| 摘要 | 第3-4页 |
| abstract | 第4页 |
| 第一章 文献概述 | 第8-17页 |
| 1.1 植物遗传转化的方法 | 第8-9页 |
| 1.1.1 载体转化系统 | 第8-9页 |
| 1.1.2 直接转化法 | 第9页 |
| 1.1.3 种质转化系统 | 第9页 |
| 1.2 常用的基因组编辑技术 | 第9-13页 |
| 1.2.1 归巢内切酶 | 第10页 |
| 1.2.2 锌指核酸内切酶 | 第10-11页 |
| 1.2.3 转录激活类似效应物内切酶 | 第11-12页 |
| 1.2.4 CRISPR介导的Cas9核酸酶 | 第12-13页 |
| 1.3 自交不亲和 | 第13-14页 |
| 1.4 转录组拼接的生物信息学工具 | 第14页 |
| 1.5 马铃薯遗传转化的研究进展 | 第14-15页 |
| 1.6 本研究的目的及意义 | 第15-17页 |
| 第二章 S-RNase类型的确定 | 第17-23页 |
| 2.1 材料 | 第17-18页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第17页 |
| 2.1.2 主要的试剂和耗材 | 第17页 |
| 2.1.3 主要仪器设备 | 第17-18页 |
| 2.2 实验方法 | 第18页 |
| 2.2.1 对马铃薯柱头转录组进行混池测序以及组装 | 第18页 |
| 2.2.2 对拼接结果进行比对 | 第18页 |
| 2.2.3 设计引物对cDNA进行扩增并比对 | 第18页 |
| 2.3 结果与分析 | 第18-22页 |
| 2.3.1 拼接和比对结果 | 第18-19页 |
| 2.3.2 进化树分析 | 第19-20页 |
| 2.3.3 与蛋白序列比对 | 第20-22页 |
| 2.4 讨论 | 第22-23页 |
| 第三章 S-RNase的CRISPR/cas9敲除载体的构建 | 第23-30页 |
| 3.1 试验材料 | 第23-24页 |
| 3.1.1 菌株 | 第23页 |
| 3.1.2 试剂 | 第23页 |
| 3.1.3 常用试剂配制 | 第23-24页 |
| 3.1.4 骨架载体 | 第24页 |
| 3.2 方法 | 第24-28页 |
| 3.2.1 质粒DNA提取 | 第24-25页 |
| 3.2.2 大肠杆菌感受态细胞制备 | 第25-26页 |
| 3.2.3 大肠杆菌DNA转化 | 第26页 |
| 3.2.4 农杆菌感受态细胞的制备及其转化 | 第26页 |
| 3.2.5 CRISPR敲除载体的构建 | 第26-28页 |
| 3.3 结果与分析 | 第28-30页 |
| 第四章 对不同二倍体马铃薯材料进行遗传转化 | 第30-43页 |
| 4.1 试验材料 | 第30-32页 |
| 4.1.1 实验材料与培养温度 | 第30-31页 |
| 4.1.2 菌株 | 第31页 |
| 4.1.3 常用试剂配置 | 第31页 |
| 4.1.4 常用培养基 | 第31-32页 |
| 4.2 实验方法 | 第32-34页 |
| 4.2.1 菌液的制备 | 第32页 |
| 4.2.2 预培养 | 第32页 |
| 4.2.3 菌液侵染与共培养 | 第32页 |
| 4.2.4 外植体愈伤诱导培养基的筛选 | 第32-33页 |
| 4.2.5 诱导愈伤和分化的抗生素筛选试验 | 第33页 |
| 4.2.6 生根培养时抗生素浓度的筛选 | 第33页 |
| 4.2.7 筛选适宜遗传转化的基因型 | 第33页 |
| 4.2.8 生根培养 | 第33页 |
| 4.2.9 转基因植株的PCR检测 | 第33-34页 |
| 4.2.10 转基因植株的倍性检测 | 第34页 |
| 4.2.11 转基因植株后代自交以及花粉管延伸鉴定 | 第34页 |
| 4.3 结果与分析 | 第34-42页 |
| 4.3.1 预培养时间的确定 | 第34-35页 |
| 4.3.2 不同激素配比对诱导愈伤组织和再生的影响 | 第35-36页 |
| 4.3.3 不同抗生素浓度对再生和生根的影响 | 第36页 |
| 4.3.4 其它二倍体马铃薯材料的遗传转化体系的筛选 | 第36-37页 |
| 4.3.5 转基因阳性植株的鉴定 | 第37-39页 |
| 4.3.6 转基因阳性植株的倍性鉴定 | 第39-40页 |
| 4.3.7 转基因植株自交鉴定 | 第40-42页 |
| 4.4 讨论 | 第42-43页 |
| 第五章 总结 | 第43-44页 |
| 参考文献 | 第44-51页 |
| 附录 | 第51-54页 |
| 攻读学位期间的学术论文和研究成 | 第54-55页 |
| 致谢 | 第55页 |
