| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 第1章 绪论 | 第19-31页 |
| 1.1 研究背景及意义 | 第19-20页 |
| 1.1.1 研究背景 | 第19-20页 |
| 1.1.2 研究意义 | 第20页 |
| 1.2 微孢子虫研究进展 | 第20-23页 |
| 1.2.1 微孢子虫的超微结构与生活史 | 第20-22页 |
| 1.2.2 微孢子虫基因组学与蛋白质组学的研究进展 | 第22-23页 |
| 1.3 微孢子虫检测技术研究进展 | 第23-25页 |
| 1.3.1 染色法识别微孢子虫 | 第23页 |
| 1.3.2 免疫学技术检测微孢子虫 | 第23页 |
| 1.3.3 分子生物学技术检测微孢子虫 | 第23-25页 |
| 1.4 纳米金比色法 | 第25-27页 |
| 1.4.1 纳米金比色法检测Hg~（2+） | 第25页 |
| 1.4.2 纳米金比色法检测核酸物质 | 第25-26页 |
| 1.4.3 纳米金比色法检测蛋白质 | 第26-27页 |
| 1.5 SAS-6蛋白质研究进展 | 第27-29页 |
| 1.5.1 SAS-6蛋白质结构研究 | 第27-28页 |
| 1.5.2 SAS-6蛋白质功能研究 | 第28-29页 |
| 1.6 研究内容 | 第29-31页 |
| 第2章 应用荧光染色剂Fluorescent Brightener 28和Propidium Iodide染色识别家蚕微孢子虫 | 第31-37页 |
| 2.1 实验材料 | 第31页 |
| 2.1.1 病原物来源及供试家蚕品种 | 第31页 |
| 2.1.2 感染幼虫中肠、母蛾、卵、蚁蚕的获取 | 第31页 |
| 2.1.3 主要仪器和试剂 | 第31页 |
| 2.2 实验方法 | 第31-32页 |
| 2.2.1 幼虫中肠样品染色 | 第31-32页 |
| 2.2.2 母蛾样品染色 | 第32页 |
| 2.2.3 蚕卵样品染色 | 第32页 |
| 2.2.4 蚁蚕样品染色 | 第32页 |
| 2.3 结果与分析 | 第32-35页 |
| 2.3.1 感染家蚕幼虫中肠的检测效果 | 第32-33页 |
| 2.3.2 感染母蛾的检测效果 | 第33-34页 |
| 2.3.3 感染蚕卵的检测效果 | 第34页 |
| 2.3.4 感染蚁蚕的检测效果 | 第34-35页 |
| 2.4 讨论 | 第35-37页 |
| 第3章 纳米金比色法与免疫技术结合检测家蚕微孢子虫 | 第37-45页 |
| 3.1 实验材料 | 第37页 |
| 3.1.1 微孢子虫 | 第37页 |
| 3.1.2 主要仪器和试剂 | 第37页 |
| 3.2 实验方法 | 第37-38页 |
| 3.2.1 纳米金(AuNPs)制备 | 第37页 |
| 3.2.2 家蚕微孢子虫总蛋白提取及其抗体制备 | 第37-38页 |
| 3.2.3 抗体与AuNPs结合的最佳pH确定 | 第38页 |
| 3.2.4 AuNPs与抗体结合的最佳浓度测定 | 第38页 |
| 3.2.5 AuNPs探针制备 | 第38页 |
| 3.2.6 纳米金探针活性及其特异性测定 | 第38页 |
| 3.2.7 纳米金探针灵敏性测定 | 第38页 |
| 3.3 结果与分析 | 第38-42页 |
| 3.3.1 AuNPs的制备 | 第38-39页 |
| 3.3.2 N.bombycis总蛋白抗体制备 | 第39-40页 |
| 3.3.3 最适标记pH和最适抗体量 | 第40-41页 |
| 3.3.4 AuNPs探针活性及其特异性测定 | 第41-42页 |
| 3.3.5 AuNPs比色法灵敏性测定 | 第42页 |
| 3.4 讨论 | 第42-45页 |
| 第4章 纳米金比色法与LAMP技术结合检测家蚕微孢子虫 | 第45-55页 |
| 4.1 实验材料 | 第45页 |
| 4.1.1 蚕种 | 第45页 |
| 4.1.2 微孢子虫、细菌、真菌和病毒 | 第45页 |
| 4.1.3 主要仪器和试剂 | 第45页 |
| 4.2 实验方法 | 第45-47页 |
| 4.2.1 FTA法提取微孢子虫基因组 | 第45页 |
| 4.2.2 PCR引物设计、反应体系与反应条件 | 第45-46页 |
| 4.2.3 LAMP引物设计、反应体系及反应条件的优化 | 第46页 |
| 4.2.4 纳米金制备 | 第46页 |
| 4.2.5 AuNP探针制备 | 第46-47页 |
| 4.2.6 AuNP与LAMP产物杂交条件优化 | 第47页 |
| 4.2.7 比较LAMP-AuNP法和PCR法检测的灵敏度 | 第47页 |
| 4.2.8 LAMP-AuNP法特异性分析 | 第47页 |
| 4.2.9 LAMP-AuNP法与PCR法检测带毒蚕卵 | 第47页 |
| 4.3 结果与分析 | 第47-53页 |
| 4.3.1 LAMP反应温度优化 | 第47-48页 |
| 4.3.2 LAMP反应时间优化 | 第48-49页 |
| 4.3.3 LAMP反应引物特异性分析 | 第49页 |
| 4.3.4 LAMP产物与AuNP探针杂交比例优化 | 第49-50页 |
| 4.3.5 盐浓度对比色实验影响 | 第50页 |
| 4.3.6 LAMP-AuNP和PCR法灵敏度比较 | 第50-51页 |
| 4.3.7 LAMP-AuNP法特异性检测 | 第51-52页 |
| 4.3.8 LAMP-AuNP法检测带毒蚕卵 | 第52-53页 |
| 4.4 讨论 | 第53-55页 |
| 第5章 家蚕微孢子虫SAS-6蛋白鉴定及其定位研究 | 第55-73页 |
| 5.1 实验材料 | 第55页 |
| 5.1.1 家蚕微孢子虫 | 第55页 |
| 5.1.2 主要仪器和试剂 | 第55页 |
| 5.2 实验方法 | 第55-59页 |
| 5.2.0 家蚕微孢子虫DNA提取 | 第55页 |
| 5.2.1 家蚕微孢子虫SAS-6基因克隆 | 第55-56页 |
| 5.2.2 NSAS-6蛋白氨基酸序列分析 | 第56页 |
| 5.2.3 NSAS-6重组蛋白表达 | 第56-57页 |
| 5.2.4 NSAS-6重组蛋白纯化 | 第57页 |
| 5.2.5 Western blot鉴定NSAS-6重组蛋白 | 第57-58页 |
| 5.2.6 多克隆抗体制备及其效价检测 | 第58页 |
| 5.2.7 纯化N.bombycis孢子 | 第58页 |
| 5.2.8 家蚕微孢子虫总蛋白及孢原质蛋白提取 | 第58-59页 |
| 5.2.9 Western blot检测N.bombycis中NSAS-6蛋白 | 第59页 |
| 5.2.10 N.bombycis接种BmN细胞 | 第59页 |
| 5.2.11 NSAS-6蛋白亚细胞定位 | 第59页 |
| 5.3 结果与分析 | 第59-70页 |
| 5.3.1 NSAS-6基因克隆 | 第59-60页 |
| 5.3.2 生物信息学分析 | 第60-64页 |
| 5.3.3 NSAS-6重组蛋白表达及纯化 | 第64-66页 |
| 5.3.4 NSAS-6蛋白免疫印迹分析 | 第66-67页 |
| 5.3.5 NSAS-6蛋白免疫定位 | 第67-70页 |
| 5.4 讨论 | 第70-73页 |
| 结论 | 第73-77页 |
| 参考文献 | 第77-85页 |
| 附录 | 第85-87页 |
| 攻读硕士期间发表的学术论文 | 第87-89页 |
| 致谢 | 第89页 |
