| 英文缩写说明 | 第7-8页 |
| 摘要 | 第8-10页 |
| abstract | 第10-11页 |
| 第1章 绪论 | 第18-26页 |
| 1.1 microRNA | 第18-19页 |
| 1.1.1 miRNA的发现 | 第18页 |
| 1.1.2 miRNA的生物合成 | 第18-19页 |
| 1.1.3 miRNA的靶向机制 | 第19页 |
| 1.2 宿主编码的miRNA与宿主免疫 | 第19-21页 |
| 1.2.1 宿主miRNA抑制病毒复制 | 第20页 |
| 1.2.2 宿主miRNA为病毒的增殖提供更适宜的细胞内环境 | 第20-21页 |
| 1.3 miRNA与昆虫免疫 | 第21-23页 |
| 1.3.1 家蚕与家蚕核型多角体病毒 | 第21-22页 |
| 1.3.2 家蚕编码的miRNA在昆虫-病毒互作中的研究 | 第22-23页 |
| 1.4 本课题研究目的及意义 | 第23-24页 |
| 1.5 本课题主要研究内容与技术路线 | 第24-26页 |
| 1.5.1 主要研究内容 | 第24页 |
| 1.5.2 试验技术路线 | 第24-26页 |
| 第2章 家蚕感染BmNPV相关miRNAs的鉴定 | 第26-42页 |
| 2.1 引言 | 第26页 |
| 2.2 实验材料与试剂 | 第26-28页 |
| 2.2.1 材料及试剂 | 第26页 |
| 2.2.2 实验仪器及设备 | 第26-27页 |
| 2.2.3 试剂的配制 | 第27页 |
| 2.2.4 生物信息学软件 | 第27-28页 |
| 2.3 实验方法 | 第28-32页 |
| 2.3.1 家蚕品系及病毒接种 | 第28页 |
| 2.3.2 总RNA提取 | 第28-29页 |
| 2.3.3 小RNA文库的建立以及solexa测序分析 | 第29页 |
| 2.3.4 新型miRNA的预测 | 第29页 |
| 2.3.5 靶基因的预测以及GO分析 | 第29-30页 |
| 2.3.6 逆转录PCR分析 | 第30-31页 |
| 2.3.7 差异表达的miRNA | 第31页 |
| 2.3.8 实时定量PCR | 第31-32页 |
| 2.4 结果与分析 | 第32-40页 |
| 2.4.1 BmNPV感染的确认 | 第32页 |
| 2.4.2 两个测序的小RNA文库的概述 | 第32-33页 |
| 2.4.3 miRNAs鉴定 | 第33-37页 |
| 2.4.4 BmNPV感染后差异表达的miRNAs | 第37-40页 |
| 2.4.5 差异表达miRNAs的靶基因预测及其GO分析 | 第40页 |
| 2.5 本章讨论 | 第40-42页 |
| 第3章 miR-277-5p靶基因的预测及验证 | 第42-54页 |
| 3.1 引言 | 第42页 |
| 3.2 材料与试剂 | 第42-44页 |
| 3.2.1 实验材料与试剂 | 第42页 |
| 3.2.2 实验仪器与设备 | 第42-43页 |
| 3.2.3 试剂的配制 | 第43-44页 |
| 3.3 实验方法 | 第44-49页 |
| 3.3.1 生物信息学预测靶基因 | 第44页 |
| 3.3.2 E.coliDH5α感受态细胞制备 | 第44-45页 |
| 3.3.3 双荧光素酶报告基因载体的构建 | 第45-47页 |
| 3.3.4 293T细胞培养 | 第47-48页 |
| 3.3.5 miR-277-5p对靶基因作用验证 | 第48-49页 |
| 3.4 结果与分析 | 第49-52页 |
| 3.4.1 miR-277-5p靶基因的预测 | 第49-50页 |
| 3.4.2 双荧光素酶报告基因载体的构建及测序验证 | 第50-51页 |
| 3.4.3 双荧光素酶报告基因系统验证靶基因Dnmt2 | 第51-52页 |
| 3.5 本章讨论 | 第52-54页 |
| 第4章 Dnmt基因在家蚕-BmNPV互作中的作用 | 第54-66页 |
| 4.1 引言 | 第54页 |
| 4.2 材料与试剂 | 第54-55页 |
| 4.2.1 实验材料与试剂 | 第54页 |
| 4.2.2 实验仪器与设备 | 第54页 |
| 4.2.3 试剂的配制 | 第54-55页 |
| 4.3 实验方法 | 第55-60页 |
| 4.3.1 家蚕BmN细胞的培养 | 第55-56页 |
| 4.3.2 不同浓度zebularine处理BmN细胞后MTT法检测细胞毒性 | 第56页 |
| 4.3.3 不同浓度zebularine处理BmN细胞并且感染BmNPV-GFP | 第56-57页 |
| 4.3.4 Crisprcas9载体的构建 | 第57-58页 |
| 4.3.5 CRISPR/Cas9-Dnmt质粒转染家蚕BmN细胞 | 第58-59页 |
| 4.3.6 DNA提取 | 第59-60页 |
| 4.3.7 实时荧光定量PCR检测BmNPV增殖水平 | 第60页 |
| 4.4 结果分析 | 第60-64页 |
| 4.4.1 甲基化酶抑制剂zebularine验证Dnmt在家蚕-BmNPV互作中的作用 | 第60-62页 |
| 4.4.2 CRISPR/Cas9系统验证Dnmt在家蚕-BmNPV互作中的作用 | 第62-64页 |
| 4.5 本章讨论 | 第64-66页 |
| 结论 | 第66-68页 |
| 参考文献 | 第68-73页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学位论文 | 第73-74页 |
| 致谢 | 第74页 |
