| 摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 缩略词表 | 第12-15页 |
| 第1章 文献综述 | 第15-36页 |
| 1.1 猪链球菌病 | 第15-17页 |
| 1.2 毒力相关因子 | 第17-23页 |
| 1.2.1 荚膜(CPS) | 第17-18页 |
| 1.2.2 生物被膜 | 第18-19页 |
| 1.2.3 细胞壁 | 第19页 |
| 1.2.4 溶血素蛋白(Sly) | 第19-20页 |
| 1.2.5 溶菌酶释放蛋白(MRP) | 第20-21页 |
| 1.2.6 H因子结合蛋白 | 第21页 |
| 1.2.7 IgA1水解酶 | 第21-22页 |
| 1.2.8 89K毒力岛 | 第22-23页 |
| 1.3 转录因子 | 第23-28页 |
| 1.3.1 过氧化物氧化阻遏蛋白(PerR) | 第23-24页 |
| 1.3.2 微生物分解代谢物控制蛋白(CcpA) | 第24页 |
| 1.3.3 Rgg | 第24-25页 |
| 1.3.4 LuxS/AI-2型密度感应系统 | 第25-26页 |
| 1.3.5 SalK/SalR双元调控系统 | 第26页 |
| 1.3.6 RevS | 第26-27页 |
| 1.3.7 其他双元调控系统 | 第27页 |
| 1.3.8 Small RNAs(sRNAs)调控 | 第27-28页 |
| 1.4 猪链球菌致病机理 | 第28-36页 |
| 1.4.1 猪链球菌与宿主粘膜的互作 | 第28-32页 |
| 1.4.2 猪链球菌在宿主血液循环中的存活与扩散 | 第32页 |
| 1.4.3 猪链球菌致败血性休克机制 | 第32-34页 |
| 1.4.4 猪链球菌致脑膜炎机制 | 第34-35页 |
| 1.4.5 本研究的内容与目标 | 第35-36页 |
| 第2章 | 第36-98页 |
| 2.1 前言 | 第36-37页 |
| 2.2 材料 | 第37-42页 |
| 2.2.1 菌种和质粒 | 第37页 |
| 2.2.2 主要试剂 | 第37-38页 |
| 2.2.3 培养基和抗生素 | 第38-40页 |
| 2.2.4 主要缓冲液 | 第40-41页 |
| 2.2.5 蛋白表达和纯化相关试剂 | 第41页 |
| 2.2.6 SDS-PAGE聚丙烯酰胺凝胶电泳和Western Blotting相关试剂 | 第41-42页 |
| 2.2.7 主要仪器设备 | 第42页 |
| 2.2.8 试验动物及细胞 | 第42页 |
| 2.3 试验方法 | 第42-54页 |
| 2.3.1 菌株的培养条件及菌株的构建 | 第42-44页 |
| 2.3.2 RNA提取及荧光定量检测 | 第44-45页 |
| 2.3.3 生长曲线的测定 | 第45-46页 |
| 2.3.4 小鼠腹腔巨噬细胞检测各菌株促炎能力 | 第46页 |
| 2.3.5 人工感染小鼠 | 第46-47页 |
| 2.3.6 ELISA试剂盒检测血浆中细胞因子浓度 | 第47页 |
| 2.3.7 基因芯片杂交及分析 | 第47-48页 |
| 2.3.8 重组表达载体构建 | 第48-49页 |
| 2.3.9 蛋白表达与纯化 | 第49-51页 |
| 2.3.10 蛋白质的定量 | 第51-52页 |
| 2.3.11 凝胶阻滞实验(EMSA)分析转录因子与DNA的结合活性 | 第52-53页 |
| 2.3.12 全血杀菌实验 | 第53页 |
| 2.3.13 小鼠外周血中性粒细胞杀菌试验 | 第53-54页 |
| 2.3.14 主要分子生物学软件和数据库 | 第54页 |
| 2.3.15 统计学分析 | 第54页 |
| 2.4 结果与分析 | 第54-90页 |
| 2.4.1 体内诱导筛选89K毒力岛中差异表达转录因子 | 第54-55页 |
| 2.4.2 各转录因子基因缺失突变株的构建与鉴定 | 第55-56页 |
| 2.4.3 突变株生长特性的研究 | 第56-57页 |
| 2.4.4 各突变株致病性的研究 | 第57-58页 |
| 2.4.5 SSU05_0930在革兰氏阳性菌中高度保守 | 第58-59页 |
| 2.4.6 回复菌株与P1/7过表达菌株的构建 | 第59-61页 |
| 2.4.7 含tstS的菌株能刺激巨噬细胞分泌更多的细胞因子 | 第61-62页 |
| 2.4.8 tstS对猪链球菌致病力的影响 | 第62-63页 |
| 2.4.9 tstS能促进菌血症的发生 | 第63-66页 |
| 2.4.10 tstS能增强猪链球菌促炎能力 | 第66-67页 |
| 2.4.11 △tstS差异表达基因的筛选及聚类分析 | 第67-69页 |
| 2.4.12 芯片结果GO分析 | 第69-81页 |
| 2.4.13 TstS能特异性调控Fhb、Fhbp以及SsPep | 第81页 |
| 2.4.14 TstS促进猪链球菌2型抵御宿主先天免疫应答机制 | 第81-83页 |
| 2.4.15 TstS刺激条件的探索 | 第83-84页 |
| 2.4.16 葡萄糖浓度对缺失突变株致病的影响 | 第84-85页 |
| 2.4.17 TstS受CcpA调控 | 第85-86页 |
| 2.4.18 Fhbp启动子区改造 | 第86-88页 |
| 2.4.19 Fhbp启动子区改造对细菌表达谱的影响 | 第88页 |
| 2.4.20 体外实验评价Fhbp启动子区改造对菌株的影响 | 第88-89页 |
| 2.4.21 0197MC致病力的评价 | 第89-90页 |
| 2.5 讨论 | 第90-96页 |
| 2.5.1 宿主体内上调表达基因与致病的相关性 | 第90-92页 |
| 2.5.2 炎性因子种类的选择 | 第92-93页 |
| 2.5.3 小鼠实验攻毒剂量的选择 | 第93-94页 |
| 2.5.4 TstS协助SS2致宿主STSLS | 第94-95页 |
| 2.5.5 TstS促进STSLS的途径 | 第95页 |
| 2.5.6 TstS,Fhbp,CcpA三者存在反馈调节 | 第95-96页 |
| 2.6 结论 | 第96-98页 |
| 参考文献 | 第98-119页 |
| 附录 | 第119-124页 |
| 个人简历 | 第124-125页 |
| 致谢 | 第125-126页 |
