| 致谢 | 第5-7页 |
| 摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 第一章 绪论 | 第16-35页 |
| 1.1 引言 | 第16页 |
| 1.2 变温扩增方法概述 | 第16-18页 |
| 1.3 等温扩增方法概述 | 第18-27页 |
| 1.3.1 核酸序列依赖性扩增 | 第18-19页 |
| 1.3.2 滚环扩增 | 第19-21页 |
| 1.3.3 环介导等温扩增 | 第21-22页 |
| 1.3.4 解旋酶依赖的扩增 | 第22-23页 |
| 1.3.5 重组酶聚合酶扩增 | 第23-24页 |
| 1.3.6 引物侵入分析扩增 | 第24-25页 |
| 1.3.7 信号介导的RNA扩增 | 第25页 |
| 1.3.8 无酶信号放大方法 | 第25-26页 |
| 1.3.9 其它等温扩增方法 | 第26-27页 |
| 1.4 基于切口内切酶的等温扩增方法 | 第27-33页 |
| 1.4.1 链置换扩增 | 第27-29页 |
| 1.4.2 指数等温扩增反应 | 第29-30页 |
| 1.4.3 切口内切酶信号扩增 | 第30-32页 |
| 1.4.4 JP探针介导扩增 | 第32-33页 |
| 1.5 本论文的研究内容 | 第33-35页 |
| 1.5.1 基于切口内切酶的等温扩增方法面临的挑战 | 第33页 |
| 1.5.2 本论文的研究内容 | 第33-35页 |
| 第二章 定位探针介导的切口内切酶可编程核酸剪切 | 第35-49页 |
| 2.1 引言 | 第35-37页 |
| 2.2 实验部分 | 第37-40页 |
| 2.2.1 试剂 | 第37-39页 |
| 2.2.2 仪器与装置 | 第39页 |
| 2.2.3 定位探针介导剪切反应 | 第39页 |
| 2.2.4 凝胶电泳与成像 | 第39页 |
| 2.2.5 实时荧光检测 | 第39-40页 |
| 2.2.6 AMC在质粒剪切中的应用 | 第40页 |
| 2.3 结果和讨论 | 第40-48页 |
| 2.3.1 AMC的基本原理 | 第40-41页 |
| 2.3.2 Nt.BstNBI在Y型结构中的剪切模式 | 第41-43页 |
| 2.3.3 可编程的、序列特异性的剪切 | 第43-44页 |
| 2.3.4 单碱基水平的剪切位点调节 | 第44-45页 |
| 2.3.5 定位探针的3'侧臂对AMC的影响 | 第45-46页 |
| 2.3.6 AMC剪切质粒pKD3 | 第46-47页 |
| 2.3.7 基于其它限制性内切酶的AMC | 第47-48页 |
| 2.4 结论 | 第48-49页 |
| 第三章 基于定位探针介导剪切的等温指数扩增方法 | 第49-62页 |
| 3.1 引言 | 第49-50页 |
| 3.2 实验部分 | 第50-53页 |
| 3.2.1 试剂 | 第50-52页 |
| 3.2.2 仪器与装置 | 第52页 |
| 3.2.3 AMC-SDA的实验步骤 | 第52-53页 |
| 3.2.4 质粒pUC57的扩增 | 第53页 |
| 3.2.5 AMC-SDA用于实际HBV样品的扩增和检测 | 第53页 |
| 3.3 结果和讨论 | 第53-61页 |
| 3.3.1 AMC-SDA的基本原理 | 第53-54页 |
| 3.3.2 探针和引物的3'封端 | 第54-55页 |
| 3.3.3 AMC-SDA的可行性研究 | 第55-56页 |
| 3.3.4 AMC-SDA的灵敏度 | 第56-57页 |
| 3.3.5 AMC-SDA的特异性 | 第57-58页 |
| 3.3.6 AMC-SDA的通用性 | 第58页 |
| 3.3.7 扩增质粒pUC57 | 第58-60页 |
| 3.3.8 HBV DNA的检测 | 第60-61页 |
| 3.4 结论 | 第61-62页 |
| 第四章 超高灵敏AMC-SDA方法学研究 | 第62-74页 |
| 4.1 引言 | 第62-63页 |
| 4.2 实验部分 | 第63-65页 |
| 4.2.1 试剂 | 第63-64页 |
| 4.2.2 仪器与装置 | 第64页 |
| 4.2.3 定位探针介导剪切实验 | 第64页 |
| 4.2.4 硫化和脱碱基位点分别对切口内切酶和聚合酶的催化性能影响研究 | 第64-65页 |
| 4.2.5 凝胶电泳与成像 | 第65页 |
| 4.2.6 AMC-SDA实验 | 第65页 |
| 4.3 结果和讨论 | 第65-73页 |
| 4.3.1 AMC-SDA检测性能的影响因素分析 | 第65-66页 |
| 4.3.2 定位探针的结构改进 | 第66-68页 |
| 4.3.3 非特异性扩增的抑制研究 | 第68-73页 |
| 4.3.3.1 线性引物硫化 | 第68-69页 |
| 4.3.3.2 线性引物引入脱碱基位点 | 第69-73页 |
| 4.4 结论 | 第73-74页 |
| 第五章 基于定位探针介导剪切的EXPAR方法 | 第74-82页 |
| 5.1 引言 | 第74页 |
| 5.2 实验部分 | 第74-76页 |
| 5.2.1 试剂 | 第74-75页 |
| 5.2.2 仪器与装置 | 第75-76页 |
| 5.2.3 AMCEA的实验步骤 | 第76页 |
| 5.2.4 凝胶电泳与成像 | 第76页 |
| 5.2.5 人血清中参杂的目标DNA的检测 | 第76页 |
| 5.3 结果和讨论 | 第76-81页 |
| 5.3.1 AMCEA的基本原理 | 第76-77页 |
| 5.3.2 AMCEA的可行性研究 | 第77-78页 |
| 5.3.3 AMCEA的灵敏度 | 第78-79页 |
| 5.3.4 AMCEA的特异性 | 第79-80页 |
| 5.3.5 AMCEA的通用性研究 | 第80页 |
| 5.3.6 AMCEA在人血清中的检测效果 | 第80-81页 |
| 5.4 结论 | 第81-82页 |
| 第六章 基于定位探针介导的蛋白检测方法 | 第82-93页 |
| 6.1 引言 | 第82-83页 |
| 6.2 实验部分 | 第83-85页 |
| 6.2.1 试剂 | 第83-84页 |
| 6.2.2 仪器与装置 | 第84页 |
| 6.2.3 SER-EXPAR的实验步骤 | 第84页 |
| 6.2.4 凝胶电泳—蛋白阻滞实验 | 第84页 |
| 6.2.5 人血清中参杂的Avidin的检测 | 第84-85页 |
| 6.3 结果和讨论 | 第85-92页 |
| 6.3.1 SER-EXPAR的基本原理 | 第85-86页 |
| 6.3.2 EBH的结构优化 | 第86-87页 |
| 6.3.3 SER-EXPAR的可行性研究 | 第87-89页 |
| 6.3.4 SER-EXPAR的灵敏度和线性范围 | 第89-90页 |
| 6.3.5 SER-EXPAR的特异性 | 第90-91页 |
| 6.3.6 SER-EXPAR在人血清中的检测效果 | 第91-92页 |
| 6.4 结论 | 第92-93页 |
| 第七章 总结与展望 | 第93-95页 |
| 7.1 本论文的主要创新点 | 第93页 |
| 7.2 本论文不足之处与未来展望 | 第93-95页 |
| 参考文献 | 第95-112页 |
| 附录 | 第112-113页 |
| 作者简历 | 第113-114页 |
| 攻读博士学位期间所取得的科研成果 | 第114-115页 |
