| 致谢 | 第6-8页 |
| 摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 1 文献综述及研究目的 | 第16-41页 |
| 1.1 烟粉虱 | 第16-17页 |
| 1.2 双生病毒 | 第17-22页 |
| 1.2.1 双生病毒的基因组结构 | 第18-19页 |
| 1.2.2 菜豆金黄花叶病毒属(Begomovirus) | 第19-21页 |
| 1.2.3 Begomovirus的危害 | 第21-22页 |
| 1.3 烟粉虱传播双生病毒过程 | 第22-27页 |
| 1.3.1 媒介昆虫传播植物病毒的机制 | 第22-23页 |
| 1.3.2 烟粉虱传播双生病毒的机制 | 第23-24页 |
| 1.3.3 烟粉虱中肠对双生病毒传播的影响 | 第24-26页 |
| 1.3.4 烟粉虱血淋巴对双生病毒传播的影响 | 第26-27页 |
| 1.3.5 烟粉虱唾液腺对双生病毒传播的影响 | 第27页 |
| 1.4 内体以及其他囊泡运输系统 | 第27-31页 |
| 1.4.1 细胞内体简介 | 第28页 |
| 1.4.2 早期内体 | 第28-29页 |
| 1.4.3 晚期内体 | 第29-30页 |
| 1.4.4 溶酶体 | 第30页 |
| 1.4.5 内体的酸化 | 第30-31页 |
| 1.4.6 内体在烟粉虱-双生病毒中的研究现状 | 第31页 |
| 1.5 泛素化通路 | 第31-37页 |
| 1.5.1 泛素以及泛素化概述 | 第31页 |
| 1.5.2 泛素化过程以及所需要的蛋白 | 第31-32页 |
| 1.5.3 泛素化的方式 | 第32-33页 |
| 1.5.4 泛素化修饰的作用 | 第33-35页 |
| 1.5.5 泛素化在病毒与细胞互作中的研究 | 第35-37页 |
| 1.6 具有血淋巴毒性的抗虫蛋白 | 第37-39页 |
| 1.6.1 影响蛋白毒性的因素 | 第37-38页 |
| 1.6.2 将毒蛋白运送至血淋巴的方法 | 第38-39页 |
| 1.7 本研究的目的及意义 | 第39-41页 |
| 1.7.1 研究目的 | 第40页 |
| 1.7.2 主要内容 | 第40-41页 |
| 2 基本材料与方法 | 第41-59页 |
| 2.1 供试材料 | 第41-42页 |
| 2.1.1 供试昆虫 | 第41页 |
| 2.1.2 供试植物 | 第41页 |
| 2.1.3 供试病毒 | 第41-42页 |
| 2.2 主要仪器和试剂 | 第42-44页 |
| 2.2.1 烟粉虱饲养及生态实验 | 第42页 |
| 2.2.2 成像仪器 | 第42页 |
| 2.2.3 分子生物学相关仪器 | 第42-43页 |
| 2.2.4 分子生物学以及其他试剂 | 第43-44页 |
| 2.3 常用实验技术 | 第44-59页 |
| 2.3.1 DNA提取方法 | 第44-45页 |
| 2.3.2 RNA提取方法以及反转录 | 第45-48页 |
| 2.3.3 分子亚克隆 | 第48-53页 |
| 2.3.4 双链RNA合成 | 第53-54页 |
| 2.3.5 蛋白质原核表达及蛋白纯化 | 第54-56页 |
| 2.3.6 蛋白质电泳与western blot | 第56-57页 |
| 2.3.7 定量PCR | 第57-58页 |
| 2.3.8 烟粉虱在植物上的适合度检测 | 第58-59页 |
| 3 双生病毒在烟粉虱中肠上皮细胞中的运输过程 | 第59-91页 |
| 3.1 材料与方法 | 第60-67页 |
| 3.1.1 供试材料 | 第60页 |
| 3.1.2 化学抑制剂饲喂 | 第60-61页 |
| 3.1.3 双链RNA合成 | 第61页 |
| 3.1.4 显微注射dsRNA诱导RNA沉默 | 第61页 |
| 3.1.5 沉默效率检测 | 第61页 |
| 3.1.6 烟粉虱获毒能力检测 | 第61页 |
| 3.1.7 烟粉虱蜜露中的糖分检测 | 第61-62页 |
| 3.1.8 烟粉虱传毒能力检测 | 第62页 |
| 3.1.9 免疫荧光 | 第62-63页 |
| 3.1.10 共聚焦显微镜拍摄 | 第63页 |
| 3.1.11 STORM显微拍摄 | 第63-64页 |
| 3.1.12 凝集素亲和捕捉及质谱测序 | 第64-67页 |
| 3.2 结果与分析 | 第67-87页 |
| 3.2.1 沉默囊泡运输相关基因抑制烟粉虱获取TYLCV | 第67-68页 |
| 3.2.2 Brefeldin A抑制烟粉虱获取TYLCV | 第68-69页 |
| 3.2.3 TYLCV在烟粉虱中肠中的亚细胞定位 | 第69-73页 |
| 3.2.4 高尔基体不参与TYLCV细胞内运输 | 第73-76页 |
| 3.2.5 TYLCV可能位于内体或溶酶体中 | 第76-77页 |
| 3.2.6 早期内体在TYLCV运输过程中起重要作用 | 第77-80页 |
| 3.2.7 对病毒及囊泡结构的超高分辨成像 | 第80-82页 |
| 3.2.8 Snx蛋白家族对烟粉虱获取病毒的影响 | 第82-85页 |
| 3.2.9 早期内体对其他双生病毒的传播同样起重要作用 | 第85-87页 |
| 3.3 讨论 | 第87-91页 |
| 4 泛素-蛋白酶体通路对烟粉虱传毒的影响 | 第91-103页 |
| 4.1 材料与方法 | 第92-95页 |
| 4.1.1 供试材料 | 第92页 |
| 4.1.2 蛋白浓度测定 | 第92-93页 |
| 4.1.3 双生病毒对烟粉虱体内泛素化的影响 | 第93页 |
| 4.1.4 抑制剂饲喂对烟粉虱获取病毒的影响 | 第93-94页 |
| 4.1.5 蛋白酶体对烟粉虱获取病毒的影响 | 第94页 |
| 4.1.6 通过western bolt及免疫荧光检测CP及泛素蛋白 | 第94-95页 |
| 4.2 结果 | 第95-101页 |
| 4.2.1 双生病毒不影响烟粉虱体内泛素化以及蛋白酶体降解的整体活性 | 第95-97页 |
| 4.2.2 抑制蛋白酶体活性导致烟粉虱体内病毒含量升高 | 第97-99页 |
| 4.2.3 泛素-蛋白酶体系统可能不直接参与TYLCV的降解 | 第99-101页 |
| 4.3 讨论 | 第101-103页 |
| 5 利用病毒外壳与毒肽融合蛋白开发杀虫毒蛋白 | 第103-114页 |
| 5.1 材料与方法 | 第104-107页 |
| 5.1.1 供试材料 | 第104页 |
| 5.1.2 蛋白原核表达 | 第104-105页 |
| 5.1.3 蛋白浓度测定 | 第105页 |
| 5.1.4 显微注射毒蛋白 | 第105-106页 |
| 5.1.5 蛋白膜饲喂毒蛋白 | 第106页 |
| 5.1.6 转基因番茄的获得及对烟粉虱的影响 | 第106-107页 |
| 5.2 结果 | 第107-112页 |
| 5.2.1 蛋白表达及浓度测定 | 第107页 |
| 5.2.2 注射GST-Hv1a蛋白对烟粉虱的影响 | 第107-109页 |
| 5.2.3 GST-CP-Hv1a的经口毒性 | 第109-110页 |
| 5.2.4 CP-Hv1a转基因番茄对烟粉虱的影响 | 第110-112页 |
| 5.3 讨论 | 第112-114页 |
| 6 总讨论 | 第114-117页 |
| 6.1 全文总结 | 第114-116页 |
| 6.2 本研究的特色和创新之处 | 第116页 |
| 6.3 不足之处以及值得继续研究的问题 | 第116-117页 |
| 参考文献 | 第117-132页 |
| 附录Ⅰ烟粉虱适应烟草过程的转录组分析 | 第132-147页 |
| 1 材料与方法 | 第133-135页 |
| 1.1 供试材料 | 第133页 |
| 1.2 烟粉虱对烟草植物的长期适应 | 第133页 |
| 1.3 测序样品准备 | 第133页 |
| 1.4 基因表达分析 | 第133-134页 |
| 1.5 定量验证 | 第134页 |
| 1.6 GO富集分析 | 第134页 |
| 1.7 烟粉虱飞行肌的图像分析 | 第134-135页 |
| 1.8 烟草腺毛对烟粉虱的影响 | 第135页 |
| 1.9 统计分析方法 | 第135页 |
| 2 结果 | 第135-143页 |
| 2.1 烟粉虱可以逐渐适应烟草寄主 | 第135-136页 |
| 2.2 烟粉虱转录组测序及分析 | 第136-137页 |
| 2.3 基因表达量分析 | 第137-138页 |
| 2.4 GO富集分析 | 第138-140页 |
| 2.5 烟粉虱体型以及飞行肌分析 | 第140-142页 |
| 2.6 烟草腺毛对烟粉虱的影响 | 第142-143页 |
| 2.7 烟粉虱内共生菌基因表达量变化 | 第143页 |
| 3 讨论 | 第143-145页 |
| 附录参考文献 | 第145-147页 |
| 附录Ⅱ 本文所用病毒缩写及中英文对照 | 第147-148页 |
| 附录Ⅲ 常用缓冲液及培养基配方 | 第148-149页 |
