| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 主要缩写词 | 第11-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-32页 |
| 1.1 花粉管的极性生长 | 第12-14页 |
| 1.1.1 花粉管的极性生长是被子植物完成双受精的关键步骤 | 第12页 |
| 1.1.2 花粉管是研究细胞极性的理想系统 | 第12页 |
| 1.1.3 花粉管的结构与生长 | 第12-14页 |
| 1.2 微丝骨架在花粉管的极性生长中发挥重要作用 | 第14-24页 |
| 1.2.1 微丝的组成、结构和动态 | 第14-15页 |
| 1.2.2 花粉管中的微丝细胞骨架 | 第15-16页 |
| 1.2.3 花粉管中的微丝结合蛋白 | 第16-20页 |
| 1.2.4 微丝骨架与其他信号分子共同调控花粉管的极性生长 | 第20-24页 |
| 1.3 Profilin的研究进展 | 第24-30页 |
| 1.3.1 Profilin的结构 | 第24-26页 |
| 1.3.2 Profilin对微丝的双重调控作用 | 第26页 |
| 1.3.3 植物中的profilin | 第26-30页 |
| 1.4 本课题的研究目的和意义 | 第30-32页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第32-53页 |
| 2.1 实验材料 | 第32-33页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第32页 |
| 2.1.2 载体 | 第32页 |
| 2.1.3 菌株 | 第32页 |
| 2.1.4 常用药品、试剂及酶 | 第32-33页 |
| 2.2 仪器设备 | 第33-34页 |
| 2.3 引物列表 | 第34-36页 |
| 2.4 实验方法 | 第36-53页 |
| 2.4.1 常用抗生素母液的配制 | 第36页 |
| 2.4.2 常用溶液及试剂的配制 | 第36-38页 |
| 2.4.3 常用培养基的配制 | 第38-39页 |
| 2.4.4 拟南芥的种植 | 第39页 |
| 2.4.5 拟南芥基因组DNA的提取 | 第39页 |
| 2.4.6 突变体基因型的鉴定 | 第39页 |
| 2.4.7 拟南芥花朵(花粉)总RNA的提取 | 第39-40页 |
| 2.4.8 反转录 | 第40页 |
| 2.4.9 半定量PCR | 第40-41页 |
| 2.4.10 荧光定量PCR | 第41页 |
| 2.4.11 琼脂糖凝胶回收DNA | 第41页 |
| 2.4.12 大肠杆菌质粒的提取 | 第41-42页 |
| 2.4.13 载体的构建 | 第42-43页 |
| 2.4.14 定点突变 | 第43页 |
| 2.4.15 农杆菌介导的拟南芥浸花转化 | 第43-44页 |
| 2.4.16 花粉体外萌发 | 第44页 |
| 2.4.17 花粉粒及花粉管微丝染色 | 第44-45页 |
| 2.4.18 微丝解聚剂LatB的处理 | 第45页 |
| 2.4.19 花粉管中微丝动态的观察 | 第45页 |
| 2.4.20 花粉管中单根微丝动态参数的测定 | 第45-46页 |
| 2.4.21 花粉管免疫荧光染色 | 第46页 |
| 2.4.22 花粉管中分泌囊泡的分布范围的观察 | 第46-47页 |
| 2.4.23 花粉管分泌囊泡的荧光漂白恢复实验 | 第47页 |
| 2.4.24 拟南芥花朵(花粉)总蛋白的提取 | 第47页 |
| 2.4.25 蛋白质免疫印迹(Western Blot) | 第47-48页 |
| 2.4.26 Profilin抗体的制备 | 第48页 |
| 2.4.27 兔肌肉肌动蛋白(RSMA)的纯化 | 第48-49页 |
| 2.4.28 蛋白的表达和纯化 | 第49-51页 |
| 2.4.29 通过pyrene荧光值变化分析蛋白对微丝自发成核的影响 | 第51页 |
| 2.4.30 Profilin与PLP亲和性的测定 | 第51-52页 |
| 2.4.31 F-actin高速共沉淀实验 | 第52页 |
| 2.4.32 通过“微丝踏车”(F-actin treadmilling)实验检测蛋白对微丝负端肌动蛋白解离速率的影响 | 第52页 |
| 2.4.33 通过全内反射荧光显微镜(TIRFM)直接观察微丝聚合的过程 | 第52-53页 |
| 第三章 PRF4和PRF5共同调控花粉管的极性生长 | 第53-59页 |
| 3.1 PRF4和PRF5功能缺失突变体及互补株系中其转录本含量的鉴定 | 第53-55页 |
| 3.2 Profilin突变体花粉管表型的观察与分析 | 第55-59页 |
| 第四章 Profilin促进花粉粒及花粉管中微丝聚合 | 第59-65页 |
| 4.1 Profilin突变体花粉粒及花粉管中微丝含量减少,花粉管亚顶端微丝结构紊乱 | 第59-61页 |
| 4.2 prf4 prf5花粉管中微丝动态的观察 | 第61-65页 |
| 第五章 PRF4和PRF5功能缺失影响了分泌囊泡的聚集和运输 | 第65-69页 |
| 5.1 Profilin突变体花粉管中分泌囊泡的分布范围变大,运输速率减慢 | 第65-67页 |
| 5.2 Profilin突变体花粉管细胞壁成分发生改变 | 第67-69页 |
| 第六章 Profilin促进微丝的动态周转 | 第69-77页 |
| 6.1 PRF4和PRF5功能缺失的花粉管微丝动态周转减慢 | 第69-71页 |
| 6.2 Profilin与单体肌动蛋白的结合对于其促进微丝动态周转是重要的 | 第71-77页 |
| 6.2.1 Profilin能够抑制微丝自发成核 | 第71-72页 |
| 6.2.2 PRF5能够提高微丝聚合的临界浓度,也能协同其它微丝结合蛋白加速单体肌动蛋白在微丝负端解离 | 第72-74页 |
| 6.2.3 Profilin与单体肌动蛋白的结合对于profilin促进微丝动态周转是重要的 | 第74-77页 |
| 第七章 Profilin促进花粉管顶端微丝聚合可能是通过formin介导的 | 第77-85页 |
| 7.1 Profilin与PLP的结合对其促进微丝聚合是重要的 | 第77-82页 |
| 7.1.1 PRF5与PLP亲和性降低突变蛋白的获得 | 第77-78页 |
| 7.1.2 pgPRF5_(Y6A)转基因株系花粉管能够互补prf5花粉管对LatB不敏感的表型 | 第78-80页 |
| 7.1.3 pgPRF5_(Y6A)转基因株系花粉管不能完全恢复prf4 prf5花粉管的表型 | 第80-82页 |
| 7.2 FH5能利用profilin-actin复合体进行微丝聚合 | 第82-85页 |
| 第八章 PRF4和PRF5的亚细胞定位 | 第85-93页 |
| 第九章 讨论和展望 | 第93-97页 |
| 9.1 PRF4和PRF5在花粉管中对微丝动态进行双重调控 | 第93-94页 |
| 9.2 Profilin参与的花粉管顶端微丝的聚合可能是由formin介导的 | 第94-95页 |
| 9.3 花粉管顶端微丝在囊泡运输、融合和分泌过程中发挥重要作用 | 第95-97页 |
| 第十章 结论 | 第97-98页 |
| 参考文献 | 第98-114页 |
| 致谢 | 第114-116页 |
| 作者简介 | 第116页 |
