| 摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 第1章 文献综述 | 第11-27页 |
| 1.1 基因编辑技术 | 第11-13页 |
| 1.1.1 基因编辑技术简介 | 第11-12页 |
| 1.1.2 基因编辑技术发展历程 | 第12-13页 |
| 1.2 CRISPR/Cas系统 | 第13-21页 |
| 1.2.1 CRISPR/Cas系统的研究历史 | 第13-14页 |
| 1.2.2 CRISPR/Cas系统的结构 | 第14-15页 |
| 1.2.3 CRISPR/Cas的分类 | 第15-16页 |
| 1.2.4 CRISPR/Cas9系统的工作原理 | 第16-17页 |
| 1.2.5 CRISPR/Cas9基因编辑技术在重要作物中的应用 | 第17-19页 |
| 1.2.6 CRISPR/Cas9基因编辑技术最新研究进展 | 第19-21页 |
| 1.3 茉莉酸信号转导途径 | 第21-25页 |
| 1.3.1 茉莉酸的生物合成 | 第21-22页 |
| 1.3.2 茉莉酸信号转导途径 | 第22-24页 |
| 1.3.3 NtNINJA基因和JAZ蛋白家族 | 第24-25页 |
| 1.4 茉莉酸信号转导途径参与应答低温胁迫 | 第25-27页 |
| 1.4.1 应答低温胁迫的基因 | 第25页 |
| 1.4.2 茉莉酸提高植物寒冷防御能力 | 第25-27页 |
| 第2章 引言 | 第27-29页 |
| 2.1 研究的目的与意义 | 第27页 |
| 2.2 研究内容 | 第27页 |
| 2.3 技术路线 | 第27-29页 |
| 第3章 CRISPR/Cas9编辑烟草NtNINJA基因 | 第29-43页 |
| 3.1 材料与方法 | 第29-31页 |
| 3.1.1 植物材料 | 第29页 |
| 3.1.2 菌株与载体 | 第29页 |
| 3.1.3 主要试剂 | 第29页 |
| 3.1.4 植物组织培养培养基配方 | 第29-30页 |
| 3.1.5 大肠杆菌培养培养基配方 | 第30页 |
| 3.1.6 农杆菌培养培养基配方 | 第30页 |
| 3.1.7 主要试剂溶液 | 第30页 |
| 3.1.8 引物 | 第30-31页 |
| 3.2 表达载体构建 | 第31-36页 |
| 3.2.1 pCACas9骨架载体的获得 | 第31页 |
| 3.2.2 sgRNA质粒的获得 | 第31页 |
| 3.2.3 靶位点设计、选择 | 第31页 |
| 3.2.4 靶位点的sgRNA组装 | 第31-34页 |
| 3.2.5 sgRNA插入pCACas9骨架载体 | 第34-35页 |
| 3.2.6 表达载体转化农杆菌 | 第35-36页 |
| 3.3 烟草的遗传转化 | 第36-37页 |
| 3.3.1 烟草无菌苗的获得 | 第36-37页 |
| 3.4 突变体筛选及检测 | 第37-38页 |
| 3.4.1 CTAB法提取烟草基因组DNA | 第37页 |
| 3.4.2 突变体筛选 | 第37页 |
| 3.4.3 突变类型的测定 | 第37-38页 |
| 3.5 结果与分析 | 第38-41页 |
| 3.5.1 pCACas9-NtNINJA-AB表达载体的构建 | 第38页 |
| 3.5.2 烟草遗传转化 | 第38-39页 |
| 3.5.3 CRISPR/Cas9编辑烟草NtNINJA基因的T0代转基因植株NtNINJA基因突变情况分析 | 第39-41页 |
| 3.6 本章小结 | 第41-43页 |
| 第4章 NtNINJA基因碱基缺失烟草植株的克隆与序列分析 | 第43-57页 |
| 4.1 材料 | 第43页 |
| 4.2 方法 | 第43-48页 |
| 4.2.1 突变型NtNINJA引物设计 | 第43页 |
| 4.2.2 总RNA的提取 | 第43-44页 |
| 4.2.3 逆转录成cDNA | 第44-45页 |
| 4.2.4 PCR扩增 | 第45-46页 |
| 4.2.5 目的基因胶回收 | 第46页 |
| 4.2.6 连接与转化 | 第46-47页 |
| 4.2.7 重组质粒的检测与测序 | 第47-48页 |
| 4.2.8 生物信息学分析 | 第48页 |
| 4.3 结果分析 | 第48-55页 |
| 4.3.1 烟草总RNA的提取检测 | 第48-49页 |
| 4.3.2 突变型NtNINJA的PCR扩增与胶回收 | 第49页 |
| 4.3.3 突变型NtNINJA的菌液PCR检测 | 第49-50页 |
| 4.3.4 突变NtNINJA序列生物信息学分析 | 第50-55页 |
| 4.4 本章小结 | 第55-57页 |
| 第5章 低温条件下NtNINJA基因突变型烟草茉莉酸途径关键基因NtJAZ1的定量表达分析 | 第57-61页 |
| 5.1 材料 | 第57页 |
| 5.2 方法 | 第57-58页 |
| 5.2.1 材料处理 | 第57页 |
| 5.2.2 取样 | 第57页 |
| 5.2.3 总RNA的提取 | 第57页 |
| 5.2.4 逆转录成cDNA | 第57页 |
| 5.2.5 引物设计 | 第57-58页 |
| 5.2.6 定量PCR扩增 | 第58页 |
| 5.3 结果分析 | 第58-60页 |
| 5.3.1 提取RNA的检测 | 第58-59页 |
| 5.3.2 NtJAZ1在不同处理中的表达量分析 | 第59-60页 |
| 5.4 本章小结 | 第60-61页 |
| 第6章 结论与讨论 | 第61-65页 |
| 6.1 结论 | 第61-62页 |
| 6.1.1 SgRNA/Cas9编辑红大NtNINJA基因 | 第61页 |
| 6.1.2 突变NtNINJA基因的克隆及生物信息学分析 | 第61-62页 |
| 6.1.3 低温胁迫NtNINJA基因突变型烟草NtJAZ1的定量表达分析 | 第62页 |
| 6.2 讨论 | 第62-65页 |
| 参考文献 | 第65-73页 |
| 附录 | 第73-75页 |
| 致谢 | 第75页 |
