| 摘要 | 第5-6页 |
| ABSTRACT | 第6页 |
| 第一章 糖基转移酶GlyE的研究背景 | 第9-24页 |
| 1.1 引言 | 第9-10页 |
| 1.2 肺炎链球菌中PsrP蛋白的研究进展 | 第10-16页 |
| 1.2.1 致病菌表面糖蛋白SRRPs的研究概述 | 第10-12页 |
| 1.2.2 PsrP蛋白质及其合成通路 | 第12-16页 |
| 1.3 糖基转移酶概述 | 第16-22页 |
| 1.3.1 糖基转移酶的反应机理 | 第18-19页 |
| 1.3.2 糖基转移酶的折叠类型 | 第19-21页 |
| 1.3.3 糖基转移酶的分类 | 第21-22页 |
| 1.4 蛋白质的糖基化的修饰 | 第22页 |
| 1.5 O-glycan的结构类型 | 第22-23页 |
| 1.6 半乳糖基转移酶的研究进展 | 第23-24页 |
| 第二章 实验材料、设备与方法 | 第24-35页 |
| 2.1 实验材料与仪器设备 | 第24-25页 |
| 2.1.1 质粒和菌株 | 第24页 |
| 2.1.2 酶类及其它试剂 | 第24页 |
| 2.1.3 仪器设备 | 第24-25页 |
| 2.2 实验方法 | 第25-35页 |
| 2.2.1 重组质粒的构建与表达检测 | 第25-26页 |
| 2.2.2 蛋白的大量表达和分离纯化 | 第26-27页 |
| 2.2.3 蛋白聚集状态的确定 | 第27-30页 |
| 2.2.4 晶体的优化与数据收集解析 | 第30-32页 |
| 2.2.5 金属离子的鉴定 | 第32页 |
| 2.2.6 GlyE酶学参数测定 | 第32-35页 |
| 第三章 实验结果分析与讨论 | 第35-64页 |
| 3.1 GlyE的一级序列分析 | 第35页 |
| 3.2 GlyE蛋白的表达检测 | 第35-36页 |
| 3.3 GlyE蛋白的镍柱分离及分子筛纯化 | 第36-38页 |
| 3.4 GlyE蛋白在溶液状态下聚集度的确定 | 第38-39页 |
| 3.5 GlyE蛋白的晶体优化及结构解析 | 第39-42页 |
| 3.5.1 GlyE的晶体初筛 | 第39-40页 |
| 3.5.2 GlyE蛋白的微晶接种法优化和数据收集 | 第40-41页 |
| 3.5.3 GlyE结构解析 | 第41-42页 |
| 3.6 GlyE的结构与活性位点的具体分析 | 第42-47页 |
| 3.6.1 GlyE的三级结构 | 第43-45页 |
| 3.6.2 GlyE的apo-form与UDP-binding form的三级结构比较 | 第45页 |
| 3.6.3 GlyE的催化活性中心分析 | 第45-47页 |
| 3.7 GlyE结构与其同源结构的比较分析 | 第47-55页 |
| 3.7.1 GlyE整体结构分析 | 第47-49页 |
| 3.7.2 GlyE N-端结构域的分析 | 第49-51页 |
| 3.7.3 GlyE的C-端结构域分析 | 第51-53页 |
| 3.7.4 GlyE结构的新意 | 第53-55页 |
| 3.8 GlyE体外酶活的测定 | 第55-58页 |
| 3.8.1 GlyE体外具体酶活参数的测定 | 第56页 |
| 3.8.2 二价金属离子对GlyE酶活的影响 | 第56-57页 |
| 3.8.3 GlyE可能的催化机制 | 第57-58页 |
| 3.9 GlyE底物特异性及其结构的推广 | 第58-62页 |
| 3.9.1 GlyE的结构在psrP基因簇中具有代表性 | 第58-60页 |
| 3.9.2 GlyE在其他物种中的保守性 | 第60-62页 |
| 3.10 小结 | 第62-64页 |
| 第四章 硕士期间参与的其他工作 | 第64-74页 |
| 4.1 肺炎链球菌细胞壁中磷壁酸合成相关蛋白的研究 | 第64-74页 |
| 4.1.1 相关背景简介 | 第64-66页 |
| 4.1.2 引物设计 | 第66-67页 |
| 4.1.3 LicB与TacF的克隆、表达与纯化 | 第67-69页 |
| 4.1.4 LicD1的克隆、表达与纯化 | 第69-70页 |
| 4.1.5 TarJ的克隆与表达 | 第70-74页 |
| 参考文献 | 第74-81页 |
| 附录 | 第81-96页 |
| 致谢 | 第96页 |
