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拟南芥WRKY转录因子在非生物胁迫响应中的功能研究

致谢第7-8页
摘要第8-11页
Abstract第11-14页
缩略语表第15-23页
第1章 文献综述第23-39页
    1.1 植物转录因子概述第23-24页
    1.2 WRKY转录因子第24-33页
        1.2.1 WRKY转录因子的结构、分类及结合位点第24-27页
        1.2.2 WRKY家族的起源与进化第27页
        1.2.3 WRKY基因的生物学功能第27-33页
    1.3 ROS第33-37页
        1.3.1 ROS的产生第33页
        1.3.2 ROS的毒害作用第33-34页
        1.3.3 ROS的清除机制第34-35页
        1.3.4 ROS的生物学功能第35-37页
    1.4 问题的提出、拟解决的问题以及技术路线第37-39页
        1.4.1 问题的提出和拟解决的问题第37-38页
        1.4.2 技术路线第38-39页
第2章 WRKY基因响应ROS或氧化胁迫第39-46页
    2.1 材料和方法第39-41页
        2.1.1 植物材料第39页
        2.1.2 植物培养及处理条件第39页
        2.1.3 基因表达分析第39-41页
    2.2 结果第41-45页
        2.2.1 WRKY基因响应过氧化氢第41-42页
        2.2.2 WRKY基因响应重金属镉第42-45页
        2.2.3 WRKY基因的时间表达分析第45页
    2.3 讨论第45-46页
第3章 WRKY46调控拟南芥渗透胁迫响应以及光依赖的气孔运动第46-85页
    3.1 前言第46-48页
        3.1.1 干旱和盐胁迫引发的信号转导第46-47页
        3.1.2 水分胁迫下的转录调控第47-48页
        3.1.3 光诱导的气孔运动第48页
    3.2 问题的提出、拟解决的问题以及技术路线第48-50页
        3.2.1 问题的提出和拟解决的问题第48-49页
        3.2.2 技术路线第49-50页
    3.3 材料和方法第50-60页
        3.3.1 植物材料第50页
        3.3.2 植物培养条件第50页
        3.3.3 载体构建第50-52页
        3.3.4 拟南芥转基因实验第52-53页
        3.3.5 T-DNA插入突变体纯合株系的PCR鉴定第53页
        3.3.6 处理条件第53-54页
        3.3.7 叶片失水率测定第54页
        3.3.8 ABA含量测定第54页
        3.3.9 气孔运动生理实验第54-55页
        3.3.10 ROS检测第55页
        3.3.11 MDA含量测定第55页
        3.3.12 GUS染色及活性测定第55-56页
        3.3.13 保卫细胞和叶肉细胞原生质体分离第56页
        3.3.14 保卫细胞中淀粉和苹果酸含量的测定第56-57页
        3.3.15 基因表达分析第57页
        3.3.16 蛋白提取和Western blot测定第57-58页
        3.3.17 染色质免疫共沉淀第58-60页
    3.4 结果第60-80页
        3.4.1 WRKY46响应干旱和盐胁迫的诱导第60-62页
        3.4.2 WRKY46功能缺失突变体对干旱和盐胁迫表现敏感第62-65页
        3.4.3 WRKY46过表达株系的表型分析第65页
        3.4.4 过表达WRKY46影响ABA诱导的气孔关闭过程第65-69页
        3.4.5 WRKY46在保卫细胞中表达第69-71页
        3.4.6 WRKY46参与调控光诱导的气孔打开过程第71页
        3.4.7 WRKY46调控细胞渗透保护和氧化还原内稳态基因的表达第71-77页
        3.4.8 WRKY46调控保卫细胞的淀粉代谢第77-80页
    3.5 讨论第80-85页
        3.5.1 WRKY46作为早期因子响应干旱、盐以及氧化胁迫第80页
        3.5.2 WRKY46参与生物胁迫和非生物胁迫反应第80-83页
        3.5.3 WRKY46参与气孔的打开过程第83-85页
第4章 WRKY46调控盐和渗透胁迫下拟南芥的侧根发育第85-109页
    4.1 前言第85-87页
    4.2 问题的提出、拟解决的问题及技术路线第87-89页
        4.2.1 问题的提出和拟解决的问题第87-88页
        4.2.2 技术路线第88-89页
    4.3 材料和方法第89-92页
        4.3.1 实验材料第89页
        4.3.2 植物培养条件(同3.3.2)第89页
        4.3.3 处理条件第89-90页
        4.3.4 T-DNA插入突变体纯合株系的PCR鉴定(同3.3.5)第90页
        4.3.5 GUS染色(同3.3.12)第90页
        4.3.6 IAA含量检测第90页
        4.3.7 基因表达分析第90页
        4.3.8 染色质免疫共沉淀(同3.3.17)第90-92页
    4.4 结果第92-105页
        4.4.1 WRKY46在侧根中表达第92-93页
        4.4.2 WRKY46的功能缺失抑制侧根在盐和渗透胁迫下的发育第93-96页
        4.4.3 生长素回复wrky46突变体在盐或渗透胁迫下侧根的生长第96页
        4.4.4 过表达WRKY46促进盐或渗透胁迫下侧根的发育第96页
        4.4.5 生长素、ABA、盐和渗透胁迫调控WRKY46的表达第96-100页
        4.4.6 WRKY46影响盐或渗透胁迫下根中的生长素水平第100-101页
        4.4.7 WRKY46调控盐或渗透胁迫下ABI4和生长素桥连基因的表达第101-103页
        4.4.8 WRKY46与ABI4和生长素桥连基因启动子体内结合第103-105页
    4.5 讨论第105-109页
第5章 WRKY46调控铝诱导的苹果酸分泌第109-134页
    5.1 前言第109-111页
        5.1.1 植物的铝毒害机制第109-110页
        5.1.2 植物的耐铝机制第110-111页
    5.2 问题的提出、拟解决的问题及技术路线第111-113页
        5.2.1 问题的提出和拟解决的问题第111-112页
        5.2.2 技术路线第112-113页
    5.3 材料和方法第113-117页
        5.3.1 植物材料第113页
        5.3.2 植物培养条件(同3.3.2)第113页
        5.3.3 铝处理条件第113页
        5.3.4 GUS染色和活性测定(同3.3.12)第113页
        5.3.5 根系铝含量测定第113-114页
        5.3.6 根系有机酸分泌的测定第114页
        5.3.7 烟草叶片中的瞬时表达第114-115页
        5.3.8 酵母单杂实验第115页
        5.3.9 基因表达分析第115页
        5.3.10 染色质免疫共沉淀第115-117页
    5.4 结果第117-130页
        5.4.1 WRKY46响应铝第117-120页
        5.4.2 WRKY46的功能缺失提高拟南芥的铝耐性第120页
        5.4.3 WRKY46调控ALMT1的表达以及苹果酸的分泌第120-126页
        5.4.4 WRKY46通过直接结合ALMT1的启动子调控其表达第126-130页
    5.5 讨论第130-134页
第6章 WRKY41调控拟南芥的种子休眠第134-180页
    6.1 前言第134-136页
    6.2 问题的提出、拟解决的问题及技术路线第136-138页
        6.2.1 问题的提出和拟解决的问题第136-137页
        6.2.2 技术路线第137-138页
    6.3 材料和方法第138-144页
        6.3.1 实验材料第138页
        6.3.2 植物培养条件(同3.3.2)第138页
        6.3.3 载体构建第138-139页
        6.3.4 拟南芥转基因实验(同3.3.4)第139页
        6.3.5 T-DNA插入突变体纯合株系的PCR鉴定(同3.3.5)第139页
        6.3.6 发芽与根伸长实验第139页
        6.3.7 干旱处理和失水率测定第139-140页
        6.3.8 种子ABA含量的测定第140页
        6.3.9 GUS染色(同3.3.12)第140页
        6.3.10 基因表达分析第140页
        6.3.11 蛋白提取和Western blot测定第140页
        6.3.12 烟草叶片瞬时表达实验第140-141页
        6.3.13 重组蛋白的纯化和凝胶阻滞实验(EMSA)第141页
        6.3.14 染色质免疫共沉淀第141-144页
    6.4 结果第144-170页
        6.4.1 WRKY41的功能缺失导致种子的初生休眠降低第144-147页
        6.4.2 WRKY41主要在种子中表达第147页
        6.4.3 wrky41突变体的种子萌发和幼苗生长对ABA不敏感第147-151页
        6.4.4 WRKY41正调控ABA信号途径和种子成熟相关基因的表达第151-153页
        6.4.5 WRKY41的功能缺失降低种子的热抑制休眠第153-155页
        6.4.6 WRKY41的功能缺失影响荚果中种子成熟相关基因的表达第155页
        6.4.7 WRKY41在种子成熟及萌发阶段调控ABI3的表达第155-158页
        6.4.8 WRKY41不在ABA下游调控ABI3的表达第158-162页
        6.4.9 WRKY41对ABI3的调控不依赖于ABA的合成代谢、ABA信号途径以及其它调控ABI3转录表达的因子第162-165页
        6.4.10 WRKY41体外结合ABI3启动子第165页
        6.4.11 WRKY41在烟草叶片中转录激活ABI3启动子第165-167页
        6.4.12 WRKY41与ABI3启动子体内结合第167-168页
        6.4.13 高浓度的ABA反馈调控WRKY41的表达第168-170页
    6.5 讨论第170-180页
        6.5.1 WRKY41转录激活ABI3的表达并调控种子的休眠第171-173页
        6.5.2 WRKY41与ABA信号途径第173-174页
        6.5.3 WRKY转录因子在种子发育和萌发过程中的作用第174-180页
第7章 全文总结第180-183页
    7.1 主要研究结论第180-181页
    7.2 创新点第181页
    7.3 研究展望第181-183页
参考文献第183-220页
个人简历第220-221页
博士期间发表的论文第221页

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