| 摘要 | 第8-9页 |
| Abstract | 第9页 |
| 第一章 绪论 | 第10-16页 |
| 1.1 大蒜病毒病 | 第10-11页 |
| 1.2 植物RNA沉默与病毒编码的沉默抑制子 | 第11-14页 |
| 1.2.1 植物RNA沉默 | 第11-13页 |
| 1.2.2 病毒编码的沉默抑制子 | 第13-14页 |
| 1.3 半胱氨酸富集蛋白 | 第14-15页 |
| 1.4 研究目的与意义 | 第15-16页 |
| 第二章 p15的序列分析 | 第16-26页 |
| 2.1 实验材料 | 第16-17页 |
| 2.1.1 供试植物 | 第16页 |
| 2.1.2 供试菌株及载体 | 第16页 |
| 2.1.3 试剂与仪器 | 第16-17页 |
| 2.2 实验方法 | 第17-20页 |
| 2.2.1 Trizol法提取总RNA | 第17页 |
| 2.2.2 反转录 | 第17-18页 |
| 2.2.3 克隆的鉴定 | 第18页 |
| 2.2.4 DNA片段的切胶回收 | 第18-19页 |
| 2.2.5 T载体连接 | 第19页 |
| 2.2.6 质粒纯化 | 第19-20页 |
| 2.2.7 大肠杆菌感受态制备与热激转化 | 第20页 |
| 2.3 实验结果 | 第20-25页 |
| 2.3.1 p15基因的获得 | 第20-22页 |
| 2.3.2 p15基因序列分析 | 第22-23页 |
| 2.3.3 p15及其突变体的定位分析 | 第23-25页 |
| 2.4 小结 | 第25-26页 |
| 第三章 p15的致病性研究 | 第26-41页 |
| 3.1 实验材料 | 第26页 |
| 3.2 实验方法 | 第26-38页 |
| 3.2.1 光学显微镜样品制备 | 第26-27页 |
| 3.2.2 双酶切 | 第27页 |
| 3.2.3 酶切产物回收 | 第27页 |
| 3.2.4 表达载体的构建 | 第27-28页 |
| 3.2.5 农杆菌感受态制备与电击转化 | 第28页 |
| 3.2.6 农杆菌共浸润本氏烟 | 第28-29页 |
| 3.2.7 蛋白Western-blot杂交 | 第29-30页 |
| 3.2.8 Gateway克隆技术构建p15相关载体 | 第30-31页 |
| 3.2.9 亚细胞单独定位与共定位 | 第31页 |
| 3.2.10 Northernblot检测 | 第31-32页 |
| 3.2.11 重组蛋白表达及纯化 | 第32-38页 |
| 3.3 实验结果 | 第38-40页 |
| 3.3.1 PVX过量表达p15后寄主症状加重,病毒积累量增加 | 第38-39页 |
| 3.3.2 p15过量表达后植株细胞排列畸形 | 第39-40页 |
| 3.4 小结 | 第40-41页 |
| 第四章 p15的沉默抑制子功能研究 | 第41-45页 |
| 4.1 实验材料 | 第41页 |
| 4.2 实验方法 | 第41-42页 |
| 4.2.1 实时荧光定量 | 第41页 |
| 4.2.2 蛋白Westernblot杂交 | 第41页 |
| 4.2.3 电激转化 | 第41页 |
| 4.2.4 质粒提取 | 第41页 |
| 4.2.5 热激转化 | 第41-42页 |
| 4.3 实验结果 | 第42-43页 |
| 4.3.1 通过16c验证p15的沉默抑制子功能 | 第42-43页 |
| 4.3.2 通过运动互补验证p15的沉默抑制子功能 | 第43页 |
| 4.4 小结 | 第43-45页 |
| 第五章 讨论 | 第45-46页 |
| 第六章 展望 | 第46-47页 |
| 6.1 p15蛋白核酸结合作用验证 | 第46页 |
| 6.2 关于p15在沉默抑制中对烟草基因的调节 | 第46页 |
| 6.3 分析与p15相关的蛋白 | 第46-47页 |
| 参考文献 | 第47-52页 |
| 致谢 | 第52-54页 |
| 附录 | 第54-58页 |
| 符号及缩写语说明 | 第58-60页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第60-61页 |
