的包装与感染第38-39页
        2.4.4 胞内钙离子浓度检测第39-40页
    2.5 蛋白相关实验第40-41页
        2.5.1 蛋白电泳第40-41页
        2.5.2 免疫印迹第41页
    2.6 Knock out细胞系构建第41-43页
    2.7 荧光素(Luciferase)测定第43页
    2.8 RNA相关实验和方法第43-46页
        2.8.1 细胞总RNA提取第43-44页
        2.8.2 mRNA逆转录第44-46页
    2.9 病毒相关实验第46-48页
        2.9.1 病毒的扩增第46页
        2.9.2 病毒斑形成实验第46-48页
第三章 结果与讨论第48-62页
    3.1 利用RNA深度测序寻找HEK293细胞中ISGs第48-50页
    3.2 构建质粒库并利用过表达的方法确定ISGs的抗病毒效应第50-51页
    3.3 过表达实验验证蛋白的抗病毒作用第51-53页
        3.3.1 过表达PTGIR基因可以明显抑制HSV的DNA的量第51页
        3.3.2 检测HSV病毒的即刻早期,早期以及晚期蛋白mRNA水平第51-52页
        3.3.3 同家族的蛋白PTGDR同样具有抗病毒的作用第52页
        3.3.4 PTGIR和PTGDR蛋白对VSV病毒也有很好的抑制作用第52-53页
    3.4 上游配体PGI2和PGD2没有抗病毒的作用第53页
    3.5 PTGIR和PTGDR在细胞系中的表达量第53-54页
    3.6 PTGIR和PTGDR在HEL和THP-1细胞中同样也有抗病毒作用第54页
    3.7 利用CRISPR/CAS9的基因敲除技术确定蛋白功能第54-55页
    3.8 探究PTGIR和PTGDR抗病毒的分子机制第55-60页
        3.8.1 利用过表达的方式寻找下游的抗病毒蛋白第55-56页
        3.8.2 利用luciferase实验证明GαS下游信号通路的激活和抗病毒作用的关系第56页
        3.8.3 利用shRNA敲低Gαs不影响PTGIR和PTGDR的抗病毒作用第56-57页
        3.8.4 利用CRISPR/CAS9基因敲除技术敲除Gctq和Gall第57-58页
        3.8.5 利用过量表达实验寻找Gas和Gaq下游效应蛋白第58页
        3.8.6 利用抑制剂证明PLC和PLD在PTGDR抗病毒活性中没有作用第58-59页
        3.8.7 检测细胞内钙离子浓度第59-60页
    3.9 讨论第60-62页
附录1 图表索引第62-63页
附录2 缩略语及中英文对照第63-64页
参考文献第64-72页
致谢第72页

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