| 摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 缩略语表 | 第12-13页 |
| 第一章 绪论 | 第13-25页 |
| 1.1 白蚁 | 第13-17页 |
| 1.1.1 白蚁概述 | 第13-14页 |
| 1.1.2 黄翅大白蚁 | 第14-15页 |
| 1.1.3 培菌白蚁的共生微生物 | 第15-16页 |
| 1.1.4 黄翅大白蚁肠道优势菌Dysgonomonas | 第16-17页 |
| 1.2 β-葡萄糖苷酶 | 第17-20页 |
| 1.2.1 β-葡萄糖苷酶概述 | 第17-18页 |
| 1.2.2 GHF1家族β-葡萄糖苷酶 | 第18-19页 |
| 1.2.3 GHF3家族β-葡萄糖苷酶 | 第19-20页 |
| 1.3 β-葡萄糖苷酶的应用 | 第20-23页 |
| 1.3.1 β-葡萄糖苷酶的研究进展 | 第20-21页 |
| 1.3.2 β-葡萄糖苷酶的应用现状 | 第21-23页 |
| 1.4 本文的立题依据和研究内容 | 第23-25页 |
| 1.4.1 立题依据 | 第23-24页 |
| 1.4.2 研究内容 | 第24-25页 |
| 第二章 黄翅大白蚁由来β-葡萄糖苷酶的分子改造 | 第25-37页 |
| 2.1 引言 | 第25页 |
| 2.2 实验材料、试剂及仪器 | 第25页 |
| 2.2.1 实验材料 | 第25页 |
| 2.2.2 实验试剂与仪器设备 | 第25页 |
| 2.3 实验方法与步骤 | 第25-28页 |
| 2.3.1 构建突变体表达载体 | 第25-26页 |
| 2.3.2 诱导表达 | 第26-27页 |
| 2.3.3 纯化 | 第27页 |
| 2.3.4 酶活力测定方法 | 第27-28页 |
| 2.4 实验结果 | 第28-36页 |
| 2.4.1 GHF1家族β-葡萄糖苷酶序列分析 | 第28页 |
| 2.4.2 同源建模和突变体的选择 | 第28-30页 |
| 2.4.3 突变体的构建 | 第30-31页 |
| 2.4.4 突变体酶活分析 | 第31-32页 |
| 2.4.5 突变位点对酶稳定性的影响 | 第32-33页 |
| 2.4.6 葡萄糖耐受性 | 第33-34页 |
| 2.4.7 突变体的三维结构分析 | 第34-36页 |
| 2.5 小结与讨论 | 第36-37页 |
| 第三章 大白蚁营发酵单胞菌由来β-葡萄糖苷酶的研究 | 第37-49页 |
| 3.1 引言 | 第37页 |
| 3.2 实验材料、试剂及仪器 | 第37页 |
| 3.2.1 实验材料 | 第37页 |
| 3.2.2 实验试剂及仪器 | 第37页 |
| 3.3 实验方法 | 第37-40页 |
| 3.3.1 基因组分析 | 第37页 |
| 3.3.2 进化树与分子模建分析 | 第37-38页 |
| 3.3.3 分子克隆与载体的构建 | 第38-39页 |
| 3.3.4 平板验证酶活力 | 第39-40页 |
| 3.3.5 蛋白表达 | 第40页 |
| 3.3.6 酶活力测定方法 | 第40页 |
| 3.4 实验结果 | 第40-48页 |
| 3.4.1 生物信息学分析Dysbgl | 第40-42页 |
| 3.4.2 在大肠杆菌JM109菌株中表达Dysbgl | 第42-44页 |
| 3.4.3 生物信息学分析具有活性的β-葡萄糖苷酶Dysbgls | 第44-48页 |
| 3.5 小结与讨论 | 第48-49页 |
| 第四章 大白蚁营发酵单胞菌由来DysbglE的克隆与表达 | 第49-63页 |
| 4.1 引言 | 第49页 |
| 4.2 实验材料、试剂及仪器 | 第49页 |
| 4.2.1 实验材料 | 第49页 |
| 4.2.2 实验试剂及仪器 | 第49页 |
| 4.3 实验方法 | 第49-52页 |
| 4.3.1 分子模建与进化树 | 第49-50页 |
| 4.3.2 分子克隆 | 第50页 |
| 4.3.3 蛋白表达与纯化 | 第50页 |
| 4.3.4 分子筛分析DysbglE重组蛋白的聚体情况 | 第50页 |
| 4.3.5 酶活力测定方法 | 第50页 |
| 4.3.6 酶学性质测定 | 第50-52页 |
| 4.4 实验结果 | 第52-62页 |
| 4.4.1 生物信息学分析 | 第52-54页 |
| 4.4.2 在大肠杆菌JM109菌株中表达 | 第54-56页 |
| 4.4.3 酶学性质分析 | 第56-60页 |
| 4.4.4 同源建模分析三维结构 | 第60-62页 |
| 4.5 小结与讨论 | 第62-63页 |
| 第五章 β-葡萄糖苷酶在枯草芽孢杆菌中的分泌表达与产酶条件优化 | 第63-79页 |
| 5.1 引言 | 第63页 |
| 5.2 实验材料、试剂与仪器 | 第63页 |
| 5.2.1 实验材料 | 第63页 |
| 5.2.2 实验试剂与仪器 | 第63页 |
| 5.3 实验方法与步骤 | 第63-65页 |
| 5.3.1 载体的构建与转化 | 第63-65页 |
| 5.3.2 分泌表达与产酶条件优化 | 第65页 |
| 5.3.3 蛋白的纯化 | 第65页 |
| 5.3.4 酶活力测定方法 | 第65页 |
| 5.4 实验结果 | 第65-77页 |
| 5.4.1 DysbglE在枯草芽孢杆菌WB800N中表达 | 第65-67页 |
| 5.4.2 枯草芽孢杆菌WB800N与大肠杆菌JM109表达体系的比较 | 第67-68页 |
| 5.4.3 响应面分析枯草芽孢杆菌WB800N表达体系的条件 | 第68-77页 |
| 5.5 小结与讨论 | 第77-79页 |
| 第六章 总结与展望 | 第79-81页 |
| 附录 | 第81-97页 |
| 附录一 本文所用试剂 | 第81-82页 |
| 附录二 本文所用仪器设备 | 第82-83页 |
| 附录三 本文所用培养基配方 | 第83-84页 |
| 附录四 本文所用主要溶液配方 | 第84-85页 |
| 1. 各种缓冲液的配制 | 第84页 |
| 2. 本文所用底物的配制 | 第84-85页 |
| 附录五 DysbglA全长序列(2313 bp) | 第85-87页 |
| 附录六 DysbglB全长序列(2319 bp) | 第87-89页 |
| 附录七 DysbglC全长序列(2325 bp) | 第89-91页 |
| 附录八 DysbglD全长序列(2241 bp) | 第91-93页 |
| 附录九 DysbglE全长序列(2286 bp) | 第93-95页 |
| 附录十 DysbglF全长序列(2328 bp) | 第95-97页 |
| 参考文献 | 第97-105页 |
| 致谢 | 第105-107页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第107-109页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第109页 |
