致谢 | 第4-11页 |
摘要 | 第11-13页 |
第一章 文献综述 | 第13-29页 |
1 小麦籽粒脂肪氧化酶研究进展 | 第13-21页 |
1.1 脂肪氧化酶的发现 | 第13-14页 |
1.2 脂肪酸氧化酶的测定及影响因素 | 第14-15页 |
1.2.1 Lox活性测定方法 | 第14-15页 |
1.2.2 Lox活性的影响因素 | 第15页 |
1.3 小麦Lox基因定位及克隆 | 第15-18页 |
1.3.1 Lox活性基因定位 | 第15-17页 |
1.3.2 Lox基因克隆及其变异类型 | 第17-18页 |
1.4 功能性标记开发及利用 | 第18-19页 |
1.5 脂肪氧化酶与小麦性状的关系 | 第19-21页 |
1.5.1 Lox对小麦加工品质的影响 | 第19-20页 |
1.5.2 Lox活性与小麦储藏特性的关系 | 第20-21页 |
1.5.3 Lox活性与小麦其他性状的关系 | 第21页 |
2 脂肪酸氧化酶在其它物种中的研究进展 | 第21-22页 |
2.1 脂肪酸氧化酶在大麦中的研究概况 | 第21-22页 |
2.2 脂肪酸氧化酶在大豆中的研究概况 | 第22页 |
2.3 脂肪酸氧化酶在水稻中的研究概况 | 第22页 |
3 植物RNA干扰研究进展 | 第22-28页 |
3.1 RNA干扰的发现 | 第23页 |
3.2 植物RNA干扰机理及其特点 | 第23-25页 |
3.2.1 植物中RNA干扰的途径 | 第23页 |
3.2.2 植物中ds RNA干扰的作用机制 | 第23-24页 |
3.2.3 植物中RNA干扰的特点 | 第24-25页 |
3.3 植物hp RNA表达载体的构建 | 第25-26页 |
3.3.1 启动子和终止子的选择 | 第25页 |
3.3.2 内含子及其它调控序列 | 第25页 |
3.3.3 hp RNA表达载体的构建方法 | 第25-26页 |
3.4 RNA干扰的诱导方法 | 第26页 |
3.5 植物RNA干扰在植物中的应用 | 第26-28页 |
3.5.1 改良作物品质方面的应用 | 第26-27页 |
3.5.2 鉴定植物基因功能方面的应用 | 第27页 |
3.5.3 植物抗性方面的应用 | 第27-28页 |
4 本研究目的和意义 | 第28-29页 |
第二章 普通小麦籽粒Lox活性及基因型与环境互作分析 | 第29-41页 |
1 材料与方法 | 第30-33页 |
1.1 试验材料 | 第30页 |
1.2 试验方法 | 第30-33页 |
1.2.1 田间试验设计 | 第30页 |
1.2.2 小麦籽粒Lox活性的测定方法 | 第30-32页 |
1.2.2.1 Lox吸光值测试 | 第30-31页 |
1.2.2.2 籽粒总蛋白浓度测试 | 第31页 |
1.2.2.3 小麦籽粒Lox活性值计算 | 第31-32页 |
1.2.3 小麦籽粒硬度及蛋白质含量的测定 | 第32页 |
1.2.4 小麦全麦粉色泽的测定 | 第32页 |
1.2.4.1 磨粉 | 第32页 |
1.2.4.2 色差仪参数的测定 | 第32页 |
1.2.5 统计分析 | 第32-33页 |
2 结果与分析 | 第33-38页 |
2.1 黄淮麦区小麦品种(系)Lox活性分布 | 第33-34页 |
2.2 小麦籽粒Lox活性的基因型与环境互作分析 | 第34-36页 |
2.2.1 不同年份间Lox活性的差异 | 第34-35页 |
2.2.2 不同地点间Lox活性的差异 | 第35页 |
2.2.3 Lox活性基因型与环境互作的方差分析 | 第35-36页 |
2.3 小麦籽粒Lox活性的遗传力估算 | 第36-37页 |
2.4 小麦品种(系)Lox活性与部分品质性状的相关分析 | 第37-38页 |
3 讨论 | 第38-41页 |
3.1 小麦Lox活性分布情况 | 第38-39页 |
3.2 基因型和环境对小麦Lox活性的影响 | 第39-40页 |
3.3 小麦Lox活性的与若干品质性状的关系 | 第40-41页 |
第三章 普通小麦 4B染色体Lox基因克隆及其与Lox活性的关系 | 第41-69页 |
1 材料与方法 | 第42-47页 |
1.1 试验材料 | 第42页 |
1.2 试验方法 | 第42-47页 |
1.2.1 小麦籽粒DNA的提取 | 第42-43页 |
1.2.2 籽粒Lox活性的测定 | 第43页 |
1.2.3 Ta Lox-B2和Ta Lox-B3基因克隆 | 第43-45页 |
1.2.3.1 引物设计 | 第43页 |
1.2.3.2 PCR反应体系及扩增程序 | 第43-44页 |
1.2.3.3 克隆测序 | 第44-45页 |
1.2.3.4 序列分析与基因定位 | 第45页 |
1.2.4 实时荧光定量PCR(Real-Time PCR) | 第45-46页 |
1.2.4.1 小麦总RNA的提取 | 第45-46页 |
1.2.4.2 c DNA第一链的合成及RT-PCR反应 | 第46页 |
1.2.5 SSR分子标记分析及连锁图谱构建 | 第46-47页 |
1.2.6 统计分析 | 第47页 |
2 结果与分析 | 第47-65页 |
2.1 普通小麦中Ta Lox-B2和Ta Lox-B3基因的发现及其分子特征 | 第47-52页 |
2.1.1 Lox基因的c DNA克隆 | 第47-48页 |
2.1.2 Ta Lox-B2基因的发现 | 第48页 |
2.1.3 Ta Lox-B3基因的发现 | 第48-50页 |
2.1.4 Ta Lox-B2和Ta Lox-B3基因的分子特征 | 第50-51页 |
2.1.5 Ta Lox-B2和Ta Lox-B3基因的生物信息学分析 | 第51-52页 |
2.2 STS功能性标记开发及其在黄淮麦区品种中的应用 | 第52-57页 |
2.2.1 STS功能性标记开发与验证 | 第52-54页 |
2.2.2 STS功能性标记的染色体定位 | 第54-55页 |
2.2.3 Ta Lox-B3基因的定位 | 第55-56页 |
2.2.4 Ta Lox-B基因等位变异在黄淮麦区小麦品种中的分布 | 第56-57页 |
2.3 普通小麦 4BS染色体上不同Ta Lox-B基因等位变异与Lox活性的关系 | 第57-62页 |
2.3.1 Ta Lox-B3基因对Lox活性的影响 | 第57-59页 |
2.3.2 其它Ta Lox-B基因与Lox活性的关系 | 第59-60页 |
2.3.3 不同Ta Lox-B基因等位组合与Lox活性的关系 | 第60-62页 |
2.4 Ta Lox-B2和Ta Lox-B3基因的表达量分析 | 第62-65页 |
2.4.1 Ta Lox-B2和Ta Lox-B3基因在不同组织中的表达情况 | 第62-63页 |
2.4.2 Ta Lox-B2和Ta Lox-B3基因在种子不同发育时期的表达情况 | 第63页 |
2.4.3 Ta Lox-B2和Ta Lox-B3基因在逆境胁迫下特异性表达分析 | 第63-65页 |
3 讨论 | 第65-69页 |
3.1 Lox基因与小麦籽粒品质性状的关系 | 第65页 |
3.2 小麦中Lox基因的克隆及定位 | 第65-66页 |
3.3 小麦中Lox基因结构特征 | 第66-67页 |
3.4 小麦中Lox基因的功能及其表达模式 | 第67页 |
3.5 Lox基因功能标记的开发及在小麦育种中的应用 | 第67-69页 |
第四章 Ta Lox-B1基因表达载体构建及其遗传转化 | 第69-85页 |
1 材料与方法 | 第70-74页 |
1.1 试验材料 | 第70-71页 |
1.1.1 植物材料 | 第70页 |
1.1.2 菌株和载体 | 第70页 |
1.1.3 目的片段的合成 | 第70页 |
1.1.4 酶、化学试剂及试剂盒 | 第70-71页 |
1.1.5 LB培养基配方 | 第71页 |
1.2 试验方法 | 第71-74页 |
1.2.1 小麦基因组总DNA及质粒DNA的提取 | 第71-72页 |
1.2.2 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第72页 |
1.2.3 DNA片段的酶切、回收、连接和转化 | 第72-73页 |
1.2.4 小麦幼胚培养及基因枪转化 | 第73页 |
1.2.5 小麦转基因后代的PCR筛选 | 第73页 |
1.2.6 转基因后代植株籽粒Lox活性的测定 | 第73页 |
1.2.7 转基因后代植株基因表达量分析 | 第73-74页 |
2 结果与分析 | 第74-82页 |
2.1 构建Ta Lox-B1基因表达载体 | 第74-78页 |
2.1.1 正、反向目的片段的连接 | 第74-75页 |
2.1.2 中间载体的构建 | 第75-77页 |
2.1.3 RNAi干扰表达载体的构建及验证 | 第77-78页 |
2.2 Ta Lox-B1基因表达载体的遗传转化 | 第78-79页 |
2.2.1 基因枪法转化小麦 | 第78页 |
2.2.2 小麦转基因植株Bar基因PCR检测 | 第78-79页 |
2.3 转基因植株后代的鉴定与分析 | 第79-82页 |
2.3.1 转基因植株T_3 代Ta Lox-B1基因鉴定 | 第79-80页 |
2.3.2 T_3 代籽粒Lox活性分析 | 第80-81页 |
2.3.3 RT-PCR分析小麦T_3 代植株Ta Lox-B1基因的表达情况 | 第81-82页 |
3 讨论 | 第82-85页 |
3.1 RNAi载体的构建策略 | 第82-83页 |
3.2 转基因后代中基因表达分析 | 第83页 |
3.3 RNAi技术在研究功能基因上的应用 | 第83-85页 |
第五章 结论 | 第85-87页 |
参考文献 | 第87-100页 |
附图 | 第100-105页 |
附表 | 第105-109页 |
Abstract | 第109-112页 |
作者简历 | 第113-114页 |