| 中文摘要 | 第5-7页 |
| abstract | 第7-9页 |
| 前言 | 第15-17页 |
| 第一篇 文献综述 | 第17-29页 |
| 1 布鲁氏菌病 | 第17-18页 |
| 2 IL-1家族简介 | 第18-20页 |
| 3 IL-1和IL-1Ra在正常机体中的生理平衡 | 第20-21页 |
| 4 IL-1β和IL-1Ra在布鲁氏菌病诊断的应用 | 第21-22页 |
| 5 IL-1β和IL-1Ra与其它疾病的关系 | 第22-27页 |
| 5.1 IL-1β和IL-1Ra与关节炎的关系 | 第22-23页 |
| 5.2 IL-1β和IL-1Ra与炎症性肠病关系 | 第23-24页 |
| 5.3 IL-1β和IL-1Ra与肺病的关系 | 第24页 |
| 5.4 IL-1β和IL-1Ra与肾病的关系 | 第24-25页 |
| 5.5 IL-1β和IL-1Ra与肝脏和胰腺疾病的关系 | 第25-26页 |
| 5.6 IL-1β和IL-1Ra与癌症的关系 | 第26页 |
| 5.7 IL-1β和IL-1Ra与其它疾病的关系 | 第26-27页 |
| 6 IL-1β和IL-1Ra的相关检测方法 | 第27-29页 |
| 第二篇 研究内容 | 第29-87页 |
| 第1章 IL-1β和IL-1Ra同源保守序列分析与表达 | 第29-46页 |
| 1.1 材料 | 第29-32页 |
| 1.1.1 引物 | 第29-31页 |
| 1.1.2 主要试剂 | 第31页 |
| 1.1.3 主要仪器设备 | 第31-32页 |
| 1.1.4 主要材料制备 | 第32页 |
| 1.2 方法 | 第32-39页 |
| 1.2.1 IL-1β和IL-1Ra保守区序列的选择及引物设计 | 第32-33页 |
| 1.2.2 IL-1β和IL-1Ra目标片段的克隆 | 第33页 |
| 1.2.3 PCR产物纯化和IL-1β-2与IL-1Ra-2基因串联 | 第33页 |
| 1.2.4 pMCSG9载体质粒提取 | 第33-34页 |
| 1.2.5 pMCSG9-IL-1β-1和pMCSG9-IL-1Ra-1表达菌的构建 | 第34-36页 |
| 1.2.6 pMCSG9-IL-1β-1Ra-2表达菌的构建 | 第36-37页 |
| 1.2.7 重组蛋白表达与纯化 | 第37-39页 |
| 1.3 结果 | 第39-44页 |
| 1.3.1 IL-1β和IL-1Ra保守序列的选择 | 第39页 |
| 1.3.2 IL-1β和IL-1Ra保守区片段的克隆 | 第39-40页 |
| 1.3.3 IL-1β与IL-1Ra的基因串联 | 第40-41页 |
| 1.3.4 pMCSG9-IL-1β-1和pMCSG9-IL-1Ra-1转化入DH5α菌液鉴定 | 第41页 |
| 1.3.5 pMCSG9-IL-1β-1Ra-2表达载体的构建 | 第41-42页 |
| 1.3.6 IL-1β-1、IL-1Ra-1和IL-1β-1Ra-2蛋白的表达和纯化 | 第42-44页 |
| 1.4 讨论 | 第44-45页 |
| 1.5 小结 | 第45-46页 |
| 第2章 IL-1β和IL-1Ra多克隆抗体的制备与特性分析 | 第46-55页 |
| 2.1 材料 | 第46-47页 |
| 2.1.1 主要试剂 | 第46页 |
| 2.1.2 主要仪器 | 第46页 |
| 2.1.3 主要材料 | 第46-47页 |
| 2.2 方法 | 第47-51页 |
| 2.2.1 动物免疫 | 第47-48页 |
| 2.2.2 抗体效价检测 | 第48-49页 |
| 2.2.3 多克隆抗体的纯化 | 第49-50页 |
| 2.2.4 抗体鉴定与分析 | 第50-51页 |
| 2.3 结果 | 第51-53页 |
| 2.3.1 多克隆抗体的纯化 | 第51页 |
| 2.3.2 多克隆抗体的特异性分析 | 第51-52页 |
| 2.3.3 多克隆抗体与天然IL-1β和IL-1Ra蛋白结合 | 第52-53页 |
| 2.4 讨论 | 第53-54页 |
| 2.5 小结 | 第54-55页 |
| 第3章 IL-1β和IL-1Ra双荧光ELISA检测方法的建立 | 第55-71页 |
| 3.1 材料 | 第55-56页 |
| 3.1.1 主要试剂 | 第55页 |
| 3.1.2 主要仪器 | 第55页 |
| 3.1.3 主要材料 | 第55-56页 |
| 3.2 方法 | 第56-59页 |
| 3.2.1 检测抗体偶联荧光微球 | 第56页 |
| 3.2.2 ELISA条件的优化 | 第56-57页 |
| 3.2.3 ELISA标准曲线的建立及回收率分析 | 第57-58页 |
| 3.2.4 ELISA最低检测限的确定 | 第58页 |
| 3.2.5 IL-1β和IL-1Ra双抗体夹心荧光ELISA方法的评价 | 第58-59页 |
| 3.3 结果 | 第59-69页 |
| 3.3.1 检测多抗偶联荧光微球 | 第59-60页 |
| 3.3.2 捕获抗体与检测抗体的最佳工作浓度的确定 | 第60-61页 |
| 3.3.3 抗原作用时间与检测抗体作用时间的确定 | 第61-62页 |
| 3.3.4 最佳封闭时间的确定 | 第62-63页 |
| 3.3.5 标准曲线及回收率 | 第63-65页 |
| 3.3.6 最低检测限的确定 | 第65页 |
| 3.3.7 双抗体夹心双荧光ELISA方法的性能评价 | 第65-69页 |
| 3.4 讨论 | 第69-70页 |
| 3.5 小结 | 第70-71页 |
| 第4章 IL-1β和IL-1Ra双荧光ELISA检测方法临床实际样品检测应用分析 | 第71-87页 |
| 4.1 材料 | 第71-72页 |
| 4.1.1 样品采集 | 第71页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第71页 |
| 4.1.3 主要仪器 | 第71-72页 |
| 4.1.4 主要材料 | 第72页 |
| 4.2 方法 | 第72-73页 |
| 4.2.1 布鲁氏菌病相关羊血样中IL-1β和IL-1Ra含量分析 | 第72页 |
| 4.2.2 IBD模型小鼠血清样品中IL-1β和IL-1Ra含量分析 | 第72-73页 |
| 4.2.3 健康人血清样中IL-1β和IL-1Ra含量分析 | 第73页 |
| 4.3 结果 | 第73-85页 |
| 4.3.1 羊IL-1β和IL-1Ra检测分析 | 第73-79页 |
| 4.3.2 IBD模型小鼠IL-1β和IL-1Ra检测分析 | 第79-83页 |
| 4.3.3 人血清样品IL-1β和IL-1Ra检测 | 第83-85页 |
| 4.4 讨论 | 第85-86页 |
| 4.5 小结 | 第86-87页 |
| 结论 | 第87-88页 |
| 参考文献 | 第88-97页 |
| 导师简介 | 第97-98页 |
| 作者简介及在学期间所取得的科研成果 | 第98-99页 |
| 致谢 | 第99页 |
