| 摘要 | 第3-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 第一章 绪论 | 第12-24页 |
| 1.1 舞毒蛾 | 第12-15页 |
| 1.1.1 舞毒蛾分布 | 第12页 |
| 1.1.2 舞毒蛾的防治 | 第12-15页 |
| 1.2 几丁质 | 第15-17页 |
| 1.2.1 几丁质的分布 | 第15-16页 |
| 1.2.2 几丁质的分类 | 第16页 |
| 1.2.3 几丁质的生物合成 | 第16页 |
| 1.2.4 几丁质的化学合成 | 第16-17页 |
| 1.2.5 几丁质的功能 | 第17页 |
| 1.3 几丁质酶 | 第17-19页 |
| 1.3.1 几丁质酶的分布 | 第17页 |
| 1.3.2 几丁质酶的分类 | 第17-18页 |
| 1.3.3 几丁质酶酶活的测定方法 | 第18页 |
| 1.3.4 几丁质酶的应用 | 第18-19页 |
| 1.4 昆虫几丁质酶 | 第19-20页 |
| 1.4.1 昆虫几丁质酶的分布 | 第19页 |
| 1.4.2 昆虫几丁质酶分类 | 第19-20页 |
| 1.4.3 昆虫几丁质酶的功能 | 第20页 |
| 1.5 舞毒蛾几丁质酶催化区 | 第20-21页 |
| 1.6 定点突变 | 第21-22页 |
| 1.6.1 定点突变概述 | 第21页 |
| 1.6.2 实验中用到的的定点突变技术 | 第21-22页 |
| 1.6.3 定点突变的潜在应用 | 第22页 |
| 1.7 本论文研究的目的及意义 | 第22-23页 |
| 1.7.1 催化区截短的研究 | 第22-23页 |
| 1.7.2 催化区定点突变的研究 | 第23页 |
| 1.8 本研究课题的主要来源和主要内容 | 第23-24页 |
| 第二章 表达载体构建 | 第24-44页 |
| 2.1 引言 | 第24页 |
| 2.2 实验材料 | 第24-27页 |
| 2.2.1 实验菌株及载体 | 第24-25页 |
| 2.2.2 实验试剂 | 第25-26页 |
| 2.2.3 相关溶液的配置 | 第26-27页 |
| 2.2.4 实验仪器 | 第27页 |
| 2.3 实验方法 | 第27-37页 |
| 2.3.1 引物的设计与合成 | 第27-30页 |
| 2.3.2 舞毒蛾Ⅰ型几丁质酶催化区截短和催化区定点突变序列扩增 | 第30-33页 |
| 2.3.3 重组表达载体构建 | 第33-37页 |
| 2.4 实验结果 | 第37-42页 |
| 2.4.1 舞毒蛾几丁质酶催化区截短载体构建 | 第37-39页 |
| 2.4.2 舞毒蛾几丁质酶催化区定点突变载体构建 | 第39-42页 |
| 2.5 讨论 | 第42-44页 |
| 第三章 舞毒蛾Ⅰ型几丁质酶催化区截短及突变在Bac-to-Bac杆状病毒表达系统中的表达及纯化 | 第44-66页 |
| 3.1 引言 | 第44-45页 |
| 3.2 实验材料 | 第45-48页 |
| 3.2.1 实验菌株及细胞 | 第45页 |
| 3.2.2 实验试剂 | 第45-46页 |
| 3.2.3 相关溶液的配置 | 第46-48页 |
| 3.2.4 实验仪器 | 第48页 |
| 3.3 实验方法 | 第48-57页 |
| 3.3.1 重组截短、突变型舞毒蛾几丁质酶基因真核表达载体的重组构建 | 第48-51页 |
| 3.3.2 细胞培养 | 第51-52页 |
| 3.3.3 蛋白表达 | 第52-56页 |
| 3.3.4 蛋白纯化 | 第56-57页 |
| 3.4 实验结果 | 第57-64页 |
| 3.4.1 四种舞毒蛾几丁质酶催化区截短Bac to Bac系统蛋白表达 | 第57-61页 |
| 3.4.2 六种舞毒蛾几丁质酶催化区定点突变Bac to Bac系统蛋白表达 | 第61-64页 |
| 3.5 讨论 | 第64-66页 |
| 第四章 舞毒蛾Ⅰ型几丁质酶催化区活性位点D143、D145的酶学活性研究 | 第66-78页 |
| 4.1 引言 | 第66页 |
| 4.2 实验材料 | 第66-67页 |
| 4.2.1 实验试剂 | 第66-67页 |
| 4.2.2 实验仪器 | 第67页 |
| 4.3 实验方法 | 第67-69页 |
| 4.3.1 蛋白标准浓度曲线的绘制 | 第67-68页 |
| 4.3.2 蛋白样品浓度测定 | 第68页 |
| 4.3.3 几丁质酶活测定 | 第68页 |
| 4.3.4 最适pH和最适温度 | 第68-69页 |
| 4.3.5 pH稳定性和热稳定性 | 第69页 |
| 4.4 实验结果 | 第69-75页 |
| 4.4.1 蛋白标准浓度曲线 | 第69-70页 |
| 4.4.2 舞毒蛾几丁质酶催化区截短型和突变型几丁质酶活的分析 | 第70-71页 |
| 4.4.3 舞毒蛾几丁质酶催化区突变型几丁质酶最适pH分析 | 第71-72页 |
| 4.4.4 舞毒蛾几丁质酶催化区突变型几丁质酶最适温度的分析 | 第72-73页 |
| 4.4.5 pH稳定性对舞毒蛾几丁质酶催化区突变型酶相对活性的影响 | 第73-74页 |
| 4.4.6 热稳定性对舞毒蛾几丁质酶催化区突变型酶相对活性的影响 | 第74-75页 |
| 4.5 讨论 | 第75-78页 |
| 第五章 结论 | 第78-80页 |
| 参考文献 | 第80-84页 |
| 致谢 | 第84-86页 |
| 攻读硕士学位期间发表的论文及专利 | 第86页 |
