| 摘要 | 第5-6页 |
| ABSTRACT | 第6页 |
| 第一章 绪论 | 第10-17页 |
| 1.1 磁性纳米材料 | 第10-11页 |
| 1.1.1 磁性纳米粒子 | 第10-11页 |
| 1.1.2 核壳型磁性纳米粒子 | 第11页 |
| 1.2 纳米载体的靶向传递 | 第11-13页 |
| 1.3 Notch信号通路与肿瘤的发生发展 | 第13页 |
| 1.4 RNAi干扰技术 | 第13-15页 |
| 1.5 本课题的主要研究内容 | 第15-17页 |
| 第二章 纳米粒子的构筑与表征 | 第17-33页 |
| 2.1 实验材料 | 第17-18页 |
| 2.1.1 质粒 | 第17页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第17页 |
| 2.1.3 主要溶液配制 | 第17页 |
| 2.1.4 主要仪器和设备 | 第17-18页 |
| 2.2 实验方法 | 第18-23页 |
| 2.2.1 反应容器的清洗 | 第18页 |
| 2.2.2 二氧化硅包裹四氧化三铁纳米粒子的制备 | 第18-19页 |
| 2.2.2.1 荧光型Fe_3O_4@SiO_2(FITC)纳米粒子的制备 | 第18-19页 |
| 2.2.2.2 Fe_3O_4@SiO_2纳米粒子的制备 | 第19页 |
| 2.2.3 靶向荧光型Fe_3O_4@SiO_2(FITC)/PEI-FA纳米粒子的制备 | 第19-20页 |
| 2.2.3.1 PEI-FA共聚物的制备 | 第19页 |
| 2.2.3.2 Fe_3O_4@SiO_2(FITC)/PEI-FA纳米粒子的制备 | 第19-20页 |
| 2.2.3.3 Fe_3O_4@SiO_2(FITC)/PEI纳米粒子的制备 | 第20页 |
| 2.2.4 纳米粒子的水溶性与分散性 | 第20页 |
| 2.2.5 Fe_3O_4@SiO_2(FITC)/PEI-FA纳米粒子与Notch-1shRNA的相互作用 | 第20-21页 |
| 2.2.5.1 Notch-1shRNA的提取及浓度测定 | 第20-21页 |
| 2.2.5.2 纳米载体对Notch-1shRNA的吸附 | 第21页 |
| 2.2.5.3 纳米载体对Notch-1shRNA的保护 | 第21页 |
| 2.2.6 纳米粒子的性质表征 | 第21-23页 |
| 2.2.6.1 扫描电镜和透射电镜观察 | 第21-22页 |
| 2.2.6.2 倒置荧光显微镜观察 | 第22页 |
| 2.2.6.3 电位分析仪检测 | 第22页 |
| 2.2.6.4 紫外分光光度计检测 | 第22页 |
| 2.2.6.5 核磁共振氢谱检测 | 第22页 |
| 2.2.6.6 荧光分光光度计检测 | 第22页 |
| 2.2.6.7 量子干涉仪检测 | 第22-23页 |
| 2.3 实验结果与讨论 | 第23-32页 |
| 2.3.1 Fe_3O_4@SiO_2(FITC)纳米粒子的合成 | 第23-25页 |
| 2.3.2 倒置荧光显微镜鉴定纳米粒子的荧光情况 | 第25-26页 |
| 2.3.3 叶酸与PEI连接确认 | 第26-28页 |
| 2.3.4 Fe_3O_4@SiO_2(FITC)与PEI-FA形成复合纳米载体确认 | 第28-29页 |
| 2.3.4.1 荧光分光光度计鉴定PEI-FA的成功连接 | 第28页 |
| 2.3.4.2 电位分析仪对纳米粒子的电位进行分析 | 第28-29页 |
| 2.3.5 纳米粒子的水溶性与分散性 | 第29-30页 |
| 2.3.6 量子干涉仪对纳米粒子的超顺磁性分析 | 第30页 |
| 2.3.7 复合纳米粒子和shRNA之间的相互作用 | 第30-32页 |
| 2.3.7.1 纳米载体对Notch-1 shRNA的吸附 | 第30-31页 |
| 2.3.7.2 纳米载体对Notch-1 shRNA的保护 | 第31-32页 |
| 2.4 小结 | 第32-33页 |
| 第三章 纳米载体抗肿瘤效应研究 | 第33-63页 |
| 3.1 实验材料 | 第33-35页 |
| 3.1.1 细胞 | 第33页 |
| 3.1.2 引物 | 第33页 |
| 3.1.3 主要试剂 | 第33-34页 |
| 3.1.4 主要仪器和设备 | 第34-35页 |
| 3.2 实验方法 | 第35-47页 |
| 3.2.1 MDA-MB-231细胞的复苏、传代与冻存 | 第35-36页 |
| 3.2.1.1 MDA-MB-231细胞的复苏 | 第35页 |
| 3.2.1.2 MDA-MB-231细胞的传代 | 第35页 |
| 3.2.1.3 MDA-MB-231细胞的冻存 | 第35-36页 |
| 3.2.2 CCK-8 检测细胞毒性 | 第36页 |
| 3.2.3 溶血实验 | 第36页 |
| 3.2.4 倒置荧光显微镜观察纳米粒子的细胞导入水平 | 第36-37页 |
| 3.2.5 荧光分光光度计定量测定纳米粒子的细胞导入量 | 第37-38页 |
| 3.2.6 激光共聚焦显微镜观察纳米粒子的细胞导入水平 | 第38-39页 |
| 3.2.7 在磁场作用下细胞对纳米粒子的内吞 | 第39页 |
| 3.2.8 Notch-1 shRNA影响细胞增殖实验 | 第39-40页 |
| 3.2.9 Notch-1 shRNA影响细胞凋亡实验 | 第40页 |
| 3.2.10 在磁场下Notch-1 shRNA影响细胞凋亡实验 | 第40-41页 |
| 3.2.11 mRNA检测 | 第41-43页 |
| 3.2.11.1 细胞总RNA提取 | 第41-42页 |
| 3.2.11.2 RT-PCR | 第42-43页 |
| 3.2.12 蛋白质印迹法检测Notch-1 蛋白含量 | 第43-46页 |
| 3.2.12.1 蛋白质的提取 | 第43-44页 |
| 3.2.12.2 蛋白质浓度的测定 | 第44页 |
| 3.2.12.3 蛋白质的SDS-PAGE电泳 | 第44-46页 |
| 3.2.13 MRI成像检测 | 第46-47页 |
| 3.3 实验结果与讨论 | 第47-62页 |
| 3.3.1 细胞毒性实验 | 第47-48页 |
| 3.3.2 体外溶血实验 | 第48-49页 |
| 3.3.3 荧光纳米粒子导入细胞效率 | 第49-54页 |
| 3.3.4 荧光纳米粒子的磁靶向导入能力 | 第54-55页 |
| 3.3.5 Notch-1 基因沉默效果检测 | 第55-57页 |
| 3.3.6 细胞增殖 | 第57页 |
| 3.3.7 细胞凋亡 | 第57-59页 |
| 3.3.8 磁靶向细胞凋亡 | 第59-60页 |
| 3.3.9 核磁共振造影剂效果研究 | 第60-62页 |
| 3.4 本章小结 | 第62-63页 |
| 第四章 全文总结与展望 | 第63-64页 |
| 4.1 全文总结 | 第63页 |
| 4.2 后续工作展望 | 第63-64页 |
| 致谢 | 第64-65页 |
| 参考文献 | 第65-69页 |
| 攻读硕士学位期间取得的成果 | 第69-70页 |
