| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| Abbreviation | 第9-15页 |
| 第一章 前言 | 第15-34页 |
| 1.1 研究背景 | 第15页 |
| 1.2 海洋链霉菌研究进展 | 第15-20页 |
| 1.2.1 醌类和萜类化合物 | 第16-18页 |
| 1.2.2 大环内酯和聚酮类化合物 | 第18-19页 |
| 1.2.3 聚肽化合物 | 第19-20页 |
| 1.3 基因组挖掘 | 第20-24页 |
| 1.3.1 依据生物信息学分析指导结构预测 | 第20-22页 |
| 1.3.2 隐性基因簇激活方法的研究 | 第22-24页 |
| 1.4 核糖体工程 | 第24-28页 |
| 1.4.1 核糖体工程作用机制 | 第25-27页 |
| 1.4.2 核糖体工程的应用 | 第27-28页 |
| 1.5 Fredericamycins目前研究情况 | 第28-30页 |
| 1.6 统计学方法在微生物发酵过程中的应用 | 第30-33页 |
| 1.6.1 Plackett-Burman设计 | 第30-31页 |
| 1.6.2 响应面分析 | 第31-33页 |
| 1.7 本研究的目的和意义 | 第33-34页 |
| 第二章 利用核糖体工程手段激活Streptomyces somaliensis SCSIO ZH66隐性基因簇 | 第34-50页 |
| 引言 | 第34-35页 |
| 2.1 实验材料 | 第35-37页 |
| 2.1.1 菌株 | 第35页 |
| 2.1.2 实验试剂 | 第35-36页 |
| 2.1.3 实验仪器 | 第36-37页 |
| 2.2 实验方法 | 第37-42页 |
| 2.2.1 培养基成分 | 第37-38页 |
| 2.2.2 培养方法 | 第38页 |
| 2.2.3 孢子悬液的获得 | 第38-39页 |
| 2.2.4 最小抑菌浓度(MIC)的测定 | 第39页 |
| 2.2.5 筛选高浓度抗生素抗性突变株 | 第39-40页 |
| 2.2.6 分析及测定方法 | 第40页 |
| 2.2.7 次级代谢产物活性测试(MTT法) | 第40页 |
| 2.2.8 化合物分离纯化方法 | 第40-42页 |
| 2.3 结果和讨论 | 第42-49页 |
| 2.3.1 不同抗生素对S.somaliensis SCSIO ZH66的MIC和高抗性突变株的筛选 | 第42-43页 |
| 2.3.2 突变株与野生型形态差异 | 第43-44页 |
| 2.3.3 通过HPLC分析突变株与野生型差异 | 第44-46页 |
| 2.3.4 RIF1突变株发酵培养基的确定 | 第46-47页 |
| 2.3.5 结构鉴定 | 第47-49页 |
| 2.4 本章小结 | 第49-50页 |
| 第三章 抗性突变株RIF1中RNA聚合酶(RNAP)突变分析及FDM A基因簇转录水平研究 | 第50-66页 |
| 3.1 实验材料 | 第50-51页 |
| 3.1.1 实验试剂 | 第50-51页 |
| 3.1.2 实验仪器 | 第51页 |
| 3.2 实验方法 | 第51-60页 |
| 3.2.1 培养基 | 第51页 |
| 3.2.2 溶液 | 第51-52页 |
| 3.2.3 突变株菌种活化 | 第52页 |
| 3.2.4 PCR扩增rpoB基因片段 | 第52-54页 |
| 3.2.5 载体质粒的制备 | 第54页 |
| 3.2.6 rpoB基因片段转入DH 5α | 第54-56页 |
| 3.2.7 基因测序及序列比较 | 第56页 |
| 3.2.8 链霉菌总RNA的抽提(试剂盒法) | 第56-57页 |
| 3.2.9 链霉菌的RT-PCR | 第57-60页 |
| 3.3 实验结果及分析 | 第60-65页 |
| 3.3.1 突变株RIF1的rpoB基因突变位点分析 | 第60-61页 |
| 3.3.2 突变株RIF1与野生型菌株的FDM A生物合成基因簇转录差异分析 | 第61-65页 |
| 3.4 本章小结 | 第65-66页 |
| 第四章 深海链霉菌RIF1产FDM A培养基优化 | 第66-90页 |
| 4.1 实验材料 | 第66页 |
| 4.1.1 深海链霉菌RIF1 | 第66页 |
| 4.1.2 主要药品和试剂 | 第66页 |
| 4.1.3 实验设备和材料 | 第66页 |
| 4.2 实验方法 | 第66-68页 |
| 4.2.1 实验用主要培养基的配制 | 第66页 |
| 4.2.2 标准品溶液的制备 | 第66-67页 |
| 4.2.3 HPLC样品制备 | 第67页 |
| 4.2.4 HPLC检测条件 | 第67页 |
| 4.2.5 FDM A的HPLC标准曲线制作 | 第67-68页 |
| 4.2.6 深海链霉菌RIF1孢子培养 | 第68页 |
| 4.3 培养基优化 | 第68-73页 |
| 4.3.1 生长条件摸索实验 | 第68-69页 |
| 4.3.2 最适碳源实验 | 第69页 |
| 4.3.3 最适氮源实验 | 第69页 |
| 4.3.4 单因素实验 | 第69-70页 |
| 4.3.5 PB实验 | 第70-71页 |
| 4.3.6 爬坡实验 | 第71-72页 |
| 4.3.7 响应面分析实验 | 第72页 |
| 4.3.8 验证实验 | 第72-73页 |
| 4.4 实验结果与讨论 | 第73-89页 |
| 4.4.0 不同培养时间FDM A的产量 | 第73-74页 |
| 4.4.1 不同浓度利福平对FDM A产量的影响 | 第74-75页 |
| 4.4.2 不同初始pH对FDM A的产量影响 | 第75-76页 |
| 4.4.3 碳源选择实验结果 | 第76-77页 |
| 4.4.4 氮源选择实验结果 | 第77-78页 |
| 4.4.5 单因素实验结果 | 第78-82页 |
| 4.4.6 PBD实验结果 | 第82-84页 |
| 4.4.7 爬坡实验结果 | 第84-85页 |
| 4.4.8 响应面分析法结果 | 第85-88页 |
| 4.4.9 验证实验结果 | 第88-89页 |
| 4.5 小结 | 第89-90页 |
| 第五章 结论与展望 | 第90-92页 |
| 5.1 结论 | 第90-91页 |
| 5.2 展望 | 第91-92页 |
| 参考文献 | 第92-97页 |
| 致谢 | 第97-98页 |
| 附图 | 第98-101页 |
| 毕业生个人简介 | 第101页 |
| 硕士学位期间取得的研究成果 | 第101页 |
