| 中文摘要 | 第3-4页 |
| ABSTRACT | 第4页 |
| 第一章 文献综述 | 第7-18页 |
| 1.1 核黄素的理化性质、功能和用途 | 第7页 |
| 1.2 核黄素的生产现状及生产方法 | 第7-9页 |
| 1.2.1 化学半合成法 | 第8页 |
| 1.2.2 微生物发酵法 | 第8-9页 |
| 1.3 Bacillus subtilis中核黄素的生物合成途径及主要酶的功能 | 第9-12页 |
| 1.3.1 Bacillus subtilis中核黄素的生物合成途径 | 第9-11页 |
| 1.3.2 核黄素操纵子结构及其基因所编码的酶的功能 | 第11-12页 |
| 1.4 产核黄素Bacillus subtilis工程菌的构建和策略 | 第12-15页 |
| 1.4.1 代谢模型的构建与模拟 | 第12-13页 |
| 1.4.2 传统诱变及基因组重排技术 | 第13-14页 |
| 1.4.3 增加核黄素操纵子的转录和表达 | 第14-15页 |
| 1.4.4 增加前体物的供给或减少副产物形成 | 第15页 |
| 1.5 本文选题背景和主要内容 | 第15-18页 |
| 第二章 实验材料与实验方法 | 第18-33页 |
| 2.1 实验材料 | 第18-24页 |
| 2.1.1 菌种和质粒 | 第18-19页 |
| 2.1.2 主要实验仪器 | 第19-20页 |
| 2.1.3 药品与试剂 | 第20-22页 |
| 2.1.4 培养基 | 第22-24页 |
| 2.2 实验方法 | 第24-33页 |
| 2.2.1 大肠杆菌感受态细胞的制备与转化 | 第24-25页 |
| 2.2.2 大肠杆菌质粒的提取 | 第25页 |
| 2.2.3 DNA片段的回收纯化 | 第25页 |
| 2.2.4 PCR反应体系 | 第25-26页 |
| 2.2.5 酶切体系 | 第26-27页 |
| 2.2.6 载体质粒的去磷酸化 | 第27页 |
| 2.2.7 酶连体系 | 第27-28页 |
| 2.2.8 琼脂糖凝胶电泳 | 第28页 |
| 2.2.9 转化方法 | 第28-30页 |
| 2.2.10 菌落PCR验证重组质粒在枯草芽孢杆菌的转化 | 第30页 |
| 2.2.11 菌体生长曲线的测定 | 第30页 |
| 2.2.12 发酵和测定样品中各物质的含量 | 第30-31页 |
| 2.2.13 rbsK和tkt基因敲除前后枯草芽孢杆菌代谢物变化 | 第31-32页 |
| 2.2.14 引物 | 第32-33页 |
| 第三章 实验结果与讨论 | 第33-54页 |
| 3.1 rbsK基因在枯草芽孢杆菌中的敲除 | 第33-43页 |
| 3.1.1 rbsK基因的PCR扩增 | 第33-35页 |
| 3.1.2 rbsK基因与载体质粒的酶切 | 第35-36页 |
| 3.1.3 rbsK基因与载体质粒的酶连 | 第36-37页 |
| 3.1.4 重组质粒pUC18-rbsK在大肠杆菌中的筛选验证 | 第37-38页 |
| 3.1.5 在rbsK中插入抗性基因 | 第38-42页 |
| 3.1.6 重组质粒在野生型枯草芽孢杆菌中转化及验证 | 第42-43页 |
| 3.2 tkt基因在枯草芽孢杆菌的敲除 | 第43-48页 |
| 3.2.1 重组质粒pDG1731-tkt的构建 | 第43-45页 |
| 3.2.2 重组质粒pDG1731-tkt-Kan、pDG1731-tkt-Spc的构建 | 第45-48页 |
| 3.2.3 重组质粒pDG1731-tkt-Kan、pDG1731-tkt-Spc在枯草芽孢杆菌中的转化 | 第48页 |
| 3.3 枯草芽孢杆菌敲除rbsK基因与tkt基因前后分析对比 | 第48-54页 |
| 3.3.1 LC-MS检测rbsK基因和tkt基因敲除前后代谢物变化 | 第49-51页 |
| 3.3.2 rbsK基因和tkt基因敲除前后核黄素发酵产量的变化 | 第51-54页 |
| 第四章 结论与展望 | 第54-56页 |
| 4.1 结论 | 第54页 |
| 4.2 展望 | 第54-56页 |
| 参考文献 | 第56-60页 |
| 发表论文和参加科研情况说明 | 第60-61页 |
| 致谢 | 第61页 |
