| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 第1章 绪论 | 第13-21页 |
| 1.1 癌症 | 第13页 |
| 1.2 乳腺癌与乳腺癌分型 | 第13-14页 |
| 1.2.1 乳腺癌分型 | 第13页 |
| 1.2.2 三阴性乳腺癌 | 第13-14页 |
| 1.3 上皮间质转化——EMT过程 | 第14-15页 |
| 1.3.1 EMT标志物 | 第15页 |
| 1.3.2 转录因子ZEB2概述 | 第15页 |
| 1.4 转录因子FOXA1概述 | 第15-17页 |
| 1.4.1 FOXA1基因和蛋白结构 | 第16页 |
| 1.4.2 FOXA1的生物学功能 | 第16-17页 |
| 1.5 蛋白互作研究方法介绍 | 第17-19页 |
| 1.5.1 酵母双杂交 | 第17-18页 |
| 1.5.2 等离子共振 | 第18页 |
| 1.5.3 免疫共沉淀 | 第18页 |
| 1.5.4 噬茵体展示 | 第18-19页 |
| 1.5.5 抗体与蛋白质阵列 | 第19页 |
| 1.5.6 荧光能量转移 | 第19页 |
| 1.6 本文研究背景及方法 | 第19-21页 |
| 第2章 FOXA1的表达与乳腺癌上皮表型相关 | 第21-32页 |
| 2.1 前言 | 第21页 |
| 2.2 实验材料及实验仪器 | 第21-23页 |
| 2.2.1 临床样本和乳腺癌细胞 | 第21页 |
| 2.2.2 其它实验材料和仪器 | 第21-23页 |
| 2.3 实验方法 | 第23-29页 |
| 2.3.1 乳腺癌临床样本 | 第23页 |
| 2.3.2 细胞培养 | 第23-25页 |
| 2.3.3 RNA提取及逆转录 | 第25-26页 |
| 2.3.4 荧光定量PCR | 第26页 |
| 2.3.5 Western Blotting | 第26-29页 |
| 2.4 实验结果与讨论 | 第29-31页 |
| 2.4.1 乳腺癌临床样本中FOXA1与上皮特性相关 | 第29-30页 |
| 2.4.2 乳腺癌细胞中FOXA1蛋白表达检测 | 第30-31页 |
| 2.4.3 乳腺癌细胞中FOXA1、E-cadherin、vimentin mRNA表达水平检测 | 第31页 |
| 2.4.4 讨论 | 第31页 |
| 2.5 本章小结 | 第31-32页 |
| 第3章 FOXA1调控下游靶基因ZEB2 | 第32-41页 |
| 3.1 前言 | 第32页 |
| 3.2 实验材料及实验仪器 | 第32-34页 |
| 3.2.1 细胞 | 第32页 |
| 3.2.2 实验材料与仪器 | 第32-34页 |
| 3.3 实验方法 | 第34-36页 |
| 3.3.1 细胞培养 | 第34页 |
| 3.3.2 质粒大提 | 第34-35页 |
| 3.3.3 脂质体转染 | 第35页 |
| 3.3.4 RNA的提取以及逆转录 | 第35页 |
| 3.3.5 荧光定量PCR | 第35-36页 |
| 3.3.6 荧光素酶报告基因实验 | 第36页 |
| 3.3.7 Western Blotting | 第36页 |
| 3.4 实验结果及讨论 | 第36-39页 |
| 3.4.1 在乳腺癌临床样本中FOXA1与ZEB2表达呈负相关 | 第36-37页 |
| 3.4.2 微镜下观察MCF-7、MDA-MB-468细胞形态 | 第37页 |
| 3.4.3 在MCF-7、MB468细胞中检测内源性FOXA1、ZEB2以及E-cadherin、vimentin的mRNA表达情况 | 第37-38页 |
| 3.4.4 高表达FOXA1后,MB-468细胞中ZEB2和上皮间质相关基因的mRNA和蛋白表达水平的检测 | 第38-39页 |
| 3.4.5 FOXA1可以抑制ZEB2基因转录 | 第39页 |
| 3.4.6 讨论 | 第39页 |
| 3.5 本章小结 | 第39-41页 |
| 第4章 运用His标签Pull-down技术对FOXA1互作蛋白的初步研究 | 第41-53页 |
| 4.1 前言 | 第41页 |
| 4.2 实验材料及实验仪器 | 第41-43页 |
| 4.3 实验方法 | 第43-48页 |
| 4.3.1 细胞培养 | 第43页 |
| 4.3.2 磷酸钙转染 | 第43-44页 |
| 4.3.3 细胞总蛋白提取 | 第44页 |
| 4.3.4 PCR扩增人FOXA1基因 | 第44页 |
| 4.3.5 基因与质粒的酶切、纯化、连接及转化 | 第44-46页 |
| 4.3.6 质粒小提 | 第46页 |
| 4.3.7 His标签pull-down技术 | 第46-47页 |
| 4.3.8 SDS-PAGE电泳凝胶染色与Western印迹鉴定 | 第47页 |
| 4.3.9 蛋白质酶解 | 第47-48页 |
| 4.3.10 LTQ质谱检测 | 第48页 |
| 4.3.11 数据分析 | 第48页 |
| 4.4 实验结果与讨论 | 第48-52页 |
| 4.4.1 pcDNA-His-FOXA1真核重组表达载体的构建及鉴定 | 第48-49页 |
| 4.4.2 His标签pull-down技术流程的建立 | 第49-50页 |
| 4.4.3 Western印迹鉴定pull-down产物 | 第50页 |
| 4.4.4 Pull-down产物的SDS-PAGE分析 | 第50-51页 |
| 4.4.5 质谱分析 | 第51页 |
| 4.4.6 讨论 | 第51-52页 |
| 4.5 本章小结 | 第52-53页 |
| 结论 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-59页 |
| 附录A 英文缩写 | 第59-60页 |
| 附录B 常用缓冲液和试剂配方 | 第60-62页 |
| 附录C 攻读学位期间所发表的学术论文 | 第62-63页 |
| 致谢 | 第63页 |
