| 摘要 | 第8-11页 |
| Abstract | 第11-13页 |
| 缩略语表 | 第14-15页 |
| 1 前言 | 第15-22页 |
| 1.1 研究背景 | 第15页 |
| 1.2 研究进展 | 第15-20页 |
| 1.2.1 空肠弯曲杆菌鞭毛调控的研究进展 | 第15-16页 |
| 1.2.2 cj0440c基因的来源 | 第16-17页 |
| 1.2.3 cj0440c基因特点及研究现状 | 第17-18页 |
| 1.2.4 cj0440c基因功能推测 | 第18-20页 |
| 1.3 研究内容和目的意义 | 第20-22页 |
| 2 材料与方法 | 第22-55页 |
| 2.1 菌株 | 第22页 |
| 2.2 抗菌药物以及试剂 | 第22-28页 |
| 2.3 仪器设备 | 第28-29页 |
| 2.4 不同药物处理对cj0440c以及鞭毛基因的影响 | 第29-35页 |
| 2.4.1 菌株的复苏以及培养 | 第29页 |
| 2.4.2 生长曲线的测定 | 第29-30页 |
| 2.4.3 MIC的测定 | 第30页 |
| 2.4.4 MPC的测定 | 第30-31页 |
| 2.4.5 耐药菌株的诱导 | 第31页 |
| 2.4.6 各耐药菌株RNA的提取 | 第31-32页 |
| 2.4.7 RNA浓度以及纯度测定 | 第32页 |
| 2.4.8 cDNA的合成 | 第32-33页 |
| 2.4.9 实时荧光定量检测各基因表达量 | 第33-35页 |
| 2.5 cj0440c的原核表达载体的构建 | 第35-42页 |
| 2.5.1 载体构建方案 | 第35页 |
| 2.5.2 空肠弯曲杆菌基因组的提取 | 第35-37页 |
| 2.5.3 cj0440c基因PCR扩增与纯化 | 第37-38页 |
| 2.5.4 cj0440c的TA克隆 | 第38-41页 |
| 2.5.5 cj0440c原核表达载体的构建 | 第41-42页 |
| 2.6 cj0440c的原核表达以及蛋白纯化 | 第42-47页 |
| 2.6.1 表达菌株的构建 | 第42页 |
| 2.6.2 Cj0440c蛋白的诱导表达 | 第42-43页 |
| 2.6.3 Cj0440c蛋白的纯化 | 第43-44页 |
| 2.6.4 SDS-PAGE以及Western blotting检测Cj0440c蛋白的表达 | 第44-46页 |
| 2.6.5 蛋白浓度的测定 | 第46-47页 |
| 2.7 Cj0440c蛋白与硫胺素之间的相互作用 | 第47-48页 |
| 2.8 构建可以在空肠弯曲杆菌中表达的载体 | 第48-51页 |
| 2.8.1 表达载体pRY112-cme440的构建 | 第49页 |
| 2.8.2 空肠弯曲杆菌感受态的制备 | 第49-50页 |
| 2.8.3 自然转化 | 第50页 |
| 2.8.4 电转 | 第50页 |
| 2.8.5 接合转移 | 第50-51页 |
| 2.9 凝胶阻滞实验(EMSA) | 第51-55页 |
| 2.9.1 目的基因启动子区域的扩增 | 第51-53页 |
| 2.9.2 凝胶阻滞实验(EMSA) | 第53-55页 |
| 3 结果与分析 | 第55-72页 |
| 3.1 弯曲杆菌的生长曲线、MIC、MPC以及MSW测定结果 | 第55-56页 |
| 3.2 细菌总RNA质量检测结果 | 第56-57页 |
| 3.3 cj0440c与各鞭毛相关基因的表达量 | 第57-61页 |
| 3.4 cj0440c的克隆与原核表达载体P-440的确证 | 第61-62页 |
| 3.5 过表达载体pRY112-cme440的确证 | 第62-63页 |
| 3.6 Cj0440c蛋白的表达、纯化与检测结果 | 第63-67页 |
| 3.7 Cj0440c蛋白浓度测定结果 | 第67-68页 |
| 3.8 Cj0440c与硫胺素之间的相互作用情况 | 第68-69页 |
| 3.9 凝胶阻滞试验(EMSA)结果 | 第69-72页 |
| 4 讨论 | 第72-81页 |
| 4.1 不同药物诱导下各基因表达量分析 | 第72-74页 |
| 4.2 cj0440c原核表达以及蛋白纯化 | 第74-76页 |
| 4.3 Cj0440c蛋白与硫胺素之间相互作用 | 第76-78页 |
| 4.4 cj0440c与各鞭毛相关基因之间的关系推测 | 第78-81页 |
| 5 小结 | 第81-82页 |
| 6 文献综述 | 第82-92页 |
| 参考文献 | 第92-106页 |
| 附录 Ⅰ | 第106-115页 |
| 附录 Ⅱ | 第115-116页 |
| 致谢 | 第116页 |
