| 摘要 | 第6-8页 |
| abstract | 第8-9页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-18页 |
| 1.1 东方粘虫研究概述 | 第12页 |
| 1.2 V-ATP酶结构研究进展 | 第12-14页 |
| 1.2.1 V1部分的亚基 | 第13-14页 |
| 1.2.2 V0部分的亚基 | 第14页 |
| 1.3 V-ATP酶生物学功能研究进展 | 第14-16页 |
| 1.4 本研究的目的及意义 | 第16-17页 |
| 1.5 本研究的设计思路 | 第17-18页 |
| 第二章 东方粘虫中肠vatpa cDNA的克隆 | 第18-31页 |
| 2.1 材料与方法 | 第18-24页 |
| 2.1.1 材料 | 第18-19页 |
| 2.1.2 方法 | 第19-24页 |
| 2.2 结果与分析 | 第24-31页 |
| 2.2.1 东方粘虫中肠总RNA的提取和检测 | 第24页 |
| 2.2.2 东方粘虫中肠vatpa中间片段PCR扩增和检测 | 第24-25页 |
| 2.2.3 东方粘虫中肠vatpa 3'RACE扩增与检测 | 第25页 |
| 2.2.4 东方粘虫中肠vatpa 5'RACE扩增与检测 | 第25-26页 |
| 2.2.5 东方粘虫中肠vatpa RACE序列验证 | 第26页 |
| 2.2.6 东方粘虫中肠vatpa cDNA全长拼接及分析 | 第26-27页 |
| 2.2.7 东方粘虫中肠vatpa系统进化树分析和氨基酸序列比对 | 第27-31页 |
| 第三章 东方粘虫V-ATP酶A、B亚基原核表达载体构建 | 第31-39页 |
| 3.1 材料与方法 | 第31-36页 |
| 3.1.1 材料 | 第31-32页 |
| 3.1.2 方法 | 第32-36页 |
| 3.2 结果与分析 | 第36-39页 |
| 3.2.1 PCR扩增东方粘虫vatpa和vatpb及鉴定 | 第36页 |
| 3.2.2 东方粘虫vatpa和vatpb的PCR产物回收 | 第36-37页 |
| 3.2.3 原核表达载体pET-22b(+)质粒的提取与双酶切检测 | 第37页 |
| 3.2.4 原核表达载体pET-22b(+)的回收 | 第37-38页 |
| 3.2.5 原核表达载体pET22b-vatpa及pET22b-vatpb的构建与鉴定 | 第38-39页 |
| 第四章 东方粘虫中肠vatpa和vatpb诱导表达及复性纯化 | 第39-47页 |
| 4.1 材料与方法 | 第39-43页 |
| 4.1.1 材料 | 第39-41页 |
| 4.1.2 方法 | 第41-43页 |
| 4.2 结果与分析 | 第43-47页 |
| 4.2.1 东方粘虫中肠vatpa和vatpb氨基酸序列预测目的蛋白的基本参数 | 第43页 |
| 4.2.2 重组pET22b-vatpa的诱导表达及SDS-PAGE检测分析 | 第43-44页 |
| 4.2.3 重组pET22b-vatpb的诱导表达及SDS-PAGE检测分析 | 第44-45页 |
| 4.2.4 重组pET22b-vatpa及pET22b-vatpb蛋白的复性及检测 | 第45页 |
| 4.2.5 重组pET22b-vatpa及pET22b-vatpb蛋白的Ni柱纯化及检测 | 第45-47页 |
| 第五章 结论 | 第47-48页 |
| 第六章 讨论 | 第48-50页 |
| 参考文献 | 第50-55页 |
| 致谢 | 第55-56页 |
| 作者简介 | 第56页 |
