| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 1 绪论 | 第9-16页 |
| 2 绵羊Nanog启动子真核表达载体的构建 | 第16-34页 |
| 2.1 实验材料 | 第16-20页 |
| 2.1.1 实验动物、细胞及菌株 | 第16页 |
| 2.1.2 实验所用载体信息 | 第16-17页 |
| 2.1.3 主要试剂和药品 | 第17-18页 |
| 2.1.4 常用试剂的配制 | 第18-20页 |
| 2.1.5 实验仪器设备 | 第20页 |
| 2.2 实验方法 | 第20-27页 |
| 2.2.1 绵羊Nanog基因的启动子克隆及序列分析 | 第20-24页 |
| 2.2.2 绵羊Nanog基因启动子真核表达载体的构建 | 第24-25页 |
| 2.2.3 绵羊Nanog启动子真核表达载体的鉴定 | 第25页 |
| 2.2.4 绵羊Nanog-GFP真核表达载体表达活性检测 | 第25-27页 |
| 2.3 实验结果 | 第27-32页 |
| 2.3.1 绵羊Nanog启动子的扩增 | 第27-28页 |
| 2.3.2 绵羊Nanog启动子克隆载体的鉴定 | 第28页 |
| 2.3.3 绵羊Nanog启动子的序列分析 | 第28-29页 |
| 2.3.4 绵羊Nanog启动了真核表达载体的鉴定 | 第29页 |
| 2.3.5 绵羊Nanog启动子高度分化细胞中表达活性的检测 | 第29-31页 |
| 2.3.6 绵羊Nanog启动子在胚胎干细胞中的表达活性检测 | 第31页 |
| 2.3.7 绵羊Nanog启动子在小鼠早期胚胎中的表达活性检测 | 第31-32页 |
| 2.4 讨论 | 第32-33页 |
| 2.5 本章小结 | 第33-34页 |
| 3 转SNanog-GFP绵羊成纤维细胞系的构建 | 第34-44页 |
| 3.1 实验材料 | 第34-36页 |
| 3.1.1 实验细胞 | 第34页 |
| 3.1.2 实验试剂及设备 | 第34-36页 |
| 3.2 实验方法 | 第36-39页 |
| 3.2.1 绵羊胚胎成纤维细胞的培养 | 第36-37页 |
| 3.2.2 G418筛选的预实验 | 第37页 |
| 3.2.3 绵羊胚胎成纤维细胞的转染 | 第37页 |
| 3.2.4 转基因绵羊胚胎成纤维细胞系的筛选 | 第37-38页 |
| 3.2.5 转绵羊胚胎成纤维细胞系的鉴定 | 第38-39页 |
| 3.3 实验结果 | 第39-41页 |
| 3.3.1 G418最佳筛选浓度的确定 | 第39页 |
| 3.3.2 转基因细胞系的细胞生物学特征 | 第39-41页 |
| 3.3.3 转基因细胞系的PCR鉴定 | 第41页 |
| 3.4 讨论 | 第41-42页 |
| 3.5 本章小结 | 第42-44页 |
| 4 结论 | 第44-45页 |
| 参考文献 | 第45-50页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第50-51页 |
| 致谢 | 第51-52页 |
