| 摘要 | 第4-6页 |
| abstract | 第6-8页 |
| 第1章 前言 | 第12-24页 |
| 1.1 基孔肯雅病毒概述 | 第12-21页 |
| 1.1.1 基孔肯雅病毒分类 | 第12-13页 |
| 1.1.2 基孔肯雅病毒的流行病学和病原特征 | 第13-14页 |
| 1.1.3 基孔肯雅病毒粒子形态结构 | 第14页 |
| 1.1.4 基孔肯雅病毒的基因组结构特点及生命周期 | 第14-15页 |
| 1.1.5 基孔肯雅病毒的结构蛋白功能 | 第15-16页 |
| 1.1.6 基孔肯雅病毒非结构蛋白的功能 | 第16页 |
| 1.1.7 基孔肯雅病毒诊断检测方法 | 第16-19页 |
| 1.1.8 基孔肯雅病毒疫苗研制及治疗策略 | 第19-20页 |
| 1.1.9 单克隆抗体概述及应用 | 第20-21页 |
| 1.2 本研究的目的和意义 | 第21-24页 |
| 1.2.1 基孔肯雅病毒和寨卡病毒双重荧光定量RT-PCR研究的意义 | 第21-22页 |
| 1.2.2 基孔肯雅病毒结构蛋白E2单克隆抗体的制备意义 | 第22-24页 |
| 第2章 基孔肯雅病毒和寨卡病毒双重荧光定量RT-PCR建立 | 第24-36页 |
| 2.1 实验材料 | 第24-25页 |
| 2.1.1 实验仪器 | 第24页 |
| 2.1.2 细胞系、病毒 | 第24-25页 |
| 2.1.3 化学试剂和试剂盒 | 第25页 |
| 2.2 实验方法 | 第25-30页 |
| 2.2.1 基孔肯雅病毒和寨卡病毒病毒RNA提取 | 第25-26页 |
| 2.2.2 基孔肯雅病毒和寨卡病毒感染细胞总RNA提取 | 第26页 |
| 2.2.3 双重实时荧光定量RT-PCR引物和探针的设计 | 第26-27页 |
| 2.2.4 双重实时荧光定量RT-PCR体系的配制 | 第27页 |
| 2.2.5 双重实时荧光定量RT-PCR标准曲线建立 | 第27-28页 |
| 2.2.6 双重实时荧光定量RT-PCR法灵敏度和特异性检测 | 第28页 |
| 2.2.7 双重实时荧光定量RT-PCR法检测不同株的CHIKV和ZIKV | 第28-29页 |
| 2.2.8 双重实时荧光定量RT-PCR法检测ZIKV生长曲线 | 第29-30页 |
| 2.2.9 双重实时荧光定量RT-PCR法检测临床样本 | 第30页 |
| 2.3 实验结果 | 第30-35页 |
| 2.3.1 双重实时荧光定量RT-PCR标准曲线 | 第30-31页 |
| 2.3.2 双重实时荧光定量RT-PCR灵敏度检测 | 第31页 |
| 2.3.3 双重实时荧光定量RT-PCR特异性检测 | 第31-32页 |
| 2.3.4 双重实时荧光定量RT-PCR检测不同毒株的CHIKV和ZIKV | 第32-33页 |
| 2.3.5 双重实时荧光定量RT-PCR检测临床样本 | 第33-34页 |
| 2.3.6 双重荧光定量RT-PCR检测寨卡病毒(ZIKV)生长曲线 | 第34-35页 |
| 2.4 讨论 | 第35-36页 |
| 第3章 基孔肯雅病毒结构蛋白E2单克隆抗体制备及鉴定 | 第36-70页 |
| 3.1 实验材料 | 第36-37页 |
| 3.1.1 仪器及设备 | 第36页 |
| 3.1.2 材料菌株、细胞、病毒、小鼠 | 第36-37页 |
| 3.1.3 质粒、酶、器材 | 第37页 |
| 3.1.4 试剂盒及相关试剂 | 第37页 |
| 3.2 实验方法 | 第37-53页 |
| 3.2.1 基孔肯雅病毒结构蛋白E2的表达纯化 | 第37-41页 |
| 3.2.2 基孔肯雅病毒E2蛋白原核表达 | 第41页 |
| 3.2.3 基孔肯雅病毒E2蛋白纯化 | 第41-43页 |
| 3.2.4 单克隆抗体的制备和鉴定 | 第43-53页 |
| 3.3 实验结果 | 第53-69页 |
| 3.3.1 基孔肯雅病毒E2蛋白原核表达质粒构建 | 第53-54页 |
| 3.3.2 基孔肯雅病毒E2蛋白原核表达纯化 | 第54-55页 |
| 3.3.3 目的蛋白割胶纯化 | 第55-56页 |
| 3.3.4 ELISA筛选方法的建立 | 第56-57页 |
| 3.3.5 免疫后鼠源多抗效价测定及验证 | 第57-59页 |
| 3.3.6 间接ELISA初筛阳性杂交瘤细胞 | 第59页 |
| 3.3.7 阳性杂交瘤细胞系的IFA检测 | 第59-60页 |
| 3.3.8 阳性杂交瘤细胞系的Westernblot检测 | 第60-61页 |
| 3.3.9 其他性质鉴定 | 第61-62页 |
| 3.3.10 阳性杂交瘤细胞系的表位鉴定 | 第62-64页 |
| 3.3.11 阳性杂交瘤细胞系的中和活性检测 | 第64-65页 |
| 3.3.12 腹水抗体制备、纯化及SDS-PAGE检测 | 第65页 |
| 3.3.13 腹水纯化抗体的IFA检测 | 第65-66页 |
| 3.3.14 腹水纯化抗体的Westernblot检测 | 第66页 |
| 3.3.15 腹水纯化抗体特异性鉴定 | 第66-67页 |
| 3.3.16 腹水纯化抗体中和活性检测 | 第67-68页 |
| 3.3.17 腹水纯化抗体效价检测 | 第68-69页 |
| 3.4 讨论 | 第69-70页 |
| 第4章 总结与展望 | 第70-72页 |
| 4.1 总结 | 第70-71页 |
| 4.2 展望 | 第71-72页 |
| 参考文献 | 第72-80页 |
| 附录A 常用缩写 | 第80-82页 |
| 附录B 常用试剂配方 | 第82-84页 |
| 致谢 | 第84-87页 |
| 作者简历 | 第87-88页 |
