| 摘要 | 第4-7页 |
| ABSTRACT | 第7-11页 |
| 缩写表 | 第16-17页 |
| 第一章 文献综述 | 第17-34页 |
| 1.1 杧果生产概述 | 第17-19页 |
| 1.1.1 杧果分布与生产状况 | 第17页 |
| 1.1.2 影响杧果生产的非生物胁迫因素 | 第17-19页 |
| 1.2 G蛋白—信号转导途径 | 第19页 |
| 1.3 小G蛋白的结构与调控机理 | 第19-21页 |
| 1.4 Rab蛋白研究综述 | 第21-26页 |
| 1.4.1 Rab蛋白的发现 | 第21页 |
| 1.4.2 Rab蛋白结构特征 | 第21-22页 |
| 1.4.3 Rab蛋白的循环机制 | 第22-23页 |
| 1.4.4 Rab蛋白的生理功能 | 第23-24页 |
| 1.4.5 Rab5亚类蛋白研究进展 | 第24-25页 |
| 1.4.6 Rab11亚类蛋白研究进展 | 第25-26页 |
| 1.5 其它小G蛋白及功能 | 第26-31页 |
| 1.5.1 Rop蛋白研究概述 | 第26-29页 |
| 1.5.2 Arf蛋白研究进展 | 第29-30页 |
| 1.5.3 Ran蛋白研究进展 | 第30-31页 |
| 1.5.4 Ras蛋白概述 | 第31页 |
| 1.6 Rab-GDI蛋白研究进展 | 第31-32页 |
| 1.7 研究目的与意义 | 第32-33页 |
| 1.8 研究的主要内容 | 第33页 |
| 1.9 技术路线 | 第33-34页 |
| 第二章 杜果MiRab11基因的克隆与表达分析 | 第34-46页 |
| 2.1 材料与方法 | 第34-37页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第34页 |
| 2.1.2 菌株与试剂 | 第34页 |
| 2.1.3 材料处理方法 | 第34-35页 |
| 2.1.4 杜果总RNA的提取与检测 | 第35页 |
| 2.1.5 第一链cDNA合成 | 第35-36页 |
| 2.1.6 MiRab11基因的克隆 | 第36页 |
| 2.1.7 实时定量PCR | 第36-37页 |
| 2.1.8 生物信息学分析 | 第37页 |
| 2.2 结果与分析 | 第37-43页 |
| 2.2.1 总RNA提取与第一链cDNA合成 | 第37-38页 |
| 2.2.2 MiRab11基因克隆及测序 | 第38-39页 |
| 2.2.3 MiRab11蛋白的理化分析 | 第39页 |
| 2.2.4 MiRab11同源性比较 | 第39-40页 |
| 2.2.5 MiRab11系统进化分析 | 第40页 |
| 2.2.6 MiRab11基因在不同组织中的表达 | 第40-41页 |
| 2.2.7 MiRab11基因在逆境条件下的表达 | 第41-42页 |
| 2.2.8 MiRab11基因在信号刺激物质下的表达 | 第42-43页 |
| 2.3 讨论 | 第43-44页 |
| 2.4 小结 | 第44-46页 |
| 第三章 MiRab11及突变体蛋白的原核表达与功能分析 | 第46-57页 |
| 3.1 材料与方法 | 第46-49页 |
| 3.1.1 菌株与载体 | 第46页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第46页 |
| 3.1.3 MiRab11基因ORF的克隆 | 第46页 |
| 3.1.4 PCR产物的回收纯化 | 第46-47页 |
| 3.1.5 连接体系与转化 | 第47页 |
| 3.1.6 菌液PCR鉴定 | 第47-48页 |
| 3.1.7 MiRab11及其突变体的扩增 | 第48页 |
| 3.1.8 重组表达载体的构建 | 第48页 |
| 3.1.9 重组蛋白的诱导表达 | 第48-49页 |
| 3.1.10 重组蛋白的纯化与Western Blot | 第49页 |
| 3.1.11 转化子对低温、高温及高盐的抗性 | 第49页 |
| 3.2 结果与分析 | 第49-55页 |
| 3.2.1 MiRab11基因及突变体片段的扩增 | 第49-50页 |
| 3.2.2 MiRab11及突变体原核表达载体的构建 | 第50-51页 |
| 3.2.3 原核表达载体的表达 | 第51-52页 |
| 3.2.4 重组蛋白纯化与蛋白印迹分析 | 第52-53页 |
| 3.2.5 重组转化子对低温、高温和高盐的耐受性 | 第53-55页 |
| 3.3 讨论 | 第55-56页 |
| 3.4 小结 | 第56-57页 |
| 第四章 杜果MiRab5基因的克隆与表达分析 | 第57-72页 |
| 4.1 材料与方法 | 第57-61页 |
| 4.1.1 植物材料 | 第57页 |
| 4.1.2 菌株与试剂 | 第57页 |
| 4.1.3 杧果总RNA的提取与cDNA第一链的合成 | 第57-58页 |
| 4.1.4 MiRab5基因的克隆 | 第58页 |
| 4.1.5 MiRab5及其突变体的扩增 | 第58页 |
| 4.1.6 重组表达载体的构建 | 第58-59页 |
| 4.1.7 目的基因的原核表达 | 第59页 |
| 4.1.8 重组蛋白的纯化与Western Blot检测 | 第59页 |
| 4.1.9 转化子对低温、高温及高盐的抗性 | 第59页 |
| 4.1.10 实时定量PCR | 第59-60页 |
| 4.1.11 生物信息学分析 | 第60-61页 |
| 4.2 结果与分析 | 第61-69页 |
| 4.2.1 MiRab5基因的克隆及序列分析 | 第61页 |
| 4.2.2 MiRab5基因ORF及结构域突变片段的扩增 | 第61-62页 |
| 4.2.3 生物信息学分析 | 第62-63页 |
| 4.2.4 原核表达载体的构建 | 第63页 |
| 4.2.5 原核重组蛋白的表达 | 第63-64页 |
| 4.2.6 重组蛋白纯化与蛋白印迹分析 | 第64-65页 |
| 4.2.7 重组转化子菌液对低温、高温及高盐的耐受性 | 第65-67页 |
| 4.2.8 MiRab5在不同组织中的表达 | 第67页 |
| 2.2.9 MiRab5在逆境条件下的表达 | 第67-68页 |
| 4.2.10 MiRab5基因在信号刺激物质下的表达 | 第68-69页 |
| 4.3 讨论 | 第69-71页 |
| 4.4 小结 | 第71-72页 |
| 第五章 杜果MiRab-GDI基因的克隆与表达分析 | 第72-86页 |
| 5.1 材料与方法 | 第72-75页 |
| 5.1.1 材料 | 第72页 |
| 5.1.2 主要试剂 | 第72页 |
| 5.1.3 RNA提取及cDNA第一链合成 | 第72-73页 |
| 5.1.4 MiRab-GDI克隆及序列分析 | 第73页 |
| 5.1.5 实时定量PCR | 第73页 |
| 5.1.6 重组原核表达载体的构建 | 第73页 |
| 5.1.7 目的基因的表达 | 第73-74页 |
| 5.1.8 重组蛋白的纯化与Western Blot检测 | 第74-75页 |
| 5.1.9 转化子对低温、高温及高盐的耐受性 | 第75页 |
| 5.2 结果与分析 | 第75-83页 |
| 5.2.1 MiRab-GDI基因克隆 | 第75页 |
| 5.2.2 生物信息学分析 | 第75-78页 |
| 5.2.3 MiRab-GDI在不同组织中的表达分析 | 第78页 |
| 5.2.4 MiRab-GDI在逆境条件下的表达 | 第78-79页 |
| 5.2.5 MiRab-GDI在信号物质刺激下的表达 | 第79-80页 |
| 5.2.6 MiRab-GDI重组蛋白的诱导表达及纯化 | 第80-81页 |
| 5.2.7 Western blot分析 | 第81-82页 |
| 5.2.8 重组转化子菌液对低温、高温及高盐的影响 | 第82-83页 |
| 5.3 讨论 | 第83-85页 |
| 5.4 小结 | 第85-86页 |
| 第六章 杜果两个Rab基因和MiRab-GDI基因转化拟南芥 | 第86-96页 |
| 6.1 材料与方法 | 第86-90页 |
| 6.1.1 材料 | 第86页 |
| 6.1.2 杧果总RNA的提取及反转录 | 第86页 |
| 6.1.3 相关基因的引物设计 | 第86-87页 |
| 6.1.4 相关基因ORF的扩增 | 第87页 |
| 6.1.5 相关基因植物重组表达载体构建 | 第87页 |
| 6.1.6 农杆菌感受态细胞的制备(CaCl_2法) | 第87-88页 |
| 6.1.7 冻融法转化农杆菌 | 第88页 |
| 6.1.8 拟南芥培养 | 第88-89页 |
| 6.1.9 花序浸染法转化拟南芥 | 第89页 |
| 6.1.10 拟南芥种子的筛选 | 第89页 |
| 6.1.11 GUS组织化学染色分析 | 第89页 |
| 6.1.12 转基因拟南芥的功能初步分析 | 第89-90页 |
| 6.2 结果与分析 | 第90-94页 |
| 6.2.1 相关基因植物表达载体的构建 | 第90页 |
| 6.2.2 农杆菌介导转化拟南芥及筛选 | 第90-92页 |
| 6.2.3 T1代转基因生长表型观察 | 第92-93页 |
| 6.2.4 低温对部分T2代转基因拟南芥生长的影响 | 第93-94页 |
| 6.2.5 干旱对部分转基因拟南芥生长的影响 | 第94页 |
| 6.3 讨论 | 第94-95页 |
| 6.4 小结 | 第95-96页 |
| 第七章 全文结论、创新点和研究展望 | 第96-99页 |
| 7.1 全文结论 | 第96-97页 |
| 7.2 创新点 | 第97页 |
| 7.3 研究展望 | 第97-99页 |
| 参考文献 | 第99-117页 |
| 致谢 | 第117-118页 |
| 附录 | 第118-121页 |
